藏紅花改善酒精性肝病患者的氧化應激作用及對Caspase-3、Bcl-2水平的影響*

徐 芳 施海東 馬建民△ 張國哲

1.蘇州大學附屬張家港醫院傳染科 (江蘇 張家港，215600) 2.江蘇醫藥職業學院中藥研究院

酒精性肝病是由于長期攝入過量酒精而引發的一種肝臟疾病，若不及時控制可發展為酒精性肝纖維化、酒精性肝硬化甚至肝癌[1]。越來越多的研究認為中醫藥是治療酒精性肝病的有效療法，可改善患者的臨床癥狀、肝功能等，促進肝細胞的修復，并且聯合西藥干預能顯著提高臨床療效[2,3]。藏紅花屬藏藥草本，具有活血祛瘀、散郁開結、涼血解毒之功效。馬安林等[4]認為藏紅花可有效改善酒精和四氯化碳所引起的大鼠肝損傷，且可明顯抑制脂質過氧化水平。本研究在常規治療基礎上加用藏紅花輔助治療酒精性肝病，取得滿意效果。

1 臨床資料

1.1 一般資料 選取2014年1月至2018年12月在蘇州大學附屬張家港醫院診斷為酒精性肝病的患者120例。酒精性肝病診斷參照《酒精性肝病診療指南(2010年修訂版)》[5]標準。納入標準：①符合酒精性肝病診斷標準；②年齡20～70歲；③飲酒史>5年，且伴肝功能損害性指標變化；④入組前4周內未給予治療；⑤依從性好，且自愿簽署知情協議。排除標準：①伴嚴重心腦血管、造血系統等疾??；②伴病毒性肝炎等其他類型肝病；③藥物、自身免疫等所致肝??；④已存在肝硬化；⑤治療過程中配合性差者。按數字表法隨機分為對照組和治療組，每組60例，治療過程中對照組1例患者因工作調動原因脫落。對照組59例，男38例，女21例；年齡44～62歲，平均(57.31±7.31)歲；平均飲酒史(30.11±7.79)年；酒精性脂肪肝45例，酒精性肝炎14例。治療組60例，男40例，女20例；年齡43～61歲，平均(56.96±8.17)歲；平均飲酒史(29.87±8.51)年；酒精性脂肪肝48例，酒精性肝炎12例。兩組患者臨床資料差異無統計學意義(P>0.05)，有可比性。

1.2 治療方法 兩組患者均嚴格戒酒，飲食以低脂高蛋白為主，給予足量營養支持，補充維生素、葉酸等。對照組：依指南[6]給予常規措施，包括保肝、降酶等對癥治療，對凝血酶原時間-膽紅素(Maddrey)評分>32分者給予潑尼松或潑尼松龍治療，40～60 mg/d；治療組：在對照組基礎上給予藏紅花1 g/d，用100 ml開水沏10～15 min，代茶服用，1次/d。兩組患者均連續治療8周。

1.3 觀察指標 ①肝功能：清晨抽取患者空腹時靜脈血約3 ml，3000 r/min離心15 min，將血清保存于-70 ℃，待統一檢測；采取全自動生化分析儀測定天門冬氨酸氨基轉移酶(AST)、丙氨酸氨基轉移酶(ALT)、總膽紅素(TBil)、谷氨酰氨基轉移酶(GGT)水平。②氧化應激水平：血清采取與①同，采取酶聯免疫吸附法測定血清超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-PX)、丙二醛(MDA)水平。③血清半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)和B細胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)水平：血清采集同①，采取酶聯免疫吸附法測定。

1.4 療效評定標準 臨床治愈：患者的癥狀完全消失，肝功能指標減少≥80%；顯效：患者的癥狀基本消失，肝功能指標減少50%～80%；無效：未能達到上述標準[7]?？傆行?(臨床治愈+顯效)患者數/各組患者總數。

2 結果

2.1 兩組患者肝功能比較 見表1。

表1 兩組患者肝功能比較

2.2 兩組患者臨床療效比較 見表2。

表2 兩組患者臨床療效比較

2.3 兩組患者血清SOD、GSH-PX和MDA水平比較 見表3。

表3 兩組患者血清SOD、GSH-PX和MDA水平比較

2.4 兩組患者血清Caspase-3、Bcl-2水平比較 見表4。

表4 兩組患者血清Caspase-3、Bcl-2水平比較

3 討論

酒精性肝病的病因為患者攝入過量乙醇。人體攝入的乙醇95%以上在肝內分解代謝，乙醇在肝代謝過程中將氧化型輔酶Ⅰ轉化為還原型輔酶Ⅰ，提高了還原型輔酶Ⅰ在體內的水平，誘發肝氧化還原狀態，對葡萄糖、脂質、蛋白質等物質的代謝產生不良影響，會促進脂肪酸、甘油三酯的合成，同時抑制線粒體的脂肪酸β-氧化，使甘油三酯大量沉積于細胞內[8]。乙醛是乙醇氧化代謝的主要產物，其化學反應性和毒性都強于乙醇，乙醛通過結合蛋白質形成自身抗原，激活免疫系統導致肝損害；乙醛也能夠損傷線粒體和谷胱甘肽功能，抑制DNA的修復和DNA中胞嘧啶甲基化，誘導發生氧化應激和細胞的凋亡，導致肝損害[9]。

藏紅花性味甘平，入心、肝經，具有活血祛瘀、散郁開結、涼血解毒的功效?，F代藥理學研究證實，藏紅花的主要成分包括苦藏花素、藏紅花苦素、藏紅花醛、胡蘿卜素類化合物、紅花醛以及蒎烯等，在保護肝細胞、抵抗肝臟的纖維化方面發揮重要作用，此外在改善血液循環、抗脂質過氧化、調節免疫功能、抗腫瘤以及降低膽固醇等方面也效果良好[10]。Sheng等[11]的研究顯示藏紅花素是胰脂肪酶的競爭性抑制劑，通過抑制胰脂肪酶的活性降低人體對外源性甘油三酯的吸收，減少了脂肪酸的合成，增強肝脂酶活性，加速了甘油三酯的代謝，促進脂肪的分解產物-脂肪酸的排泄。在本研究中，治療組患者治療后肝功能指標AST、ALT、TBil、GGT明顯低于對照組，表明藏紅花輔助治療能夠進一步改善酒精性肝病患者的肝功能；療效統計顯示，治療組患者的總有效率顯著高于對照組，提示藏紅花輔助治療可提高酒精性肝病的臨床療效。

過量攝入酒精增加了活性氧(ROS)產物，提高了對體內的脂質、蛋白質、DNA的過氧化作用[12]；乙醛也可通過結合谷胱甘肽的巰基下降肝細胞的活性，刺激體內的炎癥介質、內毒素過量釋放，使肝臟發生氧化應激、脂質過氧化，對肝臟產生二次打擊，加重肝細胞的炎性損傷[13]。藏紅花不同部位提取物均發揮了不同程度的抗氧化活性，能明顯減輕酒精及酒精四氯化碳所引起的肝損傷及其脂質過氧化病理反應[4]。在本研究中，治療組患者血清SOD、GSH-PX水平顯著高于對照組，MDA水平明顯低于對照組，表明藏紅花輔助治療可有效改善酒精性肝病患者的氧化應激反應。

酒精性肝病患者的肝細胞發生氧化應激和脂質過氧化，促進活性氧產生增多，繼發性引起體內抗氧化物質被不斷消耗，使機體內的ROS過量生成、蓄積，進而破壞肝細胞的結構和功能，直接活化線粒體膜上的Bcl-2蛋白[14]；同時Bcl-2具有抗ROS的活性，故ROS產生增多可經負反饋調節途徑促進Bcl-2表達增加，二者比例失調后會進一步增加RSO產生[15]。Caspase-3是哺乳動物細胞凋亡的關鍵蛋白酶，酒精性肝病過程中所引起的肝臟氧化應激反應也會通過調控細胞凋亡相關因子Bcl-2表達，活化Caspase-3，放大蛋白酶級聯切割反應，誘導肝細胞走向凋亡[16]。梅夏齊等[17]的研究發現藏紅花可有效改善四氯化碳橄欖油溶液所引起的大鼠肝纖維化，而通過調節Caspas-3、Bcl-2的表達可能是其發揮抗肝纖維化作用的途徑之一。在本研究中，治療組患者血清Caspase-3、Bcl-2水平顯著少于對照組，提示藏紅花可能通過調節Caspase-3、Bcl-2水平，對酒精性肝病患者發揮治療作用。

綜上所述，在常規治療基礎上藏紅花可有效改善酒精性肝病患者的肝功能，提高臨床療效，改善氧化應激水平以及下調Caspase-3、Bcl-2水平可能是其療效途徑之一。