2018-2019監測年度吉林省A(H1N1)pdm09亞型流感病毒抗原性和基因特性分析

柳鴻敏，李 靜，侯程程，武月婷，李 響，楊顯達

(吉林省疾病預防控制中心，吉林 長春130062)

流感病毒是單鏈分節段的RNA病毒，易發生基因突變或者重配，有很高的變異頻率。2009年的甲型H1N1流感病毒席卷全球，全球大約20% 的人感染，造成大約30萬人死亡，對各國都產生了極大的疾病負擔[1-4]。流感病毒核蛋白以及基因蛋白的抗原性與基因特性的差異，流感病毒分為甲、乙、丙型三種類型。甲型流感病毒的宿主包括人、禽類以及部分哺乳動物，可以在不同種類的宿主間進行傳播，流感病毒的主要宿主是人類。甲、乙型流感病毒全基因組都包括8個RNA節段[5-7]。血凝素(HA)和神經氨酸酶是流感病毒顆粒表面具有抗原性的兩種蛋白，根據這兩種蛋白抗原性差異，甲型流感病毒可以劃分為多種亞型[8]。

1 材料與方法

1.1 標本來源根據《全國流感監測方案(2017年版)》要求，在吉林省內13家國家級哨點醫院采集具有流感樣癥狀(體溫≥38℃，伴咳嗽或咽痛之一)發熱3天內的流感樣病例標本。對A(H1N1)pdm09亞型流感病毒核酸陽性的標本進行病毒分離，得到流感病毒毒株。

1.2 A(H1N1)pdm09亞型流感病毒的抗原分析各地級市送檢的流感毒株按照送檢地區和送檢順序進行隨機抽取，選擇血凝滴度要≥8的毒株。采用紅細胞血凝抑制方法檢測病毒與參考雪貂抗血清的效價。參考抗原為A/Michigan/45/2015(H1pdm)，血清為參考雪貂抗血清。參考抗原與血清均由中國疾病預防控制中心國家流感中心實驗室提供。

2 結果

2.1 A(H1N1)pdm09亞型流感病毒抗原分析結果

2018-2019監測年度吉林省共檢測A型流感病毒陽性標本1167份，其中A(H1N1)pdm09亞型流感病毒1081份，分離得到A(H1N1)pdm09亞型流感病毒毒株464株。按照不同地區不同月份抽取其中的92株進行抗原分析，以A/Michigan/45/2015(H1pdm)為參考抗原，待測毒株效價與標準抗原效價相比，有 8倍或8倍以上的差異，可初步判斷毒株間抗原性存在差異。本次結果顯示，效價均無>8倍差異，說明毒株間抗原無差異。部分A(H1N1)pdm09亞型流感病毒的抗原性分析結果如表1所示。

表1 2018-2019監測年度吉林省部分A(H1N1)pdm09亞型流感病毒的抗原性分析結果

2.2 A(H1N1)pdm09亞型流感病毒基因特性分析結果

2018-2019監測年度各地區流感陽性標本分離得到的17株毒株進行基因序列測定，流感基因位點的變化情況(如表2)，并且繪制基因進化樹(如圖1)。與疫苗株相比，有4株62位點R→K，8株146位點N→D，有2株155位點H→Y，有4株202位點T→I，有3株273位點T→I，有8株277位點N→D。從基因進化樹可以看出，吉林省2018-2019監測年度的17株A(H1N1)pdm09亞型流感病毒毒株與參考株A/Michigan/45/2015(H1pdm)親緣關系較近，有15株分離株與A/Brisbane/02/2018參考株親緣關系較近。

表2 A(H1N1)pdm09亞型流感病毒基因位點變化情況

圖1 A(H1N1)pdm09亞型流感病毒分離株HA基因進化樹(●為WHO推薦北半球疫苗株)

3 討論

流感作為世界衛生組織監測傳染病之一，已發生多次全球大流行。進入21 世紀，2009 年新甲型H1N1 流感的全球大流行又一次敲響了流感防控的警鐘[9]。流感監測可以及時發現流感大流行株，對疫苗研制等有重要的意義。流感病毒的血凝素(HA)具有較高的變異性，主要有4個抗原決定簇，分別是Ca(137-142，166-170，203，221，235)，Cb(70-75)，Sa(124，153-157，159-164)，Sb(184-195)，這44 個氨基酸是宿主免疫系統作用的靶點，其變異會影響病毒的抗原漂移[10-12]。流感病毒HA 蛋白與宿主細胞表面受體結合是流感病毒感染過程中的關鍵環節[13]。

本次研究對2018-2019監測年度分離的92株A(H1N1)pdm09亞型流感病毒進行抗原分析，用深度測序的方法對17株病毒進行序列測定，然后進行基因特性分析，實驗結果表明變異位點均沒有位于抗原決定簇，因此并不影響其抗原性，與北半球疫苗株高度同源。

從歷年的監測數據中顯示，15歲以下年齡組是流感的主要人群[14]。流行株與疫苗株抗原匹配的程度決定了流感疫苗對人體的免疫保護效果。與參考雪貂抗血清的 HI 效價低于參考病毒與參考抗血清自身HAI 效價的8 倍(含8 倍)或以上時，則認為待檢病毒是該參考抗血清檢測到的低反應株；反之，當相差8 倍以內時(不含8倍)，則認為待檢病毒是參考病毒的類似株[15]。本次研究結果顯示，吉林省2018-2019監測年度分離的92株A(H1N1)pdm09亞型流感病毒毒株與參考株相比，效價為無>8倍差異，抗原性沒有差異。從基因進化樹可以看出，流感病毒毒株與參考疫苗株A/Michigan/45/2015(H1pdm)相比親緣性較近，有15株分離株與A/Brisbane/02/2018疫苗株親緣關系較近，HA具有高度的同源性，提示疫苗對A(H1N1)pdm09亞型流感病毒有較好的預防作用。

由于流感病毒的易變異性，流感造成的疾病負擔依然很大。人們的防病意識也在逐年的提高，但是有限的流感疫苗接種率還起不到免疫屏障的效果，因此，加強流感的監測和病原學研究對流感的防控，流感疫苗的研發都有重要的意義。