外周血HBP，IL-6，CD64指數，PCT，CRP和SAA水平檢測在血流感染診斷中的應用價值研究

任繼欣，郭彥言

（1.唐山市豐潤區中醫醫院檢驗科，河北唐山 064000；2.唐山市工人醫院檢驗科，河北唐山 063000）

血流感染是指外界的細菌或真菌經由體表的入口或是感染的傷口進入血液系統后在人體血液內繁殖并隨血流在全身播散，出現血流感染的患者如在早期得不到快速準確的診斷和治療往往會發生導致器官功能嚴重衰竭的膿毒血癥，可引起休克、彌散性血管內凝血(DIC),甚至死亡。血液細菌培養雖然是血流感染診斷的金標準，但其培養分離病原菌的過程復雜且耗時長，陽性率不高且存在皮膚污染等情況，無法及時準確的為臨床提供血流感染早期的診斷依據，選擇合適的檢測指標對血流感染早期診斷、病情評估、治療選擇及預后均具有十分重要的臨床意義。隨著醫療水平、檢驗儀器自動化程度的提高，分子生物學、免疫學的不斷發展，新的診斷方法層出不窮。目前臨床上常用的檢測感染的炎性指標有很多種，如：白細胞（WBC）、中性粒細胞（NEU%）、降鈣素原（PCT）[1]、C-反應蛋白（CRP），肝素結合蛋白（HBP）、白介素-6（IL-6）、血清淀粉樣蛋白A（SAA）、中性粒細胞（CD64）指數、紅細胞沉降率、腫瘤壞死因子等，各種檢測指標各具特色，本實驗比較外周血中的多種指標，以尋找敏感度好特異度高的項目來提高血流感染早期的診斷，為臨床的診療提供及時準確的依據，現具體報道如下：

1 材料與方法

1.1 研究對象 收集2018年度血培養陽性并確診為血流感染的患者95例，將其分為兩組：細菌感染組和真菌感染組。其中細菌感染組75例，男性41例，女性34例，平均年齡56歲；真菌感染組20例，男性11例，女性9例，平均年齡60歲；并選取同年度健康體檢者100例作為健康對照組（近3個月內無感染性疾病、過往無重大疾病史），其中男性58例，女性42例，平均年齡51歲。三組研究對象基本資料經統計學分析，差異無統計學意義（P＞0.05）。

1.2 儀器和試劑 TECAN sunrise 酶標儀(瑞士帝肯公司)；血漿HBP使用杭州中翰盛泰生物HBP定量檢測試劑盒（ELISA法）；IL-6試劑盒由上海康朗生物科技有限公司提供（ELISA法）；中性粒細胞CD64指數檢測由美國BD公司提供VIDAS熒光分析儀和FACSAria II 流式細胞儀及熒光染料標記的單克隆抗體；PCT由深圳新產業生物工程有限公司提供（化學發光法）；SAA由北京普邁德科技公司提供（膠體金免疫層析法）；CRP由深圳普門科技（散射比濁法）提供；細菌培養鑒定采用法國梅里埃VITEK2 Compact和3D 240全自動血液培養儀。

1.3 檢測方法 患者均在入院初期（6h內）空腹且使用抗生素之前采集靜脈血，嚴格參照各儀器標準化操作規程和試劑盒說明書分別進行HBP，IL-6，中性粒細胞CD64指數，PCT，CRP，SAA和血培養的檢測。所有儀器運轉正常，試劑在有效期內且各項室內質控合格；各項檢測指標陽性判定標準：HBP ＞120 ng/ml；IL-6 ＞160 ng/ml；PCT ≥0.5ng/ml；CRP ＞10mg/L；SAA ＞5mg/L；血培養陽性（不同部位、不同時間點、多次采集外周血）；中性粒細胞CD64指數按下列公式計算：中性粒細胞CD64感染指數=中性粒細胞CD64/淋巴細胞CD64。

1.4 統計學分析 采用SPSS軟件20.0進行統計學分析，正態分布的計量資料以均數±標準差（±s）表示，兩組比較采用t檢驗，以P＜0.01為差異有統計學意義，并采用ROC曲線評價各炎性指標的診斷效能。

2 結果

2.1 血流感染組與健康對照組外周血HBP，IL-6，CD64指數，PCT，CRP，SAA濃度水平比較 見表1。以血培養陽性為金標準，與健康對照組比較，血流感染組HBP，IL-6，CD64指數，PCT，CRP和SAA濃度水平顯著性升高，差異均有統計學意義（P＜0.01）。

表1 血流感染組與健康對照組外周血HBP，IL-6，CD64指數，PCT，CRP，SAA濃度水平比較（±s）

表1 血流感染組與健康對照組外周血HBP，IL-6，CD64指數，PCT，CRP，SAA濃度水平比較（±s）

項 目 血流感染組（n=95）健康對照組（n=100）t p HBP(ng/ml) 51.06±10.43 6.34±2.01 11.62 ＜0.001 IL-6(ng/ml) 39.262±26.71 10.19±4.21 9.07 ＜0.001 CD64指數（%）52.1±18.2 20.1±4.0 11.64 ＜0.001 PCT(ng/ml) 8.41±0.33 0.04±0.02 6.14 ＜0.001 CRP(mg/L) 57.39±4.69 2.78±0.45 13.21 ＜0.001 SAA(mg/L) 81.83±30.67 3.26±0.51 14.61 ＜0.001

2.2 細菌感染組與真菌感染組外周血HBP，IL-6，CD64指數，PCT，CRP，SAA濃度水平比較 見表2。以血培養陽性為金標準，細菌感染組與真菌感染組相比HBP，IL-6，CD64指數，PCT，CRP和SAA濃度水平升高明顯,差異均有統計學意義（P＜0.01）。

表2 細菌感染組、真菌感染組外周血HBP，IL-6，CD64指數，PCT，CRP，SAA濃度水平比較（±s）

表2 細菌感染組、真菌感染組外周血HBP，IL-6，CD64指數，PCT，CRP，SAA濃度水平比較（±s）

項 目 細菌組（n=75）真菌組（n=20）t p HBP(ng/ml) 65.98±15.56 35.61±13.66 9.11 ＜0.001 IL-6(ng/ml) 54.22±46.79 20.18±13.27 11.26 ＜0.001 CD64指數（%）69.1±20.1 29.9±2.1 12.87 ＜0.001 PCT(ng/ml) 10.49±0.28 0.82±0.12 8.39 ＜0.001 CRP(mg/L) 65.69±6.17 22.85±4.21 12.19 ＜0.001 SAA(mg/L) 101.25±35.63 12.17±3.62 15.72 ＜0.001

2.3 診斷效能評價 采用ROC曲線評價各炎性指標的診斷效能，并分別計算它們的曲線下面積（AUC）、敏感度、特異度。見表3。

3 討論

近年臨床上血流感染的發病率、死亡率有逐年增高趨勢,眾所周知對血流感染患者的早期識別評估和予以針對性的干預是提高救治成功率的關鍵，但目前國內尚無統一規范的篩查診斷方法，隨著檢驗技術和設備的發展不斷改進，在原有的傳統炎性指標基礎上又出現許多新的檢測指標。眾多的檢測項目各有其特點，在實際工作中如何選擇，既可以及時準確診斷又可以合理利用醫療資源也是至關重要。HBP稱為天青殺素或者CAP37，由SHARER等[2]在1984年被首次分離出,HBP是由激活的中性粒細胞釋放的一種多功能可分泌蛋白[3]，健康人血中HBP水平很低（＜10 ng/ml），可作為嚴重膿毒癥/膿毒性休克的一種早期診斷標志物，有研究已證實HBP與膿毒性休克的發生和疾病的分層高度相關，未來可能作為指導膿毒癥/膿毒性休克診斷和治療的特異標志物[4]

表3 外周血 HBP，IL-6，CD64指數，PCT，CRP和SAA濃度水平診斷效能比較

IL-6是由212個氨基酸組成的多功能糖蛋白，具有廣泛的生物學效應，當機體出現炎癥反應時水平明顯升高；且較其它感染因子出現的更早，但也有研究發現其它非感染因素也會引起IL-6的非特異升高，因此它的適用存在一定的局限性[5]。

CD64在外周血中性粒細胞表面僅低水平表達，對IgG抗體具有良好的親和力，其對感染性疾病有著較高的早期診斷價值[6]。目前已有報道通過流式細胞儀研究外周血中性粒細胞CD64在早期診斷感染中的價值[7]。

PCT主要是甲狀腺C細胞產生的116個氨基酸，是人類降鈣素前體蛋白，1993年Assicot等首次將其作為膿毒癥的診斷指標，此后PCT作為血流感染和膿毒癥的標志物被廣泛研究[8-9]，目前已被普遍接受作為血流感染患者膿毒癥的診斷指標[10]。CRP是傳統的被認識較早的急性時相反應蛋白，健康人血清CRP水平很低(＜5mg/L），在病毒感染時不升高或升高不明顯，在細菌感染炎癥早期即可明顯升高,且升高幅度與感染程度呈正相關，但是一些非感染性因素也可以引起檢測結果的升高。SAA是淀粉樣變組織沉淀的淀粉樣蛋白A的前體，是一個非常敏感的急性時相反應蛋白，在細菌、病毒、真菌感染時會有不同程度的升高，在細菌感染發生后4～6h血清SAA濃度會驟升，8～12h達峰值，基于此近年開始有研究者大量關注SAA在血流感染膿毒癥中的作用[11]。

通過本實驗顯示：HBP相對于其他感染因子在血流感染早期升高更快，特異度更強，其反應機制為：中性粒細胞通常由炎性因子激活，進而促進HBP的釋放[12]，而HBP能通過影響血管通透性功能對單核細胞、巨噬細胞等產生趨化效應，進而導致中性粒細胞聚集產生級聯放大效應，從而形成“炎癥因子風暴效應”[13]，IL-6的敏感度尚可，特異度略差，可以聯合應用。中性粒細胞CD64指數在實驗檢測上屬流式細胞術，對實驗室的硬件設備、人員的操作技術要求非常高，實驗過程也復雜繁瑣，這在一定程度上影響限制了該項目的應用和普及。PCT優點是不會被降解且不受內激素水平及免疫抑制劑的影響，穩定性好，體內半衰期長，缺點是在一些非感染情況也會引起PCT的急劇升高。有報道PCT的釋放與革蘭陰性菌的感染密切相關[14]，所以在臨床應用中存在一定的局限性，必須綜合其它指標系統分析。SAA僅次于HBP，PCT是近年相關的研究報道已非常多的項目，但半衰期很短并在疾病的恢復期迅速下降，對其局限性已有充分的認識，作為傳統經典的急性時相反應蛋白，臨床和實驗室對CRP的認識和使用已經相當普及，雖特異度欠佳但敏感度、檢測結果穩定性尚可，且操作簡便、收費低易于基層醫院常規開展。

通過本實驗表明，對于臨床高度懷疑血流感染的患者，不僅要及時進行血液細菌培養的檢查，還應該根據實驗室的實際情況，及時檢測一些敏感度特異度都較高的炎癥因子，比如HBP，PCT，IL-6和SAA等，可以提高血流感染的早期診斷，如果有條件可以聯合檢測，以提高實驗結果的特異度和敏感度，綜合分析及時診斷。目前已有研究表明聯合SAA，PCT和CRP有助于對膿毒性休克的早期診斷和及時調整治療方案，在SOFA的基礎上提高預后的敏感度[15]，劉振國等[16]也曾報道過聯合降鈣素原(PCT)、血乳酸(Lac)、內毒素水平的檢測，有利于對膿毒癥患者的病情嚴重程度及預后進行評估。

由于實驗室消耗、研究條件及患者病情所限，本次實驗未對臨床已經確診血流感染患者的上述指標進行序貫的動態監測（疾病治療過程中），未對上述指標對疾病的分級和轉歸的預測作用進行更深入的探討，這是本實驗當中尚存的不足之處，未來仍需繼續補充和完善。