原子吸收分光光度法測定葡萄酒中鐵含量的方法驗證

蔣祥飛，張 利

（安徽古井貢酒股份有限公司，安徽亳州 236820）

隨著我國人民生活水平的不斷提高，葡萄酒已經逐漸走向普通消費者，并成為大眾所喜歡的果酒之一。葡萄酒正在向著營養型、健康型、保健型、低濃度型的方向發展。葡萄酒在正常情況下是穩定的，而且酒的顏色、質量、理化因素和口感都是很不錯的。酒在貯藏的過程中，由于受到各種因素的影響，會產生渾濁或沉淀，其中鐵等金屬離子超量是葡萄酒發生化學渾濁的主要因素。因此，如何控制鐵等金屬離子的含量，對于保證葡萄酒的穩定性顯得尤為重要。葡萄酒中鐵含量的測定方法為GB/T 15038—2006《葡萄酒、果酒通用分析方法》4.9 鐵（原子吸收分光光度法），對其所涉及的測量范圍、線性范圍、檢出限、定量限、精密度、正確度6 個方法參數[1]進行了檢測以確保分析數據的準確性、科學性和嚴密性。

1 材料與方法

1.1 材料、試劑及儀器

1.1.1 樣品

葡萄酒酒樣：赤霞珠西拉干紅葡萄酒，市售，生產日期：2016年8月16日，保質期：10年。

1.1.2 試劑及耗材

本方法中所用水應符合GB/T 6682—1992 中二級水規格，所用試劑為優級純。

硝酸溶液：量取8 mL硝酸，稀釋至1000 mL。

鐵標準貯備液：按GB/T 602配制。

鐵標準使用液：吸取10.00 mL鐵標準貯備液于100 mL 容量瓶中，用硝酸溶液稀釋至刻度，此溶液每毫升含10 μg鐵。

鐵標準系列：分別吸取鐵標準使用液0.00 mL、1.00 mL、2.00 mL、3.00 mL、4.00 mL、5.00 mL、10.00 mL于5個100 mL容量瓶中，用硝酸溶液稀釋至刻度，混勻。該系列用于標準工作曲線的繪制。

1.1.3 儀器設備

原子吸收分光光度計，備有鐵空心陰極燈。

1.2 試驗方法

采用國家標準GB/T 15038—2006《葡萄酒、果酒通用分析方法》4.9鐵（原子吸收分光光度法）。

原理：將處理后的試樣導入原子吸收分光光度計中，在乙炔-空氣火焰中，試樣中鐵被原子化，基態原子鐵吸收特征波長（248.3 nm）的光，吸收量的大小與試樣中鐵原子濃度成正比，測其吸光度，求得鐵含量。

1.3 分析步驟

1.3.1 試樣制備

用硝酸溶液準確稀釋樣品5～10 倍，搖勻，備用。

1.3.2 標準工作曲線的繪制

置儀器于合適的工作狀態，調波長至248.3 nm，導入標準系列溶液，以零管調零，分別測定其吸光度。以鐵的含量對應吸光度繪制標準工作曲線。

1.3.3 試樣的測定

將試樣導入儀器，測其吸光度，然后根據吸光度在標準曲線上查得鐵的含量。

2 結果與分析

2.1 測量范圍

依據GB/T 27417—2017《合格評定化學分析方法確認和驗證指南》中5.2 測量范圍的驗證方法，對本方法的測量范圍進行驗證，對0.2 mg/L 鐵標準溶液、0.4 mg/L 鐵標準溶液、0.5 mg/L 鐵標準溶液3個不同濃度的標準溶液進行6 次檢測分析，其結果具體如下：

（1）試驗所得標準曲線線性回歸方程的相關系數為0.9997，結果（見表1、圖1 標準曲線線性）符合GB/T 27417—2017 中對于準確定量方法，線性回歸方程的相關系數不低于0.99的要求。

（2）精密度以不同濃度的鐵標準溶液6 次檢測結果值的室內變異系數表示，其結果（見表2 標準溶液變異系數及正確度結果表）符合GB/T 27417—2017中被測組分含量為1～10 mg/kg時實驗室內變異系數小于11%的要求。

表1 標準曲線線性

（3）正確度以不同濃度的鐵標準溶液的回收率來表示，即鐵標準溶液6 次檢測結果的平均值與已知濃度的比值，其結果（見表3 標準溶液變異系數及正確度結果表）符合GB/T 27417—2017 中被測組分含量為0.1～1 mg/kg 時方法回收率在80 %～110%的要求。

2.2 線性范圍

依據GB/T 27417—2017《合格評定化學分析方法確認和驗證指南》中5.3 線性范圍的驗證方法，對本方法的線性范圍進行驗證，線性回歸方程的相關系數為0.9997，結果（見表1 標準曲線線性）符合GB/T 27417—2017中對于準確定量方法，線性回歸方程的相關系數不低于0.99的要求。

2.3 檢出限和定量限

依據GB/T 27417—2017《合格評定化學分析方法確認和驗證指南》中5.4 檢出限和定量限的驗證方法，采用空白標準偏差法對本方法的檢出限進行驗證，方法的檢出限為空白試驗的平均值與3 倍的標準偏差之和，方法定量限為方法檢出限的3倍。故本方法的方法檢出限為0.0151 mg/L，定量限為0.0453 mg/L（見表3 方法檢出限和定量限結果表)。

表2 標準溶液變異系數及正確度結果表

表3 方法檢出限和定量限結果表

2.4 正確度

依據GB/T 27417—2017《合格評定化學分析方法確認和驗證指南》中5.5 正確度的驗證方法，采用加標回收的方法對正確度進行驗證，結果方法回收率（見表4 正確度及精密度結果表）符合GB/T 27417—2017 中被測組分含量為1～100 mg/kg 時方法回收率在90%～110%的要求。

表4 正確度及精密度結果表

2.5 精密度

依據GB/T 27417—2017《合格評定化學分析方法確認和驗證指南》中5.6 精密度的驗證方法，以不同樣品6 次檢測結果值的室內變異系數表示精密度，其結果（見表4 正確度及精密度結果表）符合GB/T 27417—2017 中被測組分含量為1～10 mg/kg時實驗室內變異系數小于7.5%的要求。

3 結論

本次方法驗證依據GB/T 27417—2017《合格評定化學分析方法確認和驗證指南》對GB/T 15038—2006《葡萄酒、果酒通用分析方法》4.9 鐵（原子吸收分光光度法）進行方法驗證，其檢測過程中所涉及的測量范圍、線性范圍、檢出限和定量限、正確度及精密度6 個方法參數均符合GB/T 27417—2017 和GB/T 15038—2006 的要求，故方法GB/T 15038—2006《葡萄酒、果酒通用分析方法》4.9鐵（原子吸收分光光度法）在本實驗室內可用。