紫杉醇脂質體聯合順鉑通過PI3K/AKT信號通路對不同化療途徑治療宮頸癌的療效及安全性

劉忠 周曉明 張永妍

宮頸癌是女性常見癌癥之一，發病率在女性惡性腫瘤中居第3位，占女性癌癥總數的10%，2010年至2014年病死率每年增長3%［1］。宮頸癌的治療包括根治性子宮切除術，化學療法或放射療法［2］。但根治性手術僅限早期宮頸癌患者，晚期患者通常由于病灶較大，局部出血、炎癥、壞死和子宮旁膜浸潤而接受傳統治療，如放射治療而不是切除術。順鉑是治療各種惡性腫瘤的一線化療藥物［3］。在復發或轉移性疾病中，將順鉑與紫杉醇聯合使用是最常用的治療方案之一。PI3K/AKT信號通路涉及細胞存活和凋亡，腫瘤發生及進展的幾個生物學過程。本文探討紫杉醇脂質體聯合順鉑通過PI3K/AKT信號通路對不同化療途徑治療宮頸癌的療效及安全性。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇本院收治的宮頸癌患者64例，隨機數字表法分為對照組與觀察組各32例。對照組：年齡36～61歲，平均年齡（46.8±2.3）歲。鱗癌17例，腺癌9例，鱗腺癌6例；Ⅰ期10例，Ⅱ～Ⅲ期13例，Ⅳ期9例。觀察組：年齡38～60歲，平均年齡（48.3±2.7）歲。鱗癌19例，腺癌8例，鱗腺癌5例。Ⅰ期11例，Ⅱ～Ⅲ期14例，Ⅳ期7例。兩組患者年齡和病理類型差異無統計學意義（P>0.05）。（1）納入標準：①患者經組織病理學確診為宮頸癌；②患者尚未接受化療或其他治療；③患者預期生存>1年。（2）排除標準：①患者腫瘤已發生遠處轉移；②患者接受過化療。以上患者及其家屬均知曉并簽署同意書，本項目通過本院倫理委員會批準。

1.2 方法 對照組采用靜脈滴注化療：對患者進行預處理，通過肌肉注射苯海拉明40mg，靜脈推注地塞米松5mg，并靜脈滴注西咪替丁100mg，30min后以紫杉醇脂質體（155mg/m2）靜脈滴注D1 30min，順鉑（75mg/m2）靜脈滴注D2，4周為1個療程，共治療2個療程。觀察組采用動脈灌注化療：先穿刺股動脈，進行插管，開始在盆腔動脈進行DSA造影，以患者腫瘤實際情況選擇插管型號，將明膠海綿栓塞的導管頭部置入腫瘤供血的血管內，最后行動脈灌注，用藥劑量與靜脈滴注一致，灌注完后拔管，穿刺口加壓包扎，平臥休息至少8h。

1.3 用qRT-PCR檢測PI3K、AKT mRNA表達水平 使 用 Trizol試 劑（Invitrogen，United States） 提取總RNA，根據檢測說明，然后逆轉錄cDNA。ABI 7900系統中的 SYBR Green Premix Ex Taq II（Takara）用于定量逆轉錄PCR（qRT-PCR），GAPDH作為內部參考。采用2-ΔΔCT方法計算基因的相對表達水平。

1.4 用Western blotting檢測PI3K、AKT、p-PI3K和p-AKT蛋白的表達 收集各患者化療后未進食時的外周血，離心后獲得血清，通過電泳法從血清中獲得蛋白，并通過SDS-PAGE分離，然后轉移至PVDF膜上，用5%脫脂乳封閉后。將膜用Tris緩沖鹽水（TBS）處理，并在4℃下暴露于一抗。此后，用適當的二抗處理細胞，并通過增強的化學發光試劑ECL將目的蛋白可視化。

1.5 臨床療效和安全性 根據WHO近期療效評價標準［4］：（1）完全治愈（CR）：體內無腫瘤，完全治愈；（2）部分治愈（PR）：體內腫瘤數量減少和腫瘤體積減少>50%；（3）病情穩定（SD）：體內腫瘤體積減少<50%或增加<原體積25%；（4）病情發展（PD）：體內腫瘤體積>原體積25%或出現腫瘤擴散。通過陰道鏡檢查確定患者體內有無腫瘤。根據WHO化療［5］毒副作用分級標準考察安全性：化療不良反應大部分出現在消化系統胃腸道反應，包括嘔吐、血便、腹瀉等；及肝腎功能損害、外周神經炎、過敏反應、骨髓抑制及免疫力下降。

1.6 統計學方法 采用SPSS 19.0統計學軟件。計量資料以（）表示。兩組間比較用t檢驗，多組間比較用方差分析；計數資料用卡方檢驗。以P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 不同化療途徑對PI3K、AKT mRNA表達的影響 兩組患者宮頸癌組織中PI3K、AKT mRNA的表達高于癌旁組織，差異有統計學意義（P<0.05）；觀察組患者PI3K、AKT mRNA的表達顯著低于對照組，差異有統計學意義（P<0.05）。見表1。

表1 各組PI3K、AKT mRNA表達比較（）

表1 各組PI3K、AKT mRNA表達比較（）

注：與癌旁組織比較，*P<0.05；與對照組比較，#P<0.05

組別 PI3K AKT觀察組癌組織 2.53±1.43*# 1.87±1.27*#對照組癌組織 4.42±2.11* 3.62±2.01*癌旁組織 1.23±0.26 0.53±0.16

2.2 不同化療途徑對PI3K、AKT、p-PI3K和p-AKT蛋白表達的影響 兩組患者宮頸癌組織中PI3K、AKT、p-PI3K和p-AKT蛋白的表達高于癌旁組織，差異有統計學意義（P<0.05）；觀察組患者PI3K、AKT、p-PI3K和p-AKT蛋白表達低于對照組，差異有統計學意義（P<0.05）。見圖1。

圖1 各組PI3K、AKT、p-PI3K和p-AKT蛋白表達比較

2.3 不同化療途徑對治療宮頸癌臨床療效的影響 觀察組臨床療效總有效率高于對照組，差異有統計學意義（χ2=2.86，P<0.05），見表2。觀察組5年無病生存期（DFS）高于對照組（P<0.05），見表3。觀察組遠期療效5年生存率顯著高于對照組，差異有統計學意義（P<0.05）。見表4、圖2。

表2 兩組宮頸癌患者臨床療效比較［n（%）］

表3 兩組患者無病生存率比較

表4 兩組患者遠期療效比較［n（%）］

2.4 不同化療途徑對治療宮頸癌安全性的影響 兩組患者肝腎功能損害和外周神經炎差異無統計學意義（P>0.05）；觀察組不良反應出現胃腸道反應、過敏反應、骨髓抑制及免疫能力下降低于對照組，差異有統計學意義（P<0.05），見表5。

表5 兩組宮頸癌患者的安全性比較［n（%）］

3 討論

宮頸癌占女性癌癥的10%，對女性的健康造成嚴重危害［6］。研究表明，復發或轉移性腫瘤的預后相對較差，其一年生存率僅15%～20%［7］。將順鉑與紫杉醇聯合使用是最常用的治療方案之一。順鉑在腫瘤中的耐藥機制是多因素的，包括藥物代謝：轉運蛋白的異常表達；細胞解毒機制：增強細胞內解毒；基因水平：提高DNA修復能力，增強抑制細胞凋亡的能力［8］。目前已在較多種癌癥中發現了PI3K/AKT信號通路的激活［9］。AKT是一種在PI3K下游起作用的絲氨酸/蘇氨酸激酶，其是PI3K/AKT信號傳導的關鍵因素，也被稱為蛋白激酶B（PKB）。其包含三種高度同源的亞型：AKT1（PKBa），AKT2（PKBb）和 AKT3（PKBc），在細胞存活和凋亡中起關鍵作用，在獲得性腫瘤抗藥性細胞傾向于增加AKT的激活［10］。相關研究表明，AKT過表達在化療過程中調節癌細胞的耐藥性。如，在乳腺癌細胞中，耐藥細胞中的AKT1表達被激活［11］。AKT3是AKT家族中最關鍵的成員之一，其參與細胞增殖、腫瘤發生、細胞分化和凋亡等過程。AKT3也與癌細胞的化學抗性有關。研究表明，敲除AKT3會增加遷移及乳腺癌細胞對順鉑的敏感性［12］。此外，AKT3的敲除還誘導A549肺癌細胞的線粒體功能障礙［13］，但宮頸癌細胞中AKT3表達的上調與臨床療效、安全性之間的關系有待進一步研究。本資料結果顯示，對照組和觀察組患者宮頸癌組織中PI3K、AKT mRNA和蛋白的表達高于癌旁組織，觀察組患者PI3K、AKT mRNA和蛋白的表達顯著低于對照組。

隨著化療藥物的不斷研發和改良，化療的給藥途徑也被研究者重視，不同的化療途徑可以顯示不同的臨床療效，對患者恢復期的安全性也有一定影響。采用適當的化療途徑可以提高臨床療效且減輕患者后期的不良反應，提高患者的存活期。本資料結果顯示，觀察組臨床療效總有效率顯著高于對照組，觀察組遠期療效5年生存率顯著高于對照組，兩組患者的肝腎功能損害和外周神經炎差異無統計學意義，觀察組不良反應出現胃腸道反應、過敏反應、骨髓抑制及免疫能力下降的頻率低于對照組。提示，動脈灌注可以有效提高化療療效和減少不良反應，提高安全性。

綜上可知，PI3K/AKT信號通路參與宮頸癌的臨床療效和不良反應過程，動脈灌注作為化療途徑可以有效提高化療療效和減少不良反應，提高安全性。