廣西豬圓環病毒2型全基因擴增及來源分析

薛新綿

摘要：某豬場發生疫情，通過聚合酶鏈反應（PCR）檢測、擴增豬圓環病毒2型（PCV2）GX-20全基因序列，通過與國內外毒株同源性比對、繪制系統發育進化樹，發現GX-20與廣東、湖南、貴州和山東等周邊省份同源性較高，且高于歷年分離的廣西流行毒株，結合引種情況，推測GX-20是由于引種從廣東傳播到廣西。

關鍵詞：豬圓環病毒2型;全基因擴增;來源

中圖分類號：$852.65⁺1 文獻標識碼：B文章編號：2095-9737（2020）06-0008-02

豬圓環病毒2型（poreine circovirus type 2，PCV2）是豬圓環病毒相關疾病（PCV2-associateddiseases，PCVAD）的主要病原，該病是嚴重危害全球養豬業的豬場重要傳染病，每年給我國造成巨大經濟損失。PCV2是無囊膜的單股環狀負鏈DNA病毒，全長約1800bp，包含5個開放閱讀框，編碼Rep、Rep、Cap等蛋白。根據病毒全基因組和Cap基因，可將PCV2分為8個基因型，其中PCV2a、PCV2b、PCV2d在全球廣泛流行。2010年我國檢出的PCV2變異毒株屬于PCVgd亞型。

作者在發病豬群中檢出PCV2，通過擴增其全基因、與國內外毒株進行同源性比對，結合生產實際，推測該病毒來源，為掌握近年來廣西PCV2流行和變異、掌握病毒遺傳進化以及致病機理的研究提供數據參考。

1材料和方法

1.1材料

pMD18-T載體、大腸桿菌DH5a、LA TaqMix、LB培養基、DNA抽提試劑盒等試劑分別購自Takara公司、生工生物工程（上海）股份有限公司。

1.2樣品采集、抽提及PCV2全基因擴增

發病豬組織樣品來源于本地某豬場，采集豬肺臟、淋巴結、脾臟和肝臟。將組織樣品與無菌PBS按照1：4混合、研磨制成勻漿，凍融3次后，離心取上清，用于抽提基因組DNA。以基因組DNA為模板，進行PCV2全基因擴增。引物及反應條件（表1）、反應體系參考文獻。

1.3DNA片段純……