二代測序技術在Lynch綜合征中的應用新進展

李康平 張書喬

【摘 要】Lynch綜合征是一類表現為DNA錯配修復基因突變的遺傳性非息肉病性結直腸癌，DNA錯配修復基因突變是Lynch綜合征遺傳學的基礎。本文通過回顧近年來相關文獻，對二代測序技術應用在結直腸癌特別是Lynch綜合征中的基因診斷展開綜述。

【關鍵詞】Lynch綜合征;MMR基因;二代測序技術

【中圖分類號】R969.4【文獻標識碼】A【文章編號】1672-3783（2020）08-24--02

Lynch綜合征（Lynchsyndrome，LS）與DNA錯配修復基因（Mismatchrepair，MMR）突變密切相關。近幾年隨著MMR和微衛星不穩定檢測的出現，使LS患者診斷有了較為準確的方法。但僅依靠上述檢測與臨床診斷標準很難完全囊括全部LS患者。確診的患者中有一部分無MMR基因突變。二代測序技術（next-generationsequencing，NGS）的出現，使得LS等遺傳異質性疾病的診斷更加容易。NGS不僅增加了測序量，且提高了突變檢出的靈敏度。在癌癥與遺傳病性相關疾病的早期篩查及確診領域都發揮了重要的作用，是如今臨床診療領域最有應用前景的技術之一。隨著NGS技術的不斷發展完善，一定會改變人類對于腫瘤發生與轉變進程的了解，也注定成為未來腫瘤診療跟預后的基礎。

一 MMR基因突變

有學者[1]對數位LS患者樣本進行測序后發現的大約400種MMR基因突變，50%是MSH2基因突變。MSH2基因中有一種定位于第7號外顯子的異常胚系突變，它能使該基因下游提前停止編碼。另外，對疑似有MSH2基因突變的LS患者在運用體外擴增特異DNA片斷率搜尋MSH2基因中潛在的重組突變庫，由此檢測該基因的轉位點，具有重要意義[2]。蔣帆[3]等人通過對Insight數據庫分析后得出進行臨床檢測和診斷時，需著重檢測MSH6、PMS2、MLH3這三個基因位點和外顯子，例如MSH6的5號外顯子和MLH3中的突變位點c.691A>C，c.2896T>C和c.2825C>T。因為這三個基因各自均有高頻的突變位點與外顯子。對于很多攜帶MSH6基因的LS患者都曾患過不止一次LS相關腫瘤，平均發病年齡較普通的LS患者來說也要滯后。

二 其他相關基因突變

有研究顯示BRAFV600E基因突變與散發性微衛星不穩定的結直腸癌相關，珠珠[4]利用NGS技術在107例LS患者中檢測到了3例MLH1基因表達缺失的患者存在BRAFV600E突變。Tan等人[5]在174例LS患者樣本中進行NGS發現共發現了4個新發突變位點。有6例具有強癌癥風險的個體在不存在MMR基因突變的情況下具有復發的新型KIT：c.2836C>T無義突變和ERCC4：c.2169C>a無義突變，這很可能具有臨床意義。AXIN2基因能夠控制β-連環蛋白表達。而85%的散發和遺傳性結直腸癌是由APC基因和β-連環蛋白基因突變引起的Wnt通路異常激活導致的，且在LS樣本中發現Wnt通路的β-連環蛋白、E-cad、TCF-4、PTEN的表達異常[6]。研究人員證實了結直腸癌中AXIN2基因表達顯著升高。而Rohlin等人[7]利用NGS找到了AXIN2基因突變與結直腸癌發生相關證據。報告的105例結直腸癌患者中發現了11個移碼突變。綜上AXIN2基因突變與結直腸癌發生相關。

三 小結：

如今隨著NGS技術的逐漸普及，測序所花時間及成本也相較以前大幅降低。該技術漸漸展現了其在基因診斷層面確診LS的優勢，但受限于測序與分析數據本身所花費的時間還比較長，基因樣本庫也不夠完善，想要完全取代MMR基因檢測還有一段路要走，盡管有種種限制NGS技術依然揭示了Lynch綜合征潛在致病基因的一系列新突變位點，為研究人員呈現了一連串候選易感基因及位點，在完善了其基因數據庫信息的同時，也為今后研發定制具有針對性的高通量LS診斷檢測基因芯片提供了理論依據。依托于NGS技術的種種優點，臨床上運用NGS檢測LS相關腫瘤致病基因及突變位點的新時代已到來。

參考文獻

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Rhees J， Arnold M， Boland CR. Inversion of exons 1-7 of the MSH2 gene is a frequent cause of unexplained Lynch syndrome in one local population [J]. Fam Cancer 2014， 13（2）：219-225.

蔣帆. 中國人遺傳性非息肉性結直腸癌（HNPCC）大片段異常檢測與基因數據分析 [碩士]： 復旦大學; 2014.

珠珠. 云南省Lynch綜合征候選基因標志物研究 [博士]： 昆明醫科大學; 2014.

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Rohlin A， Rambech E， Kvist A， et al. Expanding the genotype-phenotype spectrum in hereditary colorectal cancer by gene panel testing [J]. Fam Cancer 2017， 16（2）：195-203.