不同品種青稞中總多酚、總黃酮含量及抗氧化性比較

夏 陳 向卓亞 朱永清 鄧俊琳 楊開俊 劉廷輝 陳 建 林長彬 李 可 趙旭珠

(1. 四川省農業(yè)科學院農產品加工研究所，四川 成都 610066;2. 四川甘孜州農業(yè)科學研究所，四川 康定 626000)

青稞(HordeumvulgareLinnvar. nudum Hook.f.)，禾本科大麥屬植物，因籽粒外露，又被稱為裸大麥、裸麥和元麥[1]，是中國藏民的主要糧食和釀造青稞酒的主要原料，分布于青海、西藏和四川甘孜州、阿壩州等高寒地區(qū)[2]。因籽粒顏色差異青稞被分為黑、紫、藍、白等類型[3]。研究[4-5]發(fā)現，青稞內部營養(yǎng)成分差異與籽粒顏色密切相關，顏色越深其營養(yǎng)價值越高。因富含葡聚糖、多種多酚類化合物及黃酮類化合物，青稞能有效降血脂、降血糖、預防心血管疾病、提高人體免疫力及抗病毒、抗癌等[6]。

徐菲等[7]研究發(fā)現青海青稞中蛋白質含量最高，而四川青稞中總淀粉和灰分含量最高。孟勝亞等[8]發(fā)現藏青2000和1127號青稞中β-葡聚糖和粗蛋白含量較高。而關于不同地區(qū)、不同品種和不同粒色青稞的功能成分及生物活性的研究較少，且多集中于對不同產地青稞總多酚、總黃酮與抗氧化性的描述性統(tǒng)計學分析，尚未有研究將不同產地、品種與粒色青稞中功能成分進行集中比較分析。試驗擬通過對西藏拉薩和四川甘孜州的11種青稞進行活性成分分析，探討不同品種和不同產地青稞中總多酚、總黃酮含量及其抗氧化活性差異，以期為青稞品種的進一步開發(fā)研究及品類培育種植提供參考。

1 材料與方法

1.1 原料

選取11種青稞(收獲時間為2017年9月)作為試驗樣品(見表1)，經粉碎、過40目篩，樣品粉末密封后于-18 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2 試劑

福林酚、乙醇、甲醇、鹽酸、氯化鉀、硝酸鋁、氫氧化鈉、無水乙醇、亞硝酸鈉：分析純，成都市科龍化工試劑廠；

水溶性維生素E、沒食子酸、蘆丁(純度≥98%)：北京索萊寶科技有限公司；

其他試劑均為國產分析純。

1.3 試驗方法

1.3.1 總黃酮含量的測定 參照羅磊等[9]的方法，略作修改。用80%甲醇溶液超聲提取青稞中黃酮，向提取液中加入10 μL質量分數為 25%的NaNO2反應6 min，加入10 μL 10% AlCl36H2O反應5 min后，分別加入30 μL 1 mol/L NaOH、100 μL蒸餾水，測定510 nm處吸光值。以蘆丁質量濃度為橫坐標，吸光值為縱坐標，繪制標準曲線，其線性回歸方程為y=5.208x+0.041，R2=0.999,線性范圍0～175 μg/mL。

表1 11種青稞信息表

1.3.2 總多酚含量的測定 參照申迎賓等[10]的方法略作修改，提取液中加入20 μL福林酚試劑，混合均勻，放置5 min，加入質量分數為5%的Na2CO3溶液0.16 mL，室溫下避光反應60 min，測定765 nm處吸光值。以沒食子酸質量濃度為橫坐標，吸光值為縱坐標，繪制標準曲線，其線性回歸方程為y=0.004x+0.082，R2=0.999，線性范圍4.29～275.00 μg/mL。

1.3.3 抗氧化活性分析

(1) ABTS+自由基清除能力：參照Cheng等[11]的方法略作修改。取20 μL青稞消化液，加入20 μL 80%甲醇溶液和160 μL ABTS混合溶液(7 mmol/L ABTS溶液與2.45 mmol/L過硫酸鉀)，混勻避光反應6 min，測定734 nm處吸光值。以水溶性VE的質量濃度為橫坐標，吸光值為縱坐標，繪制標準曲線，其回歸方程y=-0.006x+0.471 4，R2=0.997 1，線性范圍0.0～47.5 μg/mL。

(2) DPPH自由基清除能力：參照向卓亞等[12]的方法略作修改。取50 μL待測液，加80 μL 80%甲醇(含1%甲酸)，再加入100 μL 0.2 mmol/L DPPH溶液，混勻，避光反應30 min，測定517 nm處吸光值。以水溶性VE質量濃度為橫坐標，吸光值為縱坐標，繪制標準曲線，得回歸方程y=0.947 2x-2.95，R2=0.996 0，線性范圍5.94～95.00 μg/mL。

1.4 數據處理

采用SPSS 17.0軟件進行聚類分析，通過單因素方差分析(ANOVA)和Duncan多重比較方法進行顯著性分析，P<0.05表示差異具有顯著性，結果用(平均值±標準差)表示(n=3)。

2 結果與分析

2.1 總多酚含量

由表2可知，11種青稞總多酚含量為0.74～1.49 mg/g，變異系數達28.43%，說明青稞基因型的差異對總多酚含量影響較大[13]。其中QB35號青稞總多酚含量為1.49 mg/g，接近劉小嬌等[14]測定的最大值(1.2～1.5 mg/g)。西藏青稞X9、X10和X11中總多酚含量顯著高于四川青稞，說明產地環(huán)境條件是影響青稞籽粒品質和活性成分素含量的首要因素，種植環(huán)境的差異影響青稞中多酚類物質的組成及含量[13]，與Abdel-Aal等[15]的結果一致。除S5外，相同產地青稞品種中深色青稞總多酚含量略高于淺色青稞的，四川青稞S1含量為1.04 mg/g，顯著高于其余淺色青稞。閻秀峰等[16]發(fā)現在低溫和干旱條件下，多酚類化合物和黃酮類化合物等植物的次生代謝產物含量均較高。朱勇[17]發(fā)現藏青25、藏青320、長黑青稞和肚里黃4種青稞中酚類化合物含量受青稞顏色的影響。Gong等[18]發(fā)現有色青稞總多酚含量高于無色青稞的。

2.2 總黃酮含量

由表2可知，11種青稞總黃酮含量為0.09～0.57 mg/g，變異系數高達60.71%，說明青稞基因型的差異對總黃酮含量影響較大。其中青稞QB35號總黃酮含量為0.57 mg/g，接近邢玉曉[19]測定的最大值(0.32～0.58 mg/g)。西藏青稞X9、X10和X11中總黃酮含量顯著高于四川青稞，說明環(huán)境條件和品種對青稞中總黃酮含量影響顯著。

2.3 抗氧化活性比較

由表3可知，DPPH自由基清除能力最高的可達4.18 mg/g，且不同品種青稞DPPH自由基清除能力存在顯著差異；而ABTS自由基清除能力差異更明顯，但與總多酚和總黃酮結果一致。西藏青稞提取物均表現出較強的ABTS自由基清除能力，且顯著高于四川青稞的。

表3 11種青稞的抗氧化活性?

2.4 相關性分析

由表4可知，ABTS自由基清除能力與青稞中總多酚和總黃酮含量呈極顯著正相關，說明青稞中多酚類物質和黃酮類物質對其表現出的抗氧化性起著重要的作用，與Zheng等[20]的結論一致。

2.5 聚類分析

由圖1可知，11種青稞樣品主要分為兩大類。其中S1、S2、S3、S4、S5、S6、S7和S8為一類，其產地為四川；X9、X10和X11為一類，其產地為西藏。西藏青稞總多酚、總黃酮含量顯著高于四川青稞，說明通過青稞中總多酚、總黃酮含量可以進行產地的大致區(qū)分，與總多酚、總黃酮含量結果一致。當進一步縮短類間距時，11種青稞樣品主要分為3大類，其中S2、S3、S4、S6和S8為第一類，S5、S7和S1為第二類，X9、X10和X11為第三類。第二類青稞品種均為黑青稞，第一類為白青稞。綜上，通過聚類分析能將不同品種青稞的產地進行大致區(qū)分，為其品種的進一步開發(fā)利用提供依據。

3 結論

結合對青稞主要活性成分研究現狀，對11種青稞的總黃酮、總多酚含量和抗氧化活性進行測定分析，發(fā)現西藏青稞中總多酚、總黃酮含量顯著高于四川青稞的，且與青稞抗氧化性呈極顯著正相關；不同品種青稞中總多酚、總黃酮含量存在顯著差異，其中西藏QB31、QB35和隆孜青稞中總多酚、總黃酮含量顯著高于其他品種的。后續(xù)可擴大更多產地及品種數量且對青稞中多酚化合物及其他功能活性進行深入研究。

表4 青稞中總多酚、總黃酮和抗氧化活性的相關性分析?

圖1 11種青稞種質的聚類圖