慢性乙型肝炎病毒感染者外周血中γ-干擾素和轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β的表達(dá)及其意義

李虓，王曉英，隋昕珂，趙暉，史叢寧，李文玉

(1.首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京天壇醫(yī)院檢驗(yàn)科,北京 100070；2.戰(zhàn)略支援部隊(duì)特色醫(yī)學(xué)中心消化內(nèi)科)

乙型肝炎病毒感染為感染科常見疾病，研究表明[1]，慢性乙型肝炎病毒感染者中，有15%～25%的患者因乙型肝炎病毒感染所致肝病死亡，給予慢性乙型肝炎病毒感染者及時(shí)診斷與有效治療尤其關(guān)鍵。機(jī)體免疫反應(yīng)與慢性乙型肝炎發(fā)病之間存在關(guān)聯(lián)，細(xì)胞因子為多肽類活性物質(zhì)，來(lái)源于淋巴細(xì)胞及單核巨噬細(xì)胞，能在細(xì)胞之間傳遞信號(hào)[2]。γ-干擾素(IFN-γ)及轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β(TGF-β)為輔助性T淋巴細(xì)胞在細(xì)胞免疫反應(yīng)過(guò)程產(chǎn)生的[3]，參與免疫反應(yīng)過(guò)程；為分析IFN-γ及TGF-β在慢性乙型肝炎病毒感染者中的表達(dá)情況及對(duì)疾病發(fā)生的影響，本研究對(duì)160例乙型肝炎病毒攜帶者、182例慢性乙型肝炎患者、190例慢性乙型肝炎所致的肝硬化患者、156例慢性乙型肝炎病毒攜帶者的肝癌患者及202名健康者展開研究，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 對(duì)象與方法

1.1 研究對(duì)象 以2019年1月至12月首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京天壇醫(yī)院收治的160例乙型肝炎病毒攜帶患者作A組，其中99例(61.88%)男性，61例(38.12%)女性；年齡范圍18～61歲，年齡(41.76±10.33)歲。以182例慢性乙型肝炎患者作B組，其中114例(62.64%)男性與68例(37.36%)女性；年齡范圍19～63歲，年齡(42.09±14.51)歲。以190例慢性乙型病毒肝炎所致的肝硬化患者作C組，其中119例(62.63%)男性與71例(37.37%)女性；年齡范圍20～63歲，年齡(42.16±13.47)歲。以156例肝癌患者為D組，其中97例(62.18%)男性與59例(37.82%)女性；年齡范圍20～62歲，年齡(42.11±11.33)歲。四組患者符合《慢性乙型肝炎診治指南》[4]中規(guī)定的診斷標(biāo)準(zhǔn)；以同期入院接受體檢的202名健康者作對(duì)照組，其中127例(62.87%)男性與75例(37.13%)女性；年齡范圍19～63歲，年齡(42.15±12.81)歲。本次研究已通過(guò)首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京天壇醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)審查，所有研究對(duì)象均簽署了知情同意書。五組人群的基礎(chǔ)資料具有可比性。

1.2 納入與排除標(biāo)準(zhǔn) 納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)入組前未接受乙型肝炎相關(guān)治療；(2)語(yǔ)言、認(rèn)知功能均正常；(3)精神狀態(tài)正常；(4)年齡18～65歲。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)病歷資料不完整；(2)合并嚴(yán)重性心腦血管病癥；(3)合并其他惡性腫瘤；(4)妊娠、哺乳期；(5)其他類型嗜肝病毒感染；(6)合并嚴(yán)重臟器功能障礙；(7)自身免疫性疾病。

1.3 方法

1.3.1 IFN-γ及TGF-β表達(dá)檢測(cè)方法 取受試者4 mL空腹外周靜脈血，常規(guī)離心后，提取血清，以酶聯(lián)免疫吸附法對(duì)IFN-γ及TGF-β表達(dá)進(jìn)行測(cè)定，嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行，IFN-γ及TGF-β試劑盒均由南京建成生物科技有限公司提供。

1.3.2 乙型肝炎病毒DNA檢測(cè)方法 取受試者空腹外周靜脈血清，以實(shí)時(shí)熒光定量分析儀(購(gòu)于美國(guó)ABI，7300型)進(jìn)行基因擴(kuò)增，對(duì)乙型肝炎病毒DNA載量進(jìn)行測(cè)定，嚴(yán)格按照說(shuō)明書進(jìn)行。

1.3.3 外周血肝功能檢測(cè)方法 取受試者空腹外周靜脈血清，用深圳邁瑞生物醫(yī)療電子股份有限公司生產(chǎn)的全自動(dòng)生化分析儀BS-2000進(jìn)行測(cè)定，嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行，AST、TBIL試劑盒均由深圳邁瑞生物醫(yī)療電子股份有限公司提供。

1.3.4 纖維化指標(biāo)檢測(cè)方法 取受試者空腹外周靜脈血清，用深圳邁瑞生物醫(yī)療電子股份有限公司生產(chǎn)的全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光分析儀CL-6000i進(jìn)行測(cè)定，嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行，HA、LN、CIV、PIIINP試劑盒均由深圳邁瑞生物醫(yī)療電子股份有限公司提供。

1.4 乙型肝炎病毒DNA結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)及乙型肝炎病毒載量分組 乙型肝炎病毒DNA測(cè)定結(jié)果≥102IU/mL時(shí)，即為陽(yáng)性[5]。乙型肝炎病毒DNA測(cè)定結(jié)果為102～104IU/mL者作低載量組，乙型肝炎病毒DNA測(cè)定結(jié)果為105～106IU/mL者作中載量組，乙型肝炎病毒DNA測(cè)定結(jié)果≥107IU/mL者作高載量組。

2 結(jié)果

2.1 五組外周血病毒DNA載量與IFN-γ及TGF-β表達(dá)水平的比較 A、B、C及D組患者外周血病毒DNA載量差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。A、B、C及D組患者外周血中IFN-γ及TGF-β表達(dá)均高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

表1 五組外周血中IFN-γ及TGF-β表達(dá)的比較

2.2 慢性乙型肝炎患者不同乙型肝炎病毒載量者的IFN-γ及TGF-β表達(dá)比較 乙型肝炎病毒DNA檢測(cè)結(jié)果表明，慢性乙型肝炎患者中，79例患者為乙型肝炎病毒低載量，61例為乙型肝炎病毒中載量，42例為乙型肝炎病毒高載量，且乙型肝炎病毒高載量患者的IFN-γ及TGF-β表達(dá)最高，同時(shí)乙型肝炎病毒低載量患者的IFN-γ及TGF-β表達(dá)比乙

型肝炎病毒中載量患者高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

表2 慢性乙型肝炎患者不同乙型肝炎病毒DNA載量細(xì)胞因子對(duì)比

2.3 五組患者肝功能及肝纖維化水平比較 A、B、C及D組患者肝功能指標(biāo)和肝纖維化水平指標(biāo)均高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；從乙型肝炎病毒攜帶者組、慢性乙型肝炎患者到慢性乙型肝炎病毒所致的肝硬化患者，肝纖維化指標(biāo)表達(dá)逐漸升高，于慢性乙型肝炎病毒所致的肝硬化組的患者中達(dá)到最高值，而肝癌組有所下降。見表3。

表3 五組患者肝功能及肝纖維化水平比較

3 討論

乙型肝炎病毒感染者具有臨床轉(zhuǎn)歸差異大的特征，研究表明[6-8]，患者的免疫功能對(duì)乙型肝炎病毒感染的發(fā)生、進(jìn)展及轉(zhuǎn)歸起著決定性作用，此過(guò)程為細(xì)胞免疫過(guò)程，輔助性T淋巴細(xì)胞參與較多的免疫反應(yīng)[9-11]。

本研究對(duì)慢性乙型肝炎病毒攜帶患者、慢性乙型肝炎患者、慢性乙型肝炎所致肝硬化患者及慢性乙型肝炎所致肝癌患者。外周血中IFN-γ及TGF-β表達(dá)在肝硬化患者最高，提示外周血中IFN-γ及TGF-β表達(dá)是反映機(jī)體肝細(xì)胞受損程度的重要指標(biāo)，與肝炎患者病情程度具有密切相關(guān)性，可能參與慢性乙型肝炎、肝硬化及肝癌的疾病發(fā)展[12-14]，本研究結(jié)果也表明隨著病情進(jìn)展，肝功能指標(biāo)和肝纖維化也呈上升趨勢(shì)，ALT在肝癌中處于最高，肝纖維化指標(biāo)在肝硬化組中處于最高狀態(tài)。這是符合臨床表現(xiàn)的。

本研究對(duì)慢性乙型肝炎患者的乙型肝炎病毒DNA載量進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果發(fā)現(xiàn)慢性乙型肝炎患者病毒高載量患者的IFN-γ及TGF-β表達(dá)最高，乙型肝炎病毒低載量患者的IFN-γ及TGF-β表達(dá)比乙型肝炎病毒中載量患者高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，提示IFN-γ能使機(jī)體自身的抗病毒機(jī)制激活，并對(duì)乙型肝炎病毒 DNA復(fù)制進(jìn)行有效抑制，而乙型肝炎病毒 DNA持續(xù)存在，則會(huì)加重肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞組織的受損程度，導(dǎo)致肝星狀細(xì)胞持續(xù)活化，加快肝纖維化的進(jìn)展。乙型肝炎病毒DNA侵入至正常肝臟中，通過(guò)誘導(dǎo)細(xì)胞因子，使肝星狀細(xì)胞活化，加快TGF-β分泌速度，增加其分泌量，表明高濃度乙型肝炎病毒能促使慢性乙型肝炎轉(zhuǎn)化為肝纖維化[15]。

綜上所述，慢性乙型肝炎病毒感染者肝臟受損過(guò)程中，IFN-γ及TGF-β均可能參與，且外周血中IFN-γ及TGF-β表達(dá)與乙型肝炎病毒載量之間存在一定的關(guān)聯(lián)。但病毒載量并不是其唯一影響因素，可進(jìn)一步深入研究。