魚腥草破壁飲片對內毒素致熱家兔的解熱作用研究

弓銘 楊若聰 代耀蘭 吳傳鴻 陳煒璇 段飛鵬 趙慧輝 王佩佩 孫燕 成金樂 李韶菁

摘要?目的：考察魚腥草破壁飲片對內毒素致家兔發熱的解熱作用及血液中內毒素含量，血清中炎性因子含量的影響。方法：采用家兔耳緣靜脈注射內毒素制備家兔發熱模型，測量給藥前及給藥后4 h各組家兔體溫，觀察魚腥草破壁飲片對致熱家兔體溫的影響;4 h后，耳緣靜脈采血，檢測全血中白細胞數量，血漿中內毒素含量，以及用ELISA法檢測血清中炎性反應因子IL-6、IL-1β、TNF-α的含量。結果：與對照組比較，模型組體溫、全血中白細胞含量、血漿中內毒素含量以及血清中IL-1β，IL-6、TNF-α的含量均顯著增高。與模型組比較，魚腥草破壁飲片高、中劑量組能顯著地降低致熱1 h后的家兔體溫;并且，其可顯著降低全血中白細胞含量、血漿中內毒素含量。與魚腥草傳統飲片組比較，魚腥草破壁飲片可顯著降低致熱1 h后的家兔體溫、全血中白細胞含量以及血清中IL-6的含量，差異有統計學意義。魚腥草破壁飲片和傳統飲片均可不同程度降低IL-1β、TNF-α含量。結論：魚腥草破壁飲片可顯著清除家兔體內內毒素，使其體溫下降，且在一定程度上優于傳統飲片。

關鍵詞?魚腥草破壁飲片;家兔致熱模型;內毒素;家兔;炎性因子;體溫;白細胞介素-1β;腫瘤壞死因子-α;白細胞介素-6

Abstract?Objective：To investigate the effect of ultrafine granular powder of heartleaf houttuynia herb on endotoxin-induced fever in rabbits， the content of endotoxin in blood and the content of inflammatory factors in serum.Methods：A rabbit fever model was prepared by endotoxin injection into rabbit ear margin， and the body temperature of each group of rabbits was measured before and 4 hours after administration， and the effect of ultrafine granular powder of heartleaf houttuynia herb on fevered rabbit temperature was observed; after 4 hours， blood was collected from the ear veins to detect the number of white blood cells in the whole blood， the content of endotoxin in the plasma， and the content of the inflammatory response factors IL-6， IL-1β and TNF-α in the serum were detected by ELISA.Results：Compared with the control group， the body temperature， leukocyte content in whole blood， plasma endotoxin content， and serum IL-1β， IL-6， TNF-α levels in the model group were significantly increased.Compared with the model group， the high-and medium-dose group of ultrafine granular powder of heartleaf houttuynia herb can significantly reduce the rabbit′s body temperature after 1 hour of heating; moreover， it can significantly reduce the content of white blood cells in blood and endotoxin in plasma.Compared with heartleaf houttuynia pieces group， ultrafine granular powder of heartleaf houttuynia herb can significantly reduce the rabbit′s body temperature， leukocyte content in whole blood and IL-6 content in serum after 1 hour of heating.The difference was statistically significant.Both heartleaf houttuynia pieces and ultrafine granular powder of heartleaf houttuynia herb can reduce the content of IL-1β and TNF-α to varying degrees.Conclusion：Ultrafine granular powder of heartleaf houttuynia herb can significantly remove endotoxins in rabbits and make their body temperature drop， and it is better than heartleaf houttuynia pieces to some extent.

Keywords?Ultrafine granular powder of heartleaf houttuynia herb; Rabbit fever model; Endotoxin; Rabbits; Inflammatory Cytokines; Body temperature;IL-1β; TNF-α; IL-6

中圖分類號：R285.5文獻標識碼：Adoi：10.3969/j.issn.1673-7202.2020.13.015

魚腥草為三白草科蕺菜屬植物Houttuynia cordata Thunb.的新鮮全草或干燥地上部分。性味辛、微寒，歸肺經。中醫功效主要有清熱解毒、消癰排膿、利尿通淋等。主治肺癰吐膿、痰熱喘咳、熱淋、熱痢、癰腫瘡毒、咽喉腫痛等癥，是“治療肺癰之要藥”[1]?，F代藥理研究認為魚腥草具有顯著的解熱、抗炎作用，魚腥草破壁飲片是傳統飲片經過現代加工技術，保留藥物原有成分制備成的新型中藥飲片，具有服用方便、吸收率高等特點[2-3]。本實驗通過復制內毒素致家兔發熱模型，觀察魚腥草破壁飲片對內毒素致家兔發熱后體溫的影響，同時測定全血中白細胞含量，血漿中內毒素含量以及血清中炎性反應因子IL-6、IL-1β、TNF-α的含量，考察其抗內毒素作用，并比較魚腥草破壁飲片與傳統飲片的抗內毒素方面存在的差異，現將結果報道如下。

1?材料與方法

1.1?材料

1.1.1?動物?普通級新西蘭家兔56只（動物生產許可證號為SCXK（京）2017-0002，實驗動物合格證號：11400800012460），平均體質量（2.0±0.2）kg。飼養于符合國家標準的北京中醫藥大學科研中心動物室，室溫20～25 ℃，相對濕度50%，適應性喂養7 d，普食飼養，自由飲水，定期進行紫外消毒通風。

1.1.2?藥物?魚腥草破壁飲片（中山市中智藥業集團有限公司，批號：20160905）;魚腥草傳統飲片（中山市中智藥業集團有限公司，批號：20160902）;鹽酸異丙嗪注射液（天津金耀藥業有限公司，批號：1701041）;內毒素LPS（Sigma公司，美國，批號：076M4029V）。

1.1.3?試劑與儀器?動態顯色法鱟試劑（湛江安度斯生物有限公司，中國，批號：1701050）;細菌內毒素工作標準品（中國藥品生物制品檢定所，批號：150601-201782）;細菌內毒素檢查用水（湛江安度斯生物有限公司，批號：1702130）;Rabbit IL-6 ELISA試劑盒（北京海誠遠宏科技有限公司，批號：170720）;Rabbit IL-1βELISA試劑盒（北京海誠遠宏科技有限公司，批號：170721）;Rabbit TNF-αELISA試劑盒（北京海誠遠宏科技有限公司，批號：170722）;多功能酶標儀（美國分子儀器公司，美國，貨號：M5）;血細胞分析儀（江西特康三分群血細胞分析儀，貨號：TEK-IIMINI）。

1.2?方法

1.2.1?分組與模型制備?將56只新西蘭家兔按照隨機數字表法隨機分成7組，分別命名為對照組、模型組、非那根組、魚腥草傳統飲片組、魚腥草破壁飲片低劑量組、魚腥草破壁飲片中劑量組、魚腥草破壁飲片高劑量組，每組8只，雌雄各半。對照組給予常規飼養，其他各組家兔，在分別給予相應組別的藥物半小時后，通過耳緣靜脈注射1 mL（4 ng/mL）（20 EU）內毒素稀釋液，建立家兔發熱模型。

1.2.2?給藥方法?1）飲片儲液配制：以生藥量計算，進行受試樣品魚腥草破壁飲片和魚腥草傳統飲片儲液的配制。魚腥草破壁飲片：分別稱取48 g、24 g、12 g的破壁飲片作為魚腥草破壁飲片高、中、低劑量組，用研缽均勻研磨成細粉，加入生理鹽水200 mL，配置成混懸液，浸泡24 h，用時混懸后按照5 mL/kg灌胃給藥。魚腥草傳統飲片：稱取24 g的傳統飲片，用打粉機磨成細粉，加入生理鹽水200 mL，配置成混懸液，浸泡24 h，用時混懸后按照5 mL/kg灌胃給藥。2）實驗前準備：實驗前3天每天測定家兔肛溫2次使家兔適應實驗操作，選擇平均體溫在38.5～39.5 ℃且體溫波動不超過0.3 ℃的家兔用于試驗;實驗前1天禁食16 h;3）給藥劑量：實驗當天測定各組家兔的基礎體溫，各組灌胃給予相應藥物，非那根組（0.025 g/kg）、魚腥草傳統飲片組（0.6 g/kg）、魚腥草破壁飲片低劑量組（0.3 g/kg）、魚腥草破壁飲片中劑量組（0.6 g/kg）、魚腥草破壁飲片高劑量組（1.2 g/kg），空白對照組和模型組灌胃給予等體積純水;給藥后半小時，每組家兔耳緣靜脈注射1 mL（4 ng/mL）（20 EU）內毒素稀釋液;分別測定注射內毒素后1、2、3、4 h家兔體溫，并于造模4 h后耳緣靜脈取血4 mL。

1.2.3?檢測指標與方法?內毒素致熱4 h后，耳緣靜脈采血，對全血進行血常規檢測，測定全血中白細胞的含量;用動態顯色法鱟試劑檢測血漿進行內毒素含量;酶聯免疫法檢測血清中炎性因子IL-6、IL-1β、TNF-α的含量。

1.3?統計學方法?采用SPSS 18.0統計軟件進行數據分析，計量數據以均數±標準差（±s）表示，采用配對t檢驗;計數資料用百分比/率（%）表示，采用χ2檢驗，以P<0.05為差異有統計學意義。

2?結果

2.1?魚腥草破壁飲片對內毒素致熱家兔體溫的影響?家兔給予內毒素后，于內毒素給與后1 h，2 h，3 h和4 h進行家兔體溫的檢測。內毒素給予1 h后，與對照組比較，模型組體溫顯著升高，差異有統計學意義（P<0.01）;與模型組比較，魚腥草高劑量組和中劑量組可顯著降低家兔體溫，差異有統計學意義（P<0.05）;內毒素給予1 h后，魚腥草破壁飲片高劑量組和中劑量組與魚腥草傳統飲片組比較，對家兔的體溫有顯著降低作用，差異有統計學意義（P<0.05）;對于其他時間點，魚腥草破壁飲片及傳統飲片對家兔體溫有降低的改善作用趨勢，但不明顯。見表1。

2.2?魚腥草破壁飲片對內毒素致家兔發熱后全血中白細胞數含量的影響?內毒素致熱4 h后，耳緣靜脈采血，對全血進行血常規檢測，測定全血中白細胞的含量。模型組全血中白細胞含量顯著高于對照組，差異有統計學意義（P<0.05）;與模型組比較，魚腥草破壁飲片高劑量組可顯著降低全血中白細胞含量，差異有統計學意義（P<0.05）。非那根組，魚腥草傳統飲片組，魚腥草破壁飲片低劑量組、中劑量組全血中白細胞含量與模型組比較，差異無統計學意義（P>0.05）。見表2。

2.3?魚腥草破壁飲片對內毒素致家兔發熱后血漿中內毒素含量的影響?內毒素致熱4 h后，耳緣靜脈采血，用鱟試劑對血漿進行內毒素含量的檢測。模型組血漿中內毒素含量顯著高于對照組，差異有統計學意義（P<0.05）。魚腥草破壁飲片高劑量組可顯著降低血漿中內毒素含量，差異有統計學意義（P<0.05）。非那根組，魚腥草傳統飲片組，魚腥草低劑量組、中劑量組血漿中內毒素含量與模型組比較，差異無統計學意義（P>0.05）。魚腥草破壁飲片高劑量組與魚腥草傳統飲片組比較，可顯著降低血漿中內毒素的含量，差異有統計學意義（P<0.05）。見表2。

2.4?魚腥草破壁飲片對內毒素致熱家兔血清中炎性因子含量的影響?內毒素致熱4 h后，耳緣靜脈采血，對血清中細胞因子IL-6含量的檢測。模型組血清中細胞因子IL-6含量顯著高于對照組，差異有統計學意義（P<0.05）;魚腥草破壁飲片中劑量組，高劑量組及非那根組均可不同程度降低血清中細胞因子IL-6含量，差異有統計學意義（P<0.05）;魚腥草傳統飲片組、魚腥草破壁飲片低劑量組血漿中內毒素含量與模型組比較，差異無統計學意義（P>0.05）。魚腥草破壁飲片高劑量組與魚腥草傳統飲片組比較，在降低家兔血清中炎性因子IL-6的含量方面上，差異有統計學意義（P<0.05）。模型組血清中細胞因子IL-1β含量高于對照組。魚腥草破壁飲片，魚腥草傳統飲片組及非那根組可不同程度降低血清中細胞因子IL-1β含量，但差異均無統計學意義。魚腥草破壁飲片不同劑量組與魚腥草傳統飲片組比較，差異無統計學意義（P>0.05）;模型組血清中細胞因子TNF-α含量顯著高于對照組，差異有統計學意義（P<0.05）。魚腥草破壁飲片高劑量組及非那根組均可不同程度降低血清中細胞因子TNF-α含量，差異有統計學意義（P<0.05）。魚腥草破壁飲片不同劑量組與魚腥草傳統飲片組比較，差異無統計學意義（P>0.05）。見表3。

3?討論

魚腥草為三白草科蕺菜屬植物，始載于《名醫別錄》，性味辛、微寒，歸肺經。中醫功效主要有清熱解毒、消癰排膿、利尿通淋等。主治肺癰吐膿、痰熱喘咳、熱淋、熱痢、癰腫、瘡毒、咽喉腫痛等癥，是“治療肺癰之要藥”。目前對魚腥草的研究認為，其含有揮發油、黃酮類、有機酸、生物堿及維生素等活性成分，主要發揮作用的成分是揮發油和黃酮類化合物。魚腥草現代的藥理作用包含解熱、抗炎、抗病毒、抗菌以及調節免疫系統功能[4]。除了以上主要功能外，魚腥草還具有抗過敏、鎮咳、抗抑郁、降糖等藥效，被譽為“中藥廣譜抗生素”[5-6]。

本研究目的是探討魚腥草破壁飲片的抗內毒素作用，并且與魚腥草傳統飲片的效果進行比較。

內毒素是重要的外源性致熱源，通過刺激體內的單核巨噬細胞產生并釋放內生致熱原引起發熱反應[7]。炎性反應細胞因子是主要的內生致熱源，包括IL-6、IL-1、干擾素、TNF、巨噬細胞炎性反應蛋白-1等[8]。這些炎性反應細胞因子作為發熱信號可直接或者間接作用體溫調節中樞，導致下丘腦的發熱遞質cAMP含量增高使體溫調節點上移，產熱增加，散熱減少[9]。下丘腦是主要的體溫調節中樞，非那根可抑制下丘腦體溫調節中樞，解除機體保溫作用，從而具有降低體溫的作用，故在家兔致熱實驗中用作陽性藥[10-11]。

IL-1是重要的致熱性細胞因子，由于基因編碼的不同分為IL-1α和IL-1β，而IL-1β具有明顯的致熱性[12]。TNF由TNF-α和TNF-β 2種蛋白質形式存在，作為發熱調節因子主要是TNF-β[13-14]。在內毒素引起的家兔發熱模型中，血漿和腦脊液中IL-6、TNF-β、IL-1β的含量顯著增高[15]。本研究結果顯示，魚腥草破壁飲片高劑量組可顯著降低血中白細胞、內毒素、血清中炎性因子IL-6及TNF-α的含量，效果優于魚腥草傳統飲片。

綜上所述，從內毒素致家兔發熱實驗中，通過動物在體層面，發現魚腥草破壁飲片具有良好的抗內毒素作用，且在一定程度上優于魚腥草傳統飲片。

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（2018-08-07收稿?責任編輯：王明）