深圳市光明區新生兒耳聾基因篩查結果分析

諶玉佳 楊江濤 莊利明 柳國勝 游敏玲 吳本清

摘要：目的? 分析深圳市光明區所屬3家醫院出生的新生兒耳聾基因檢測結果，以了解深圳光明區新生兒耳聾基因的突變攜帶情況。方法? 采集深圳市光明區2017年5月～2018年11月出生的新生兒足跟血16249份，用PCR+導流雜交法檢測中國人群中常見的4個耳聾易感基因（GJB2、GJB3、SLC26A4、12SrDNA），其中2017年5月～2018年3月收集的標本檢測4個常見耳聾基因的9個突變位點，2018年3～11月收集的標本檢測4個常見基因的15個突變位點，分析新生兒遺傳性耳聾基因突變攜帶率及突變位點分布情況。結果? 16249名新生兒中，檢出攜帶突變耳聾基因575例，總陽性率3.53%，其中檢測4基因9位點樣本數為8448例，突變樣本為262例，突變率為3.10%;檢測4基因15位點樣本數為7801例，突變樣本為313例，突變率為4.01%。所有突變基因中，GJB2基因（1.96%）和SLC26A4基因的突變率最高（1.21%）。結論? 深圳市光明區新生兒遺傳性耳聾基因突變率低于全國平均水平，基因突變主要以GJB2基因、SLC26A4基因為主，擴大基因位點數量的檢測有利于降低漏篩率;早發現、早干預可減少耳聾的發生。

關鍵詞：遺傳性耳聾;新生兒;基因突變;基因芯片;篩查

中圖分類號：R764.43? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?文獻標識碼：A? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?DOI：10.3969/j.issn.1006-1959.2020.13.039

文章編號：1006-1959（2020）13-0134-04

Analysis of Genetic Screening Results of Newborn Deafness in Guangming District，Shenzhen

CHEN Yu-jia1，2，YANG Jiang-tao3，ZHUANG Li-ming2，LIU Guo-sheng1，YOU Min-ling4，WU Ben-qing2

（1.The First Clinical School of Jinan University，Guangzhou 510632，Guangdong，China;

2.Department of Traditional Chinese Medicine，Shenzhen Hospital，University of Chinese Academy of Sciences，

Shenzhen 518106，Guangdong，China;

3.Shenzhen Aiwan Medical Laboratory，Shenzhen 518000，Guangdong，China;

4.Luohu District Traditional Chinese Medicine Hospital，Shenzhen 518000，Guangdong，China）

Abstract：Objective? To analyze the detection results of deafness genes in neonates born in 3 hospitals in Guangming district of Shenzhen， so as to understand the mutation carrying status of deafness genes in newborns in Shenzhen Guangming district.Methods? Collecting 16249 blood samples of newborns born from May 2017 to November 2018 in Guangming District， Shenzhen， and use PCR + flow-through hybridization to detect 4 common deafness susceptibility genes （GJB2， GJB3， SLC26A4， 12SrDNA）， among which the specimens collected from May 2017 to March 2018 detected 9 mutation sites of 4 common deafness genes， and the specimens collected from March to November 2018 detected 15 mutation sites of 4 common genes，the mutation carrying rate and distribution of mutation sites of hereditary deafness genes in newborns were analyzed.Results? Among 16249 newborns， 575 cases with mutation deafness genes were detected， with a total positive rate of 3.53%， of which 8448 samples were detected for 9 sites of 4 genes， 262 samples were mutated， and the mutation rate was 3.10%; 4 genes were detected 15 the number of loci samples was 7801， the mutation samples were 313， and the mutation rate was 4.01%. Among all the mutated genes， GJB2 gene （1.96%） and SLC26A4 gene had the highest mutation rate （1.21%）.Conclusion? The mutation rate of hereditary deafness genes in the Guangming District of Shenzhen City is lower than the national average. The genetic mutations are mainly GJB2 gene and SLC26A4 gene. Enlarging the detection of gene loci is helpful to reduce the screening rate; early detection and early intervention can reduce the occurrence of deafness.

Key words：Hereditary deafness;Neonate;Gene mutation;Gene chip;Screening

我國每年將新增約2萬名聽力障礙新生兒，占每年出生新生兒的1%，其中60%與遺傳因素有關[1]。新生兒常見耳聾基因突變篩查已在全國多地區展開[2，3]。研究顯示，雖然目前已知90多種基因與NSHL有關，但在我國，80%NSHL患者主要涉及以下4種致聾基因：GJB2、GJB3、SLC26A4、線粒體12SrRNA[4]。通過大規模新生兒耳聾基因篩查，可以了解區域耳聾基因致病位點的分布和發病情況，并給予早期有效的防治措施，目的是早發現、早干預、早治療[5]。本研究對深圳市光明區出生的16249例新生兒的四種耳聾易感基因的檢測結果進行了分析。

1對象與方法

1.1研究對象? 以2017年5月～2018年11月在中國科學院大學深圳醫院（東院區、西院區）、深圳市寶田醫院三家醫院出生的16249例新生兒為研究對象，其中男性63090例，女性為46841。經同監護人知情、同意、自愿參與調查，并由監護人認真閱讀并簽署新生兒耳聾基因篩查知情同意書。

1.2標本采集? 新生兒出生后72 h后，充分哺乳8次后采集足跟末梢血3個血斑，每個血斑直徑大于8 mm，自然晾干后置于封口袋內，密閉保存于2 ℃～8 ℃冰箱內。

1.3方法? 按照耳聾基因檢測試劑盒（PCR+導流雜交法）的操作說明書，對2017年5月～2018年3月所收標本檢測4個常見耳聾易感基因（GJB2、SLC26A4、線粒體DNA和GJB3）的9個突變位點，包括235delC、176del16、35delG、299del AT、2168A>G、IVS7-2A>G、1555A>G、1494C>T、538C>T;2018年3～11月所收集標本檢測4個常見的耳聾易感基因的15個突變位點，除上述9個位點，還包括IVS15+5G>A、1975G>C、1174A>T、1226G>A、1229C>T、2027T>A。

1.4統計學方法? 采用SPSS20.0統計軟件對檢測結果進行統計學分析，計數資料采用（%）表示，組間比較采用？字2檢驗，以P<0.05表示差異有統計學意義。

2結果

2.1新生兒遺傳性耳聾基因突變攜帶率? 16249例新生兒中共檢出遺傳性耳聾基因突變575例，攜帶率為3.53%。其中檢測4基因9位點樣本數為8448例，突變樣本為262例，突變率為3.10%;檢測4基因15位點樣本數為7801例，突變樣本為313例，突變率為4.01%，見表1。

2.2新生兒遺傳性耳聾基因突變位點分布情況? 16249例新生兒共檢測位點總數為193047，突變位點總數為581，其中4個基因9個位點檢測出266個突變位點，4個基因15個位點檢測315個突變位點，見表2。581個突變位點中，GJB2基因突變319例，突變率1.96%（319/16249），高于SLC26A4的1.21%（196/16249）、GJB3的0.098%（16/16249）、線粒體12SrRNA的0.31%（50/575）、復合基因位點突變的0.037%（6/16249），差異有統計學意義（P<0.05）。其中基因突變位點頻率最高的為GJB2基因的235delC雜合突變，突變率為1.63%（265/16249），其次為SLC26A4基因的IVS7-2A>G雜合突變，突變率為0.91%（148/16249）及線粒體12SrRNA基因的1555A>G突變，突變率為0.30%（49/16249），見表3、表4。共有復合基因位點突變6例，突變率為0.037%，見表5。

3討論

耳聾是臨床常見的感覺功能障礙性疾病，嚴重影響人類生活質量，我國患聽力障礙人數占我國殘障人群14%，而作為新生兒較常見的一種出生缺陷，聽力障礙對新生兒語言發育系統產生直接的影響，對新生兒身心健康有著重要的影響，同時會增加社會和家庭負擔[6]。遺傳性耳聾目前沒有理想的治療措施，新生兒耳聾基因篩查，能夠早期發現攜帶耳聾基因突變的高危新生兒，通過早期用藥干預及生活指導，可預防和避免耳聾的發生，降低耳聾的發生率。

本研究共有16249例新生兒進行耳聾基因篩選，共篩查出575例新生兒攜帶耳聾基因突變，總攜帶率為3.53%（575/16249）。其中4基因9位點篩查出突變樣本為262例，突變率為3.10%;4基因15位點篩查出突變樣本為313例，突變率為4.01%。相對于9項遺傳性篩查，15項遺傳篩查增加了6項中國人群突變頻率相對較高的位點，突變檢測率增加0.91%，但仍低于深圳市南山區（4.31%）、福田區（4.47%）及龍華區（4.92%）新生兒耳聾基因突變位點攜帶率[7，8]，低于全國基因突變水平的4.39%。考慮可能與檢測基因位點數量不同有關，上述文獻中采用飛行時間質譜檢測技術檢測常見的4個耳聾基因20個位點，因此，擴大基因位點數量的檢測，有利于降低漏篩率，同時早發現、早干預，減少耳聾發生。

GJB2基因是常染色體隱形遺傳，主要編碼跨膜蛋白Cx26，廣泛存在耳蝸的上皮和結締組織中。Cx26蛋白與其他蛋白形成縫隙連接通道，主要參與內耳淋巴液鉀離子的循環。GJB2基因突變，編碼的Cx26蛋白功能異常，引起鉀離子的回流障礙，影響耳蝸毛細胞的電生理活動，導致聽力功能損傷[9]。GJB2基因突變引起的聽力損失主要是先天性的，表現為雙耳對稱、中至重度的感音神經性聽力障礙。GJB2基因中235delC雜合突變在中國人群中的主要突變位點[10]。本次篩查出318例新生兒攜帶GJB2基因雜合突變，攜帶率為1.96%。由于GJB2為常染色體隱形基因，攜帶者僅攜帶一個致病突變，并不發病，建議定期隨訪和檢測。本研究篩查1例235delC純和突變，GJB2基因純合突變患者的聽力損失較復合雜合突變患者重，一般表現為極重度聽力障礙。因其病變部位在耳蝸，植入人工耳蝸具有良好的干預效果[11]。該患兒可早期通過植入人工耳蝸避免語言發育受損，從而改善生活質量。

GJB3基因是我國夏家輝院士[12]第一個定位克隆的耳聾相關基因，GJB3基因突變可引起常染色體顯性或隱性遺傳性NSHL。該基因編碼連接蛋白Cx31，存在于相鄰細胞的細胞膜內，使相鄰細胞交換離子及其代謝物，維持內耳耳蝸內穩態，其突變表現為出生時聽力正常，主要引起后天高頻感音神經性耳聾。該基因突變率在中國攜帶率較低，本研究有16例GJB3基因538C>T突變的新生兒，應高度重視并定期跟蹤隨訪，及時治療。

SLC26A4基因為常染色體隱形遺傳，主要編碼pendrin跨膜蛋白，該基因突變導致pendrin蛋白合成及功能異常，影響碘/氯離子運輸，引起大前庭水管綜合征，顱內壓增高引起耳蝸前庭內環境增大，損傷內耳毛細胞。SLC26A4基因最常見的突變類型為IVS7-2A>G，本研究中IVS7-2A>G突變率為0.91%，僅次于235delC的突變率1.63%，與文獻報道一致[13]。患兒出生時多為聽力正常，但在頭部受到劇烈撞擊、噪音或感冒后，逐漸出現聽力損傷。本研究篩查出196例攜帶SLC26A4基因雜合突變的新生兒，攜帶率為1.21%，定期跟蹤隨訪。

線粒體12SrRNA為母系遺傳，線粒體基因突變與耳毒性藥物相關性耳聾有關。該基因1494C>T和1555A>G位點突變導致線粒體DNA的空間結構改變，暴露氨基糖苷類藥物的結合位點暴露，藥物與該基因位點結合后，可導致耳蝸毛細胞功能的損傷，導致耳聾的發生。新生兒攜帶12SrRNA基因突變，出生時大多無聽力障礙，但在使用氨基糖苷類藥物后可能出現不可逆性的聽力損傷。因此，本研究中44例攜帶12SrRNA基因突變的新生兒應避免使用氨基糖苷類藥物，降低耳聾發生率。

本次篩查出6例新生兒攜帶GJB2和SLC26A4基因復合雜合突變，研究表明[14]，GJB2和SLC26A4多雜合突變引起的新生兒聽力損失呈現異質性，新生兒出生可表現為單耳輕度異常，也可表現為雙耳中度、重度感音神經性耳聾，或者新生兒出生時聽力正常，而出現遲發性耳聾。本研究6例攜帶多基因突變新生兒應引起高度重視，進行宣教，定期監測和隨訪，預防耳聾發生。

目前我國新生兒耳聾基因篩查仍有局限性，對于篩查“陰性”者，并不能除外未攜帶耳聾相關基因突變。引起NSHL基因廣泛，新生兒篩查僅僅包括常見四個耳聾基因，仍有幾十個與遺傳性耳聾有關基因尚未篩查。目前常見的遺傳性耳聾檢測方法包括Sanger法、基因芯片法、限制性酶切法、變性高效液相色譜法、飛行時間質譜法及高通量測序技術等。相信隨著技術推廣，針對非綜合性遺傳性耳聾篩查會覆蓋多基因多位點在我國廣泛開展，從而更有效的降低耳聾發病率。

參考文獻：

[1]方炳雄，蔡勉珊，張俊賢，等.粵東地區1430例新生兒遺傳性耳聾基因篩查結果分析[J].廣東醫科大學學報，2019，37（1）：12-15.

[2]羅建立，邱里，鄔洪梁，等.湖南省9957例新生兒遺傳性耳聾基因突變篩查分析[J].中國優生與遺傳雜志，2018，26（8）：89-90，92.

[3]王亞男，王亞新，高明雅，等.洛陽地區4106例新生兒遺傳性耳聾基因的篩查分析[J].中國優生與遺傳雜志，2018，26（10）：103-106.

[4]中華人民共和國衛生部.中國出生缺陷防治報告[R].北京：中華人民共和國衛生部，2012.

[5]劉麗益，李維，韓璐好，等.深圳市南山區25987例新生兒耳聾基因篩查結果分析[J].中國優生與遺傳雜志，2018，26（3）：75-77.

[6]李天潔，梁建梅，王向東，等.聽力篩查不合格新生兒的常見耳聾基因檢測[J].國際生殖健康/計劃生育雜志，2017，36（6）：454-456.

[7]方霞，楊賢慧，張慧蓮，等.4305例新生兒遺傳性耳聾基因突變攜帶率及其基因突變位點分析[J].中國優生與遺傳雜志，2019，27（1）：63-65.

[8]蔣琦，忻蓉，沈學萍，等.2029 例新生兒耳聾易感基因篩查結果分析[J].中國婦幼保健雜志，2016，24（5）：509-511.

[9]黃美瓊，葛晶晶，張廣清，等.1674 例新生兒耳聾基因篩查結果分析[J].國際檢驗醫學雜志，2015，36（10）：1398-1399.

[10]Xia JH，Liu CY，Tang BS，et al.Mutations in thegene encoding gap junction protein beta-associatedwith autosomal dominant hearing impairment[J].Nat Genet，1998，20（4）：370-373.

[11]邱里，彭欣輝，劉貴清，等.4500例新生兒耳聾基因突變分析[J].中國優生與遺傳雜志，2019，27（3）：328-330.

[12]夏家輝，夏昆，何云貴，等.類間隙連接蛋白β-3基因結構及其編碼區序列變異的研究[J].云南大學學報（自然科學版），1999（S3）：257-258.

[13]李振安，余鳳慈，包永新，等.佛山市 40672 例新生兒耳聾基因篩查結果分析[J].婦產與遺傳，2017，7（1）：47-50.

[14]巫靜帆，李小霞，譚淑娟，等.東莞戶籍33810例新生兒聽力篩查聯合耳聾基因檢測與分析[J].中華耳科學雜志，2018，16（2）：176-180.

收稿日期：2020-04-02;修回日期：2020-04-11

編輯/成森

基金項目：深圳市科技創新員會項目（編號：JCYJ20180502163111336）

作者簡介：諶玉佳（1988.12-），女，江西南昌人，博士，主治醫師，主要從事兒科學和新生兒科科研工作

通訊作者：吳本清（1965.10-），男，湖南邵陽人，博士，主任醫師，主要從事小兒內科臨床與科研工作