回春散預防和治療熱性驚厥實驗研究*

★ 吳蘭生 張志明 羅紅婷（.廣東健泉大健康產業開發股份有限公司 廣東 佛山 5800；.順德職業技術學院 廣東 佛山 58300）

熱性驚厥（FC）是小兒時期最常見的驚厥性疾患，約占小兒驚厥的50%，在6歲以下的發病率近5%。因發生驚厥可能會導致神經元的損傷，而神經元的損傷是不可以修復，從而將影響到某些發育障礙。因此預防和治療熱性驚厥的安全藥品是現代兒科學的研究熱點。回春散源于《敬修堂藥說》中的“小兒回春丹”，收錄于中醫院校本科教材《方劑學》（開竅劑“涼開節”）中［1］，其湯頭歌為“回春丹中用四香，蔻枳星夏并牛黃；鉤蠶陳貝麻全蝎，朱砂草竹共大黃”。同時回春散也被收錄于《兒科中醫醫療技術及中成藥用藥指導》中的“上呼吸道感染”治療用藥［2］。其適應癥為用于小兒驚風，感冒發熱等。臨床多有使用，但其作用機制不完全清楚。本實驗通過藥理學研究，發現其作用機制與大腦組織神經遞質含量改變控制有關。

1 受試藥物和試劑

回春散，生產單位：國藥集團馮了性（佛山）藥業有限公司，批號：190001；規格：0.3 g/袋，3袋/盒。地西泮片，生產單位：，批號，規格。Υ-氨基丁酸（GABA）酶聯免疫測試盒，生產單位：南京建成生物工程研究所，批號：H16820190507。谷氨酸（Glu）測試盒，生產單位：南京建成生物工程研究所，批號：20190523。

2 試驗動物和分組

購入21 d幼齡SD大鼠，生產單位：廣東省醫學實驗動物中心，實驗動物生產許可證號為：SCXK（粵）2018-0002，廣東省科學技術廳頒發。在動物房正常飼養2 d，溫度20.0℃～25.4℃；濕度65.8%～71.0%。以熱水浴方法誘導高熱驚厥，最終溫度確認為46℃，此次篩選的試驗大鼠均在5 min內發生驚厥，隨機將選出的75只大鼠分成5組：正常組，模型組，地西泮組，回春散低劑量組，回春散高劑量組。

3 主要儀器

水浴槽（自制，將40 cm×40 cm×50 cm分成4個小格，置于恒溫水箱中）；BS-110S電子天平（北京賽多利斯天平有限公司）；TG-16W臺式微量高速離心機（長沙湘智離心機儀器有限公司）。

4 劑量設計和實驗方法

將選出的75只大鼠，正常組以室溫進行水浴［3］，模型組和用藥組水浴的溫度為46℃。正常組和模型組灌胃生理鹽水，每日2次，連續2 d。其他3組給藥劑量如下：地西泮組：2.632 mg/kg灌胃（相當于兒童0.5 mg/kg臨床用量等效量），每日2次，連續2 d；回春散低劑量組：108 mg/kg灌胃（相當于兒童20 mg/kg臨床用量等效量），每日2次，連續2 d；回春散高劑量組：354 mg/kg灌胃（相當于兒童60 mg/kg臨床用量等效量），每日2次，連續2 d。將分組的大鼠連續灌胃2 d后，將模型組和用藥組分別進行46℃熱水浴實驗，時間為6 min，對于6 min未有驚厥發作視為不發生驚厥。在此過程中觀察每組大鼠驚厥潛伏期（指大鼠放入熱水中即刻至發生驚厥的時間，單位：秒）、驚厥持續時間（指大鼠由剛開始發生驚厥至驚厥停止的時間，單位：秒）和驚厥級別［4］。驚厥級別依發生的嚴重程度，具體分為：0級，沒有發生驚厥；I級，點頭，眨眼等面部抽動行為；II級，有節律性的點頭；III級，前肢陣攣，抽搐；IV級，全身強直；V級，全身強直，跌倒。隨后將所有大鼠斷頭處死，迅速取出大腦，稱量后置組織冷凍管中用液氮快速冷凍，隨后于-80℃低溫冰箱中保存待用。

對于保存的大腦組織神經遞質含量測定方法如下：準確地稱組織質量，按質量（g）：體積（mL）=1∶9的比例，加入9倍體積的生理鹽水，冰水浴條件下勻漿，2 500轉/min，離心10 min，取上清液，按檢測試劑盒說明書檢測Υ-氨基丁酸（GABA）及谷氨酸（Glu）含量［5］。

5 統計學分析

采用SPSS統計軟件進行處理，計量資料用平均值±標準差（±s），兩組間比較用t檢驗，P＜0.05時，具有統計學意義。

6 結果

6.1 各組大鼠驚厥程度比較 在常溫水中水浴，無驚厥現象的發生。該水浴溫度無出現死亡，但無用藥組發生驚厥非常明顯，用藥組與模型組比較：地西泮組P＜0.01，回春散低劑量組P＜0.01，回春散高劑量組P＜0.01，結果見表1。

表1 各組大鼠驚厥程度比較（n=15）

6.2 各組大鼠驚厥潛伏期、驚厥持續時間比較 各用藥組與模型組比較，驚厥潛伏期、驚厥持續時間均有顯著差異：地西泮組P＜0.01，回春散低劑量組P＜0.01，回春散高劑量組P＜0.01。各用藥組有差異，但無顯示差異，P＞0.05，結果見表2。

表2 各組大鼠驚厥潛伏期、驚厥持續時間比較（±s ，n=15）

表2 各組大鼠驚厥潛伏期、驚厥持續時間比較（±s ，n=15）

注：與模型組比較，*P＜0.01。

組別 潛伏期 持續時間模型組 240.3±31.2 138.7±22.6地西泮組 290.1±29.5* 99.7±13.2*回春散低劑量組 282.9±27.6* 105.2±16.7*回春散高劑量組 283.1±30.6* 101.3±13.5*

6.3 各組大鼠大腦皮質GABA和Glu檢測 各用藥組與模型組比較，大鼠大腦皮質組織的GABA和Glu均有顯著差異：地西泮組P＜0.01，回春散低劑量組P＜0.01，回春散高劑量組P＜0.01。各用藥組有差異，但無顯示差異，P＞0.05，結果見表3。

表3 各組大鼠大腦皮質GABA和Glu檢測結果（ ±s，n=15）

表3 各組大鼠大腦皮質GABA和Glu檢測結果（ ±s，n=15）

注：與模型組比較，*P＜0.05，**P＜0.01。

組別 Glu（μmol/gprot） GABA（nmol/gprot）正常組 80.2±8.9** 16.2±2.5**模型組 112.0±9.6 7.6±1.5地西泮組 86.5±8.5** 14.8±2.6**回春散低劑量組 90.1±8.7* 13.9±2.0**回春散高劑量組 86.1±9.0** 14.3±2.1**

7 討論

有研究表明興奮性氨基酸遞質與抑制性氨基酸遞質平衡失調在熱性驚厥（FC）發病機制中起到關鍵性作用，在驚厥發生前期，大腦皮質組織內的抑制性氨基酸遞質（GABA）水平降低， 興奮性氨基酸遞質（Glu）水平升高［6］。

回春散為上市多年的產品，在臨床上廣泛用于小兒驚風，感冒發熱等癥狀，是作為小兒發熱腦保護的首選用藥。本實驗通過熱水浴誘發驚厥，觀察到臨床經典用藥地西泮具有明顯地降低驚厥的作用，回春散兩個劑量組也有明顯地降低驚厥的作用，在大鼠驚厥程度、驚厥潛伏期和驚厥持續時間都有明顯改善。在用藥組中，對于大腦皮質組織內的GABA明顯提高，同時降低了Glu水平，該實驗結果與已報道的一些實驗整體結果一致。在結果中，回春散低劑量組與高劑量組在檢驗的數據中雖然有些差異，但無顯著性的差異，這可能與整個處方有關或其中某個有效物質并沒有量效關系，具體作用機制需進一步研究。

通過本實驗的整體研究，回春散可以延長熱性驚厥大鼠驚厥潛伏期，縮短驚厥持續時間，減輕驚厥嚴重程度，同時升高GABA水平，降低Glu水平，起到預防和治療小兒驚風，熱性驚厥的作用。