抗婦炎膠囊中苦參的質量控制研究

姜蓮 王影超 廖敏 許亞玲

【摘 要】? ?目的：? 研究并控制康婦炎膠囊中苦參的質量。 方法：? 采用薄層色譜法對苦參進行鑒別研究; 采用高效液相色譜法測定苦參中苦參堿、氧化苦參堿的含量，色譜柱為Angilent NH2（250mm×4.6mm，5μm），流動相為乙腈-無水乙醇-3%磷酸溶液（82∶ 9∶ 9），柱溫為30 ℃，流速為1.0mL/min，檢測波長220nm。 結果：? 薄層色譜斑點清晰，分離度較好; 高效液相色譜測定苦參堿在0.07030～1.75750μg（r=0.9999）、氧化苦參堿在0.06926～1.73155 μg（r=0.9999）范圍內線性關系良好，平均回收率分別為101.3%、97.4%，RSD分別為2.0%、1.7% （n=6） 。 結論：? 本研究方法準確可靠、重復性好，可用于康婦炎膠囊中苦參的質量控制。

【關鍵詞】? 康婦炎膠囊;苦參;苦參堿;氧化苦參堿;薄層鑒別;高效液相色譜法

【中圖分類號】R284.1? ?【文獻標志碼】 A? ? 【文章編號】1007-8517（2020）11-0023-04

Quality Control of Phellodendri Chinensis Cortex in Kangfuyan Capsule

JIANG Lian WANG Yingchao LIAO Min XU Yaling*

Guizhou Institute for Food and Drug Control，Guiyang 550004，China

Abstract：? Objective? To study and control the quality of Sophora flavescens Ait in Kangfuyan capsule. Methods? TLC was used for qualitative identification of Sophora flavescens Ait.HPLC was used for content determination of matrine and oxymatrine in Sophora flavescens Ait on a Angilent NH2 （250mm×4.6mm，5μm），and the mobile phase was acetonitrile-absolute ethanol-3%H3PO4（82∶ 9∶ 9） at the column temperature of 30 ℃.The flow rate was 1.0mL/min and the detection wavelength? was 220 nm. Results? The TLC spots were clear and showed a good separation. HPLC showed the linear range of matrine was 0.07030～1.75750μg（r=0. 9999）、 HPLC showed the linear range of oxymatrine was 0.06926～1.73155μg（r=0.9999），the average recovery Respectively was 101.3%、97.4%，and the RSD Respectively was 2.0%、1.7%（n=6）. Conclusion? The method is accurate with good reproducibility，which can be used for the quality control of Sophora flavescens Ait in Kangfuyan capsule.

Key words： Kangfuyan Capsule;Sophora Flavescens Ait;Matrine;Oxymatrine;TLC;HPLC

抗婦炎膠囊收載于國家中成藥標準匯編，中成藥地方標準上升國家標準部分，由苦參、杠板歸、黃柏、連翹、益母草等8味藥材組成，具有活血化瘀、清熱燥濕之功效。用于濕熱下注型盆腔炎、陰道炎、慢性宮頸炎，癥見赤白帶下、陰癢、出血、痛經等癥[1-2]。現行標準僅有苦參堿的TLC鑒別及苦參堿的HPLC含量測定，不能全面控制抗婦炎膠囊的質量，本實驗增修了苦參、氧化苦參堿的TLC鑒別、氧化苦參堿的HPLC含量測定，以期較全面地對苦參進行質量控制。

1 儀器與材料

1.1 儀器 島津 LC2010 液相色譜儀;KQ-500DB型數控超聲波提取儀（昆山市超聲儀器有限公司）;硅膠G薄層板：青島海洋化工廠分廠生產的硅膠G薄層板（批號：20140408）及自制硅膠G薄層板。

1.2 材料 抗婦炎膠囊由貴州遠程制藥有限責任公司提供（生產批號：20171031、20171121、20180251、20180121）;苦參對照藥材（121019-201006）、苦參堿對照品（110821-200711）、氧化苦參堿對照品（110821-200711）均來源于中國藥品生物制品檢定所;乙腈、無水乙醇均為色譜純，甲醇、磷酸、二氯甲烷、三氯甲烷、氨水、乙醇均為分析純，水（UPW-50N型超凈水器制備超純水）。

2 方法與結果

2.1 苦參TLC鑒別 取本品內容物2 g，加濃氨試液0.3 mL，再加二氯甲烷25 mL，加熱回流30 min，放冷，濾過，濾液蒸干，殘渣加乙醇2 mL使溶解，作為供試品溶液。另取苦參對照藥材1 g，同法制成對照藥材溶液。再取苦參堿對照品及氧化苦參堿對照品，分別加乙醇制成每1 mL含1 mg的溶液，作為對照品溶液。按處方比例稱取除苦參外其他藥材適量，制成缺苦參的陰性對照樣品，同法制備缺苦參的陰性對照溶液。照薄層色譜法[3]試驗，吸取上述供試品溶液及對照藥材溶液各2～3 μL、對照品溶液各6 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以二氯甲烷-甲醇-濃氨試液（5∶ 0.6∶ 0.3）10℃以下放置的下層溶液為展開劑，預飽和15 min，展開，取出，晾干，噴以稀碘化鉍鉀試液，置日光下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的主斑點，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點，且缺苦參的陰性對照無干擾。如圖1所示。

2.2 苦參堿、氧化苦參堿含量測定[4-6]

2.2.1 色譜條件 色譜柱：Angilent NH2（250 mm×4.6 mm 5μm）;流動相：乙腈-無水乙醇-3%磷酸溶液（82∶ 9∶ 9）;檢測波長為220 nm;柱溫30 ℃;流速：1.0 mL/min;進樣量10 μL。理論板數按氧化苦參堿峰計算，應不低于2000。

2.2.2 對照品溶液的制備 取苦參堿對照品、氧化苦參堿對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1 mL各含70 μg的溶液，即得。

2.2.3 供試品溶液的制備 取本品裝量差異項下的內容物，混勻，取0.5 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，加濃氨試液1 mL使濕潤，放置5 min，精密加入三氯甲烷25 mL，稱定重量，密塞，超聲處理（500W 40 KHz）30 min，放冷，再稱定重量，用三氯甲烷補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液10 mL，蒸干，殘渣加甲醇溶解，轉移至10 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續濾液，作為供試品溶液。

2.2.4 陰性供試品溶液的制備 取缺苦參陰性樣品，按照2.2.3制備成陰性供試品溶液，即得。

2.2.5 專屬性考察 取苦參堿、氧化苦參堿對照品溶液、抗婦炎膠囊供試品溶液及陰性供試品溶液各10 μL，按照“2.2.1”色譜條件注入液相色譜儀，供試品溶液色譜在與對照品溶液色譜相應位置有相應的色譜峰，且陰性無干擾，如圖2所示。

2.2.6 線性關系考察 精密取混合對照品（苦參堿70 μg/mL、氧化苦參堿70 μg/mL）1 μL、2 μL、5 μL、10 μL、15 μL、20 μL、25 μL依次注入液相色譜儀，測定峰面積。以對照品進樣量X（μg）為橫坐標，峰面積Y為縱坐標，進行線性回歸計算，繪制工作曲線（圖1～2），得出苦參堿線性回歸方程為：Y=508698X+1568.8，r=0.9999;氧化苦參堿線性回歸方程為：Y=508730X+1568.8，r=0.9999。苦參堿在0.07030～1.75750 μg、氧化苦參堿在0.06926～1.73155 μg的范圍內線性關系良好。

2.2.7 精密度試驗 精密量取同一混合對照品10 μL，連續進樣6次，記錄色譜圖峰面積，苦參堿對照品的峰面積RSD為0.2%，氧化苦參堿對照品的峰面積RSD為0.6%，結果說明儀器精密度良好。

2.2.8 重復性試驗 取同一批抗婦炎膠囊，按“2.2.3”供試品溶液制備方法制備6份，按“2.2.1”色譜條件測定苦參堿、氧化苦參堿的含量，結果測定苦參堿平均含量為3.9464 mg/g，RSD為1.8%;氧化苦參堿平均含量3.6970 mg/g，RSD為2.2%，表明方法重復性良好。

2.2.9 穩定性試驗 取同一批抗婦炎膠囊，按“2.2.1”色譜條件，于0 h、2 h、8 h、12 h、18 h、24 h，測定苦參堿、氧化苦參堿的峰面積，苦參堿RSD為0.6%、氧化苦參堿RSD為0.5%，表明供試品溶液在24 h內穩定性良好。

2.2.10 回收率試驗 取已測定含量的抗婦炎膠囊（苦參堿平均含量3.8847 mg/g;氧化苦參堿平均含量3.5853 mg/g）0.25g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，加濃氨試液1 mL使濕潤，放置5 min，精密加入含苦參堿對照品（0.03897 mg/mL）、氧化苦參堿對照品（0.03599 mg/mL）的三氯甲烷混合溶液25 mL，按“2.2.1”色譜條件測定苦參堿、氧化苦參堿的含量，計算回收率，結果見表1、表2。

2.2.11 樣品測定 取3批抗婦炎膠囊樣品，按“2.2.3”項下方法制備供試品溶液，按“2.2.1”色譜條件測定苦參堿、氧化苦參堿的含量，結果見表3。

3 討論

康婦炎膠囊的現行標準中苦參的質量控制僅有苦參堿的TLC鑒別及HPLC鑒別，專屬性較差，且薄層鑒別中提取方法及展開系統均含有對人體的毒害作用的三氯甲烷試劑，經考察并驗證，本文薄層鑒別采用毒性較小的二氯甲烷替代三氯甲烷進行實驗，方法可行;含量測定在考察提取溶劑時，二氯甲烷的提取效率明顯低于三氯甲烷，故暫不考慮替代。故本次研究，薄層方法中增加苦參對照藥材及氧化苦參堿對照品，含量測定方法增加了氧化苦參堿指標成分，為進一步控制苦參質量提出依據。

現行標準苦參含量測定色譜柱以“十八烷基硅烷鍵合硅膠”為填充劑，該方法很難得到較好的峰形，且重現性較差。實驗選用專屬性較強的“氨基硅烷鍵合硅膠”為填充劑的色譜柱進行考察，以乙腈-無水乙醇-3%磷酸溶液（82∶ 9∶ 9）為流動相，結果表明采用氨基鍵合硅膠為填充劑的色譜柱專屬性強、分離效果較好、重現性好。

參考文獻

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[5]王麗聰，李松. HPLC測定苦參配方顆粒中苦參堿與氧化苦參堿含量[J]. 鹽城工學院學報（自然科學版）， 2013，26（1）：48-51.

[6]王麗聰，李松. 苦參配方顆粒質量控制研究[J]. 現代藥物與臨床， 2012，27（5）：471-473.

（收稿日期：2020-02-26 編輯：程鵬飛）

基金項目： 國家藥典委員會國家藥品標準提高行動計劃項目（NO.89）。

作者簡介： 姜蓮（1984-），女，漢族，本科，主管藥師，研究方向為中藥檢驗及質量控制。E-mail：149853532@qq.com

通信作者： 許亞玲（1967-），女，漢族，本科，主任藥師，研究方向為中藥檢驗及質量控制。E-mail：499929857@qq.com