前列腺小體外泌蛋白檢測在慢性前列腺炎診斷中的應用

趙寅生，易小敏，屠昌明，黃其峰，吳黎黎，賈健安

(中國人民解放軍聯勤保障部隊第901醫院a.檢驗科，b.泌尿外科，合肥 230031)

前列腺炎是成年男性中的一種常見病，相關研究表明成年男性中前列腺炎發病率約為8.2%[1]，慢性前列腺炎對患者生活質量具有嚴重的生理及心理上的影響[2]。根據1997年美國國立衛生研究院（National Institutes of Health，NIH）對前列腺炎的分類，即 NIH分類法[3]，前列腺炎可分為3型：NIH-Ⅱ型：慢性細菌性前列腺炎；NIH-Ⅲ型：慢性前列腺炎/慢性骨盆疼痛綜合征；NIH-Ⅳ型：無癥狀前列腺炎。由于缺乏特異性的診斷指標，前列腺炎的診斷及病情評估需要較多的臨床評估方法及鑒別診斷，傳統的檢查方法包括尿液分析、前列腺按摩液檢查和直腸指檢[4]，后兩種方法對患者具有一定侵入性，患者就診體驗較差，且不同操作者之間存在較大的操作差異，因此尋找一種無侵入性同時又準確的診斷指標具有重要的臨床意義。

前列腺小體是由前列腺上皮細胞分泌的一種納米級囊泡，在精液及前列腺液中含量較多。通常情況下，少量前列腺小體分泌至尿道中，隨尿液排出[5]，當前列腺發生炎癥時，尿液中前列腺小體中部分蛋白成分可顯著升高，其中前列腺小體外泌蛋白（prostatic exosomal protein，PSEP）升高明顯，是慢性前列腺炎的潛在指標，因此本研究評價了該指標在慢性前列腺炎診斷中的價值。

1 材料與方法

1.1 研究對象 依據《前列腺炎診斷治療指南(2014版)》[6]中慢性前列腺炎臨床診斷標準，納入自 2018年7～10月于我院就診的慢性前列腺炎患者 102例，選擇同期于我院體檢健康的70例健康男性作為對照組。慢性前列腺炎患者及健康對照組均常規行尿常規分析、PSEP測定。在經過醫院倫理委員會討論通過后進行該研究。同時排除急性前列腺炎患者、48h內有性生活者、前列腺癌患者、有嚴重的臟器功能疾病、由于行為障礙不能配合者、二周以內插入導尿管者、有嚴重的肛周部位疾病及不適合做前列腺按摩檢測者、病情危重，難以對安全性和有效性做出確切評價者。

1.2 試劑和儀器 酶標儀購自于美國伯樂公司，PSEP試劑盒購自江蘇太倉昂科生物技術有限公司。

1.3 方法 采集慢性前列腺炎患者前列腺按摩前中段尿，收集健康體檢者隨機尿，均置入－80℃冰箱保存備用。根據PSEP試劑盒操作說明對收集的尿液樣本采用間接 ELISA方法進行檢測，根據試劑盒內的不同濃度標準品A值建立實驗標準曲線，將患者標本的檢測數值同標準孔數值進行比較，計算測試樣本的PSEP濃度值。比較前列腺炎組與對照組尿液PSEP濃度的差異，同時建立ROC曲線來初步確定一個最佳診斷界值(Cutoff值),據此值來計算靈敏度和特異度。

1.4 統計學分析 運用SPSS 16.0統計軟件進行統計學分析。慢性前列腺炎患者和健康對照組的PSEP差異比較采用秩和檢驗，以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 前列腺炎組與對照組PSEP比較 前列腺炎組與對照組中位年齡分別為36（25～56）歲及38（27～59）歲，年齡分布差異無統計學意義（P＞0.05）。兩組尿液PSEP結果均呈非正態分布。前列腺炎組PSEP顯著高于對照組[3.002（1.728～3.966）ng/ml vs 0.869（0.565～1.094）ng/ml]，差異有統計學意義（P＜0.001）。

2.2 ROC結果 見圖1。對前列腺小體外泄蛋白檢測結果進行ROC曲線擬合，ROC曲線下面積為0.922，選擇Youden指數最大的點對應的值作為慢性前列腺炎的診斷標準，得出Cutoff值為1.238 ng/ml,相對應的敏感度為86.27%，特異度為90%。

圖1 ROC曲線

3 討論

慢性前列腺炎的癥狀包括骨盆區域疼痛、尿道刺激癥、神經癥狀及性功能障礙，其臨床表現缺少特異性，診斷主要依靠前列腺按摩液常規檢查[6]（前列腺炎診斷治療指南），患者對前列腺按摩液常規檢查接收度較差，從而間接影響了疾病的診治，因此尋找一種方便快捷的無侵入性指標具有重要的意義。

前列腺小體結構為亞細胞的囊泡狀，生理功能多樣廣泛，直徑為40～500nm，通過前列腺上皮細胞胞吐作用后再分泌進入前列腺液和尿液[5，7]。前列腺小體的脂質成分大部分為鞘磷脂，也含有少量的核酸成分，如DNA，mRNA，miRNA等小片段。同時前列腺小體還包含百余種蛋白質成分：其中包括酶類，運輸和結構類蛋白，信號轉導蛋白，GTP結合蛋白，注釋蛋白，分子伴侶等等[7]。

由于解剖結構的關系，前列腺小體容易進入前列腺液和尿液中。隨著研究深入，PSEP與前列腺疾病的關系引起研究者的廣泛關注，因組織受到炎細胞浸潤，慢性前列腺炎患者體內會釋放出各種活性物質和趨化因子，在精液中前列腺小體的抗菌功能比中性粒細胞發揮更強。前列腺小體的抗氧化性可起到中和白細胞的ROS作用。前列腺小體具有抗氧化抗菌功能的關鍵是其特殊的脂質結構和成分，因此在前列腺炎疾病中可以檢測到前列腺小體蛋白[8].

本研究中采用了ELISA方法，檢測了102例慢性前列腺炎患者及70例健康體檢者尿液中PSEP含量。與健康人群相比，慢性前列腺炎患者PSEP濃度平均高達3.002（1.728～3.966）ng/ml，顯著高于健康人群[0.869（0.565～1.094）ng/ml]（P＜0.001）。其鑒別慢性前列腺炎患者與健康人群的ROC曲線下面積高達0.922，高于相關研究結果[9]，本研究中根據Youden指數選擇的最佳實驗室臨界值設為1.238 ng/ml，與相關研究結果接近[10]，稍高于試劑盒推薦的慢性前列腺炎診斷臨界值（1.2ng/ml），提示各實驗室在實際應用時應建立本實驗室的參考區間。

由于PSEP檢測使用尿液標本，具有極好的患者依從性，同時其診斷敏感度與特異度均較高，因此具備成為慢性前列腺炎診斷指標的潛力，具有較好的臨床應用價值。