多因素響應面法優化紅景天抗氧化有效物質提取工藝

張睿 王 湘 王玥琦 馮麗莉

摘要? 目的：研究采用響應面法優化紅景天抗氧化有效物質的提取工藝。方法：以乙醇濃度、提取時間、乙醇用量為主要影響因素，紅景天苷提取率（%）、提取液體外DPPH清除率（%）和提取液體外總抗氧化能力為評價指標，采用3因素5水平響應面法對紅景天抗氧化有效物質提取工藝進行優化。結果：Design-Expert軟件優化得到的最佳提取工藝為，飲片加11倍體積46.60%乙醇溶液提取4.67 h，提取2次，合并提取液，濃縮，即得。該提取工藝下紅景天苷提取率為1.12%，提取液DPPH清除率為89.13%，總抗氧化能力為1.39 mmol/L。結論：用響應面法優化得到的紅景天抗氧化有效物質提取工藝簡便易行，準確性和重現性好。

關鍵詞? 紅景天;抗氧化;多因素;響應面法;紅景天苷提取率;DPPH清除率;總抗氧化能力;提取工藝

Optimal Extraction of Herba Rhodiolae Antioxidant Active Ingredients by Multi-factors Response Surface Methodology

ZHANG Rui，WANG Xiang，WANG Yueqi，FENG Lili

（College of Basic Medicine，Beijing University of Chinese Medicine，Beijing 100029，China）

Abstract Objective： To optimize the extraction technology of Herba Rhodiolae antioxidant active ingredients by response surface methodology. Methods： Based on ethanol concentration，extraction time and dosage of ethanol as the main in uencing factors，the 3 factor 5 level response surface methodology was applied to optimize antioxidant active ingredients extraction of Herba Rhodiolae with evaluation indexes including extraction yield of Herba Rhodiolae （%），extracting liquid outside DPPH clearance （%） and extracting liquid outside total antioxidant activities（mmol/L）. Results： The optimal extraction process optimized by Design-Expert software was as follows：decoction peices adding 11 times of 46.60% ethanol solution and were extracted from for 4.67 h twice.The extracts were combined and concentrated.Under this extraction process，the extraction rate of Herba Rhodiolae is 1.12%，the DPPH removal rate of the extract was 89.13%，and the total antioxidant capacity was 1.39 mmol/L. Conclusion： The extraction process of Herba Rhodiolae antioxidants optimized by response surface method is simple，easy to implement，and has good accuracy and reproducibility.

Keywords? Herba Rhodiolae; Antioxidant active ingredients; Multi-factors，Response surface methodology; Extraction yield of Herba Rhodiolae; DPPH clearance; The total antioxidant activities by FRAP methods; Extraction technology

中圖分類號：R284 文獻標識碼：A? doi： 10.3969/j.issn.1673-7202.2020.14.001

藏藥紅景天是景天科植物大花紅景天的干燥根和根莖，始載于公元8世紀藏醫藥經典《四部醫典》[1]，稱其為“長生不老草”“九死還生草”，被譽為“高原人參”，具有扶正固本、理氣養血等功效，《中華人民共和國藥典》（2015版一部）謂其“味甘、苦，平。歸肺、心經。功能益氣活血、通脈平喘，用于氣虛血瘀、胸痹心痛、中風偏癱、倦怠氣喘”[2]，是具有極高藥用價值的珍貴藥材。現代藥理學研究表明，紅景天具有抗腫瘤、抗抑郁、抗疲勞、抗缺氧和免疫調節等功效[3-5]。同時，紅景天提取物具有卓越的抗氧化能力，被廣泛應用于延緩機體衰老及防治氧化相關的老年性疾病[6-9]。另外，紅景天服用安全，原衛生部2002年已批準其為可用于保健食品的中藥品種[10]，是近年來國內炙手可熱的保健中藥，具有廣闊的應用前景。

目前紅景天藥材中分離出40多種化學物質，包括酚類、黃酮類、生物堿類、揮發油以及其他的一些常見物質（氨基酸類、多糖類、果膠、蛋白質、蠟等）[11]，其中紅景天苷被認為是紅景天保健功效的最重要成分。因此目前紅景天的提取制備以及產品的質量控制中一般以紅景天苷提取率或者含量作為指標進行優化評價[12]，而中藥中其他同樣有可能發揮抗氧化活性的有效物質卻沒有得到體現。為了綜合評價紅景天提取物抗氧化能力，最大限度的提取紅景天藥材中抗氧化有效物質，本研究擬以紅景天苷提取率（%）、提取液體外DPPH清除率（%）和提取液總抗氧化能力（mmol/L）3者相結合的綜合效應作為評價指標，采用星點設計-響應面方法對紅景天抗氧化有效物質的提取工藝進行優化。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 高效液相色譜儀（配有PDA檢測器、四元梯度泵、在線脫氣機、自動進樣器、Empower工作站，美國沃特世科技有限公司，美國，型號：2695-2996）;酶標儀（美國賽默飛世爾科技有限公司，美國，型號：Thermo MK3）;精密電子天平（瑞士梅特勒-托利多國際股份有限公司，瑞士，型號：AL104-IC）;超聲波清洗器（江蘇昆山市超聲儀器有限公司，型號：KQ-500E）;旋轉蒸發器（上海亞榮生化儀器廠，型號：RE-52）;紫外可見分光光度計（北京萊伯泰科儀器有限公司，型號：BlueStar）;中草藥打粉機[泰斯特儀器設備（天津）有限公司，型號：FW17];智能恒溫水浴鍋（北京市長風儀器儀表公司，型號：HW SY21/KP6）;控溫數顯電熱套[泰斯特儀器設備（天津）有限公司，型號：98-I-B]。

1.2 試劑 美國Cayman Chemical的1，1-二苯基-2-三硝基苯肼（1，1-diphenyl-2-picryl-hydrazyl，DPPH，批號：14805）;總抗氧化能力試劑盒[T-AOC檢測試劑盒（FRAP法）微板法，南京建成生物工程研究所，批號：A015]及其他分析試劑甲醇（北京化學試劑公司，批號：bh100619）;乙醇（北京化學試劑公司，批號：BH100213，95%乙醇）;色譜試劑甲醇（北京匯海科儀科技有限公司，Fisher Scientific，美國，批號：A452-4）;乙腈（北京匯?？苾x科技有限公司，Fisher Scientific，美國，批號：A998-4）。

1.3 藥物 中藥紅景天飲片[北京同仁堂（集團）有限責任公司，批號：20160921];紅景天苷標準品（中國食品藥品檢定研究院，批號：110818-201507）。

2 方法與結果

2.1 優化指標測定

2.1.1 HPLC法測定紅景天苷提取率

2.1.1.1 色譜條件 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑C18分析柱（4.6 mm×150 mm，5 μm，Dikma），甲醇-水（15∶ 85）為流動相，柱溫30 ℃，進樣體積10 μL。取濃度為44.70 μg/mL紅景天苷標準品溶液進樣后經二極管陣列檢測器全波長掃描，可見紅景天苷在275 nm波長處有最大吸收，保留時間9.7 min，該色譜條件下，色譜峰分離良好，故測定時選用此波長。

2.1.1.2 紅景天苷對照品儲備液的配制 精密稱取紅景天苷對照品29.80 mg置于100 mL棕色容量瓶中，加甲醇適量超聲溶解后稀釋至刻度，得到濃度為298.00 μg/mL的紅景天苷對照品儲備液，即得。

2.1.1.3 供試樣品的制備 取紅景天藥材粉末（過10目篩）適量，精密稱定，置圓底燒瓶中，按提取實驗安排提取，提取前后稱定質量，并用相同溶劑補足，過濾后合并濾液，混勻，經0.45 μm微孔濾膜濾過，取續濾液即得。

2.1.1.4 紅景天苷線性關系考察 精密吸取紅景天苷對照品儲備液（298.00 mg/L）0.50 mL、1.00 mL、1.50 mL、2.00 mL、2.50 mL和3.00 mL分別置于10 mL棕色容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，得到濃度范圍在14.90～89.40 mg/L的紅景天苷對照品溶液。按“2.1.1.1”項下色譜條件測定紅景天苷峰面積，以對照品濃度（C）為橫坐標，紅景天苷峰面積（A）為縱坐標，得回歸方程A=3 009.2C-13 796，相關系數R為0.999 7，表明該濃度范圍內紅景天苷線性關系良好。

2.1.1.5 精密度考察 取線性關系考察項下的濃度為44.70 mg/L的紅景天苷對照品溶液，按“2.1.1.1”項下色譜條件，重復進樣6次，測定紅景天苷峰面積，計算RSD為0.89%，表明該方法測定紅景天苷精密度符合要求。

2.1.1.6 穩定性實驗? 取紅景天飲片（20160921批）粉末適量，精密稱定，加入60%乙醇30 mL，稱取總重量，加熱回流提取1 h，補足重量后過濾，取續濾液適量，分別于0 h、2 h、4 h、6 h、10 h、24 h，按“2.1.1.1”項下色譜條件測定紅景天苷峰面積，計算RSD為1.93%，表明紅景天苷樣品24 h內穩定。

2.1.1.7 重復性實驗 取紅景天飲片（20160921批）粉末適量，精密稱定，加入60%乙醇30 mL，稱取總重量，加熱回流提取1 h，補足重量后過濾，取續濾液適量，平行操作6份，按“2.1.1.1”項下色譜條件測定紅景天苷峰面積，計算其平均含量，計算RSD為1.89%，表明該方法測定紅景天苷重復性符合要求。

2.1.1.8 回收率實驗 采用加樣回收法，精密吸取“2.1.1.7”項下重復性實驗樣品1 mL，分別加入濃度為44.70 μg/mL的紅景天苷對照品溶液1 mL，混合均勻，按“2.1.1.1”項下色譜條件測定紅景天苷峰面積，計算其加樣回收率為98.98%，RSD為1.97%。見表1。

2.1.1.9 紅景天苷提取率的計算 將供試品溶液按“2.1.1.1”項下色譜條件測定其中紅景天苷峰面積，根據“2.1.1.4”項下標準曲線計算紅景天苷濃度C，按照以下公式計算其提取率：

2.1.2 DPPH自由基清除率測定

2.1.2.1 DPPH溶液的配制 精密稱取DPPH 2.59 mg于10 mL容量瓶中，甲醇溶解并定容，得到濃度為259.00 mg/L的DPPH溶液，0～4 ℃避光保存，當天臨用現配。

2.1.2.2 測定方法 為了消除提取液本身顏色對測定的干擾，在測定中引入了提取液在514 nm波長下自身的吸收度Aj。

1）Ai：取提取液1 mL，加入250 μL DPPH溶液于同一具塞試管中，搖勻，在黑暗中37 ℃保溫20 min，以甲醇為空白在514 nm測定其吸光度Ai。

2）A0：取甲醇1 mL，加入250 μL DPPH溶液于同一具塞試管中，搖勻，在黑暗中37 ℃保溫20 min，以甲醇為空白在514 nm測定其吸光度A0。

3）Aj：取提取液1 mL，加入250 μL的甲醇于同一具塞試管中，搖勻，在黑暗中37 ℃保溫20 min，以甲醇為空白在514 nm測定其吸光度Aj。

試驗重復3次，根據下列公式計算植物提取液對DPPH的抑制率，求得平均值：

抑制率（%）=（1-（Ai-Aj）/A0）×100%

注：Ai為加提取液后DPPH溶液的吸光度，A0為未加提取液時DPPH溶液的吸光度，Aj為提取液在測定波長的吸光度。

2.1.3 總抗氧化能力的測定（FRA P 值測定）

2.1.3.1 測定方法 按照試劑盒說明書配置工作液進行檢測。

2.1.3.2 標準曲線 稱取27.80 mg試劑盒提供的FeSO4·7H2O，加水溶解并稀釋到10 mL，此時濃度即為10 mmol/L。取適量10 mmol/L FeSO4溶液15 μL、30 μL、60 μL、90 μL、120 μL、150 μL稀釋至1 mL，得到濃度分別為0.15 mmol/L、0.30 mmol/L、0.60 mmol/L、0.90 mmol/L、1.20 mmol/L和1.50 mmol/L的FeSO4標準溶液。分別吸取100 μL標準溶液點板，采用酶標儀于630 nm波長處測定吸光度，以吸光度A為縱坐標，FeSO4標準溶液濃度C為橫坐標，繪制標準曲線，得A=0.402 2C-0.084 7，相關系數R為0.999 5，表明FeSO4濃度在0.15～1.50 mmol/L范圍內線性關系良好。

注：樣品的抗氧化能力用FeSO4標準溶液的濃度來表示，即1FRAP單位=1 mmol/L FeSO4。

2.2 單因素優化紅景天提取溶劑

文獻中有關紅景天提取溶劑的選擇不一致，為了綜合多指標考察紅景天抗氧化有效物質的提取工藝，首先采用單因素方法對紅景天提取影響較大的因素進行考察，確定優化范圍，包括乙醇濃度、提取時間和料液比。取紅景天飲片（批號：20160921），用銅舂初搗后采用粉碎機進行粗粉，粉末過1號篩待用。在其他處理條件一致的情況下，分別考察乙醇濃度（0、20%、40%、60%、80%、100%）、料液比（1∶ 5、1∶ 7、1∶ 12）、提取時間（1 h、2 h、3 h）對紅景天抗氧化有效物質化提取效果的影響。

2.2.1 乙醇濃度的影響 固定料液比為1∶ 7、提取時間為2 h，考察不同濃度乙醇對紅景天苷提取率和提取液體外抗氧化活性的影響。見圖1。從中可見表明，隨著乙醇濃度不斷增加，紅景天苷提取率呈現先上升后下降的趨勢，60%乙醇提取率最高;DPPH清除率隨著乙醇濃度升高開始緩慢上升，但當濃度增加至60%以后開始下降，80%乙醇時清除率明顯降低;總抗氧化能力隨著乙醇濃度升高不斷減小。綜合3方面的因素，說明乙醇濃度過高和過低均不利于紅景天中抗氧化有效物質的提取，低于40%紅景天苷提取率偏低，超過80%時3個指標均顯著下降，因此提取溶劑中乙醇濃度的優化范圍設置在40% ～80%之間較為合理。

2.2.2 提取時間的影響 固定乙醇濃度為60%、料液比為1∶ 7，考察不同提取時間對紅景天抗氧化有效物質提取效果的影響。見圖2。結果表明，隨著提取時間的增加，3個指標都呈現上升的趨勢。

2.2.3 料液比的影響 固定乙醇濃度為60%、提取時間為2 h，考察不同料液比對紅景天抗氧化有效物質提取效果的影響。見圖3。隨著料液比的增加，紅景天苷的提取率隨之上升，但是1∶ 7與1∶ 12結果相差不大，提取液總抗氧化能力先下降后上升，DPPH清除率則呈現先上升后下降的趨勢。由于料液比對3個指標的影響不一致，出于生產實際操作的可行性和節約資源的角度，料液比的優化范圍設置在1∶ 6～1∶ 12范圍內。

2.3 星點設計實驗方案 提取工藝優化：

影響提取效果的因素主要包括乙醇濃度、提取時間、提取次數和料液比，其中由于提取次數為非連續變量，回歸處理較困難，為了簡化實驗，將提取次數暫定為1次。在單因素考察的基礎上，選取乙醇濃度（X1）、提取時間（X2）、料液比（X3）3個因素作自變量，以提取液中紅景天苷提取率（%，Y1）、DPPH清除率（%，Y2）和總抗氧化能力（mmol/L，Y3）作因變量，采用響應面法優化最佳提取工藝，各因素的水平設計見表2。取紅景天藥材5 g左右，精密稱定，加入適量提取溶劑，按照表3安排試驗，提取液濾過、合并、濃縮后，按照“2.1”項下，測定紅景天苷提取率（%）、DPPH清除率（%）和總抗氧化能力（mmol/L）。見表3。

2.4 模型擬合和提取工藝優化

采用Design-Expert 10.0.3對紅景天提取工藝實驗結果進行多元回歸擬合。經過運算后得到紅景天苷提取率（Y1，mg/g）、DPPH清除率（Y2，%）和總抗氧化能力（Y3，mmol/L）對乙醇濃度（X1）、提取時間（X2）、料液比（X3）的模型，其擬合回歸模擬方程如下，其回歸模型的方差分析見表4。

Y1=（-430.31+48.76X1+72.55X2+6.25X3-1.05X1X2+0.36X1X3+3.41X2X3-0.44X12-2.94X22-2.04X32）×10-3（R2=0.914 3，RAdj2=0.974 4）

Y2=-20.89+1.74X1+2.26X2+13.15X3+0.02X1X2-0.07X1X3-0.18X2X3-0.01X12-0.11X22-0.43X32（R2=0.898 2，RAdj2=0.955 6）

Y3=（-610+33.64X1+162.47X2+182.23X3+0.25X1X2-0.80X1X3-1.89X2X3-0.35X12-23.45X22-4.96X32）×10-3（R2=0.892 5，RAdj2=0.942 8）

從表4中數據可見，X1、X2和二次項X1X2、X12對紅景天苷提取率（Y1）有極顯著影響（ P <0.01），其他因素的影響差異無統計學意義（ P >0.05）;X1、X2和二次項X1X3、X12、X32對DPPH清除率（Y2）有極顯著影響（ P <0.01），X3有顯著影響（ P <0.05），其他因素的影響差異無統計學意義（ P >0.05）;X1、X3和二次項X12、X22對總抗氧化能力（Y3）有極顯著影響（ P <0.01），其他因素的影響差異無統計學意義（ P >0.05）。綜合各因素對于3個評價指標，對紅景天抗氧化有效物質提取效果影響最大的因素是乙醇濃度X1，交互因素也會對3個指標產生不同的影響。圖4為固定第3因素條件下，其他2項因素對紅景天苷提取率（Y1）、DPPH清除率（Y2）和總抗氧化能力（Y3）交互效應的響應面圖。

利用Design-Expert 10.0.3軟件對上述實驗結果進行優化，以Y1、Y2和Y3均最大化為原則，結合實際操作的可行性，得到優化的最佳提取工藝條件為：飲片加入11倍量46.60%乙醇，提取4.67 h，收集提取液，濃縮即得。

2.5 提取次數優化及驗證試驗

采用“2.4”項下得到的最佳提取工藝分別提取1、2、3次，平行操作3份，分別測定3個指標，考察最佳提取次數。見表5，并將預測值與提取一次的實測值比較并計算偏差，預測值紅景天苷提取率為1.10%，DPPH清除率為88.61%，總抗氧化能力為1.40 mmol/L，實測值分別為1.12%、89.13%和1.39 mmol/L，RSD分別為3.45%、1.78%和3.60%，預測值與實測值的偏差較小，說明該工藝穩定可行，具有實際應用價值。

在最佳提取工藝條件下，提取次數增加紅景天苷提取率呈增高趨勢，但是提取2次和3次時無明顯差異，而DPPH清除率和總抗氧化能力在提取3次時明顯低于2次，綜合3個指標的結果，確定提取次數為2次。

3 討論

紅景天作為傳統藏藥，主要以根和莖入藥，以其獨特的藥理效果在臨床中應用良好，常用于治療冠心病、慢性疲勞癥、慢性腎炎等病癥，另由于其具有明確的抗氧化性能，能夠有效的對抗自由基，降低體內自由基對細胞的氧化損害，抗脂質過氧化，延緩機體衰老以及預防阿爾茨海默病等老年病的發生[13-15]，因此是極具開發價值的保健藥材。有關紅景天苷提取工藝的研究較多，有加熱回流提取[16]、超聲提取[17]、微波提取[18]等，但多數以提取液中以紅景天苷為代表的單一成分的提取率作為考察指標進行工藝優化，未能體現提取物抗氧化作用的其他有效物質的提取效果。結合生產過程的實際情況，本研究采用加熱回流提取方法，通過對紅景天苷提取率和提取物體外抗氧化活性雙重指標對紅景天抗氧化有效物質的提取工藝進行優化。

由于體外抗氧化活性判斷的標準紛繁復雜，基于不同的化學反應原理，其評價的方式均有很大的不同。為了研究紅景天提取液抗氧化活性在不同方面的應用，本研究選取了提取液DPPH清除率和總抗氧化能力2種不同的體外抗氧化活性評價指標，對提取工藝進行評價。DPPH在有機溶劑中是一種穩定的自由基，其醇溶液呈深紫色，具有單一電子，故能夠接受一個電子或是氫離子，在波長為514 nm下具有最大光吸收。有自由基清除劑存在時，DPPH的單電子被捕捉而使其顏色變淺，在最大光吸收波長處的吸光值下降，從而評價樣品的抗氧化能力。待測樣品的抗氧化能力用DPPH清除率來表示，清除率越大，抗氧化性越強[19]。FRAP法測定總抗氧化能力的原理是酸性條件下抗氧化物可以還原Ferric-tripyridyltriazine（Fe3+-TPTZ）產生藍色的Fe2+-TPTZ，隨后測定藍色的Fe2+-TPTZ吸光度即可獲得樣品的總抗氧化能力。中藥提取液總抗氧化能力的檢測可以用于檢測各種溶液的抗氧化能力的強弱，用于篩選強抗氧化能力的藥物[20]。

本研究中采用紅景天苷提取率和2種體外抗氧化指標（DPPH清除率和總抗氧化能力）相結合的綜合評價指標，采用響應面優化方法對紅景天抗氧化有效物質提取工藝進行優化。

響應曲面法是建立在數學、統計學、計算機科學基礎上，采用多元二次回歸方程來考察各因素與響應值之間的函數關系，能對優選出的實驗參數進行全面分析的一種統計方法，可以在實驗中進行非線性擬合，與傳統的正交試驗和均勻設計比較，具有操作簡單、精度高、預測性好等優點[21-23]。因此本研究中采用星點設計響應面法對紅景天抗氧化有效物質提取工藝進行優化，并通過實驗驗證了實測值與Design-Expert 10.0.3軟件的預測值基本相符，說明本工藝對紅景天抗氧化有效物質的提取是穩定可行。結合單因素優化提取次數的結果，最佳工藝為飲片加入11倍量46.60%乙醇，提取4.67 h，提取2次，收集提取液，濃縮即得。該研究可以為紅景天抗氧化功效產品的開發提供一定的借鑒意義。

參考文獻

[1] 宇妥·元丹貢布.四部醫典[M].北京：人民衛生出版社，1983：54.

[2]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（一部）[M].北京：中國醫藥科技出版社，2015：154-155.

[3]Zhang K，Si XP，Huang J，et al.Preventive effects of Rhodiola rosea L.on bleomycin-induced pulmonary fibrosis in rats[J].Int J Mol Sci，2016，17（6）：E879.

[4]Amsterdam JD，Panossian AG.Rhodiola rosea L.as a putative botanical antidepressant[J].Phytomedicine，2016，23（7）：770-783.

[5]Cropley M，Banks AP，Boyle J.The effects of Rhodiola rosea L.extract on anxiety，stress，cognition and other mood symptoms[J].Phytother Res，2015，29（12）：1934-1939.

[6]Ma GP，Zheng Q，Xu MB，et al.Rhodiola rosea L.improves learning and memory function：preclinical evidence and possible mechanisms[J].Front Pharmacol，2018，9：1415.

[7]Li Y，Pham V，Bui M，et al.Rhodiola rosea L.：an herb with anti-stress，anti-aging，and immunostimulating properties for cancer chemoprevention[J].Curr Pharmacol Rep，2017，3（6）：384-395.

[8]Kosakowska O，Bczek K，Przyby JL，et al.Antioxidant and Antibacterial Activity of Roseroot（Rhodiola rosea L.）Dry Extracts[J].Molecules，2018，23（7）：E1767.

[9]Nabavi SF，Braidy N，Orhan IE，et al.Rhodiola rosea L.and Alzheimer′s Disease：From Farm to Pharmacy[J].Phytother Res，2016，30（4）：532-539.

[10] 楊澤.紅景天治療慢性心肌梗死合并心力衰竭患者的臨床效果[J].中國藥物經濟學，2019，14（7）：86-88.

[11]尼瑪次仁，劉青，多杰仁青，等.青藏高原紅景天研究進展及存在問題[J].中華中醫藥雜志，2013，28（9）：2675-2678.

[12]王建元.紅景天有效成分提取工藝及微量元素研究[D].成都：西南交通大學，2013.

[13]Cui JL，Guo TT，Ren ZX，et al.Diversity and antioxidant activity of culturable endophytic fungi from alpine plants of Rhodiola crenulata，R.angusta，and R.sachalinensis[J].PLoS One，2015，10（3）：e0118204.

[14]Schriner SE，Lee K，Truong S，et al.Extension of Drosophila lifespan by Rhodiola rosea through a mechanism independent from dietary restriction[J].PLoS One，2013，8（5）：e63886.

[15]Gao J，He H，Jiang W，et al.Salidroside ameliorates cognitive impairment in a d-galactose-induced rat model of Alzheimer′s disease[J].Behav Brain Res，2015，293：27-33.

[16]蒲忠慧，汪謙，孫小程，等.均勻設計優選紅景天提取工藝研究[J].綿陽師范學院學報，2016，35（8）：11-15.

[17]高偉，李鳳林，李光耀，等.超聲波輔助法提取紅景天苷工藝研究[J].吉林農業科技學院學報，2017，26（2）：4-7.

[18]閔建華，曹旻旻，韋冬菊，等.微波輔助提取紅景天苷的工藝研究[J].中草藥，2012，43（8）：1536-1539.

[19]吳剛，韓勇.87種中藥抗氧化活性篩選研究[J].中國藥物經濟學，2014，9（3）：238-239.

[20]夏伯候，熊蘇慧，唐潔，等.基于多元統計分析的夏枯草多重藥效物質與抗氧化活性分析[J].中國中藥雜志，2018，43（23）：4645-4651.

[21]侯敏娜，李永梅，辛新.響應曲面法優化超聲-輔助提取玉米須多糖的工藝研究[J].世界中醫藥，2017，12（8）：1923-1926，1932.

[22]Pepe A，Tito FR，Daleo GR，et al.Optimization of fibrinogenolytic activity of Solanum tuberosum subtilisin-like protease（StSBTc-3）by response surface methodology[J].Biotechnol Rep（Amst），2019，22：e00330.

[23]張爽，劉治飛，高潔，等.陜產瞿麥中總黃酮提取工藝響應曲面法的優化[J].世界中醫藥，2018，13（7）：1541-1545.

（2019-04-26收稿 責任編輯：楊覺雄）