重組酶聚合酶擴增技術檢測新型隱球菌DNA

劉曄華，穆紅，張堅磊，江雁，劉萍，王猛

天津市第一中心醫院，天津300192

新型隱球菌是一種條件致病菌，存在于土壤、鴿糞等環境中，主要感染免疫力低下人群，感染后可侵犯患者皮膚、肺部和中樞神經系統，導致嚴重的肺部感染和腦膜炎[1]。隱球菌感染是最常見的中樞神經系統性真菌感染，可發生在任何年齡組，免疫抑制或免疫缺陷患者易急性起病[2～5]，形成該菌的體內播散性感染，致死率很高。因此，新型隱球菌快速診斷和及時治療對預后至關重要。目前臨床常用的新型隱球菌檢測方法為病原體培養法、墨汁染色法和隱球菌莢膜抗原檢測，培養法是診斷隱球菌感染的金標準，但是由于新型隱球菌生長緩慢，至少需要72 h給出結果。加之大多數情況通過培養并不能獲得陽性結果，因此該方法無法滿足臨床大量樣本的高效即時檢測(POC)，墨汁染色只適合腦脊液標本的檢測，且陽性率偏低，新型隱球菌莢膜多糖抗原的靈敏度和特異性均較好，但與類風濕因子、多種細菌病原體存在交叉反應[6]，可導致檢測結果出現假陽性。基于該病原體核酸檢測的方法尚未應用于臨床。重組酶聚合酶擴增(RPA)技術是一種新型恒溫核酸擴增技術，利用T4噬菌體的重組酶介導核酸引物特異識別相應的DNA位點，進而啟動聚合酶擴增反應[7]，反應總過程<1 h。2019年5月～2020年1月，本研究采用實時熒光RPA技術建立新型隱球菌的快速核酸檢測方法，旨在為急診診治可疑危重患者提供核酸層面的快速檢測新型隱球菌的方法。現報告如下。

1 材料與方法

1.1 菌株 ①是建立RPA反應體系的新型隱球菌標準菌株ATCC32609(購自北京普天同創生物科技有限公司)。②是RPA反應體系的陰性……