羅氏Modular P800 全自動生化分析儀使用低密度脂蛋白膽固醇試劑對載脂蛋白A1 檢測比色杯攜帶污染的干擾效應

劉冬冬，張嘉琪，宋瑩，胡劍，尚陳宇，石文，林莉，林海標，黃譯樂，徐建華（通信作者）

1 廣州中醫藥大學第二附屬醫院·廣東省中醫院檢驗醫學部 （廣東廣州 510120）；2 廣州中醫藥大學順德醫院 （廣東佛山 528333）

載脂蛋白A1（apoprotein A1，ApoA1）在肝及腸黏膜中合成，主要存在于高密度脂蛋白（high-density lipoprotein，HDL）中[1]。有研究表明，ApoA1與心腦血管疾病的發病及患者死亡相關[2]，因此，ApoA1的有效檢測對疾病診斷及預后具有重要的意義。干擾物常存在于日常檢驗工作中，可導致檢驗報告不可靠。近年來，生化檢測試劑品種日益增多，全自動生化分析儀在同一個檢測項目的檢測中，使用不同廠家的試劑可能會導致檢測結果不同[3]。羅氏公司試劑說明書指出，在Modular P800模塊上，使用羅氏第二代低密度脂蛋白膽固醇（lowdensity lipoprotein chesterol，LDL-C）試劑會對羅氏ApoA1檢測存在比色杯攜帶污染干擾，建議在“Special Wash”程序中設置針對羅氏LDL-C試劑檢測該項目后進行酸性清洗液沖洗的步驟，以消除LDL-C試劑對ApoA1檢測的攜帶污染干擾。本研究參照美國臨床實驗室標準化委員會（Clinical Laboratory and Stardards Institute，CLSI）的EP7-A2文件及儀器說明書，探討羅氏Modular P800生化分析儀使用LDL-C試劑對ApoA1檢測比色杯攜帶污染的干擾效應，并尋求有效的解決方案，供同行參考。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

羅氏Modular P800全自動生化分析儀；羅氏LDL-C試劑（批號：674 550-01）；積水LDL-C試劑（批號：805RJJ）；羅氏ApoA1（批號：683890-01）。

1.2 標本

1.3 方法

1.3.1 儀器校準

按照說明書和實驗室標準操作程序（Standard Operation Procedure，SOP）文件對儀器進行校準，使儀器處于正常工作狀態[4]。

1.3.2 羅氏Modular P800比色杯的使用規律分析

通過實驗探討羅氏Modular P800 160個比色杯的使用規律，設計方案使施污染項目（LDL-C）與受污染項目（ApoA1）共用同一個比色杯，且保證每圈檢測將160個比色杯全部用完。

1.3.3 比色杯攜帶污染的驗證分析

本實驗以LDL-C（施污染項目）與ApoA1（受污染項目）為研究對象，分別檢測LDL-C（高、低濃度）、ApoA1（高、中、低濃度）各10次，取平均值作為對照值。第1圈為實施污染：6、12、18……156、2、8、14、20號比色杯（間隔6個）檢測LDL-C 低濃度樣本，26、32、38……158、4、10、16……40號比色杯檢測LDL-C 高濃度樣本，剩余比色杯測試用水樣本填充；第2圈檢測受污染項目。將所得結果分別與對照值比較，攜帶污染率=（檢測均值-對照值）/對照值×100%。比色杯攜帶污染率絕對值大于該項目室內質控變異系數（coefficient of variation，CV），被認為攜帶污染不可接受；本實驗定義相差±5%以上為存在攜帶污染[5]。

1.3.4 比色杯攜帶污染的解決方案分析

根據試劑成分特征和廠家推薦，選擇去離子水、酸性洗液對確認污染的項目進行特殊清洗。第1圈為實施污染，6、12、18……120號樣本檢測施污染項目，剩余以水樣本填充；第2圈為特殊清洗，所有樣本均為血清，166、172、178……220號為水清洗組，用水進行清洗，226、232、238……280號為酸清洗組，用酸性洗液進行清洗，剩余以水樣本填充；第3圈檢測受污染項目，321～350號樣本檢測受污染項目，其中321～330號為水清洗組，331～340號為酸清洗組，341～350號為對照組。將水清洗組、酸清洗組分別與對照組比較，攜帶污染率=（清洗組均值-對照組均值）/對照組均值×100%，相差±5%以上為清洗無效。

2 結果

2.1 羅氏Modular P800比色杯的使用規律

羅氏Modular P800有160個比色杯，實驗發現其使用規律，無樣本稀釋的項目隨著樣本號的遞增，比色杯的間隔是41個；有樣本稀釋的項目，連續測試時比色杯的間隔為86個，見表1。

數據通過SPSS 21.0統計學軟件作統計學處理，其中并發癥發生率、子宮肌瘤殘留率、復發率、成功妊娠率等計數資料[n（%）]通過χ2檢驗，而空腹血糖水平等計量資料（±s）以t檢驗。P＜0.05為差異有統計學意義。

表1 羅氏Modular P800比色杯的使用規律（前10個樣本號和比色杯號）

2.2 LDL-C 試劑對羅氏ApoA1檢測比色杯攜帶污染的干擾效應驗證

2.2.1 羅氏LDL-C 試劑對羅氏ApoA1檢測比色杯攜帶污染的干擾效應驗證

羅氏LDL-C 試劑在Modular P800上測試其對羅氏ApoA1檢測比色杯的攜帶污染干擾情況，以±5%為可接受范圍，結果顯示，均存在干擾，見表2。

表2 羅氏LDL-C 試劑在Modular P800上對羅氏ApoA1檢測的干擾情況

2.2.2 積水LDL-C 試劑對羅氏ApoA1檢測比色杯攜帶污染的干擾效應驗證

積水LDL-C 試劑在Modular P800上測試其對羅氏ApoA1檢測比色杯的攜帶污染干擾情況，以±5%為可接受范圍，結果顯示，均不存在干擾，見表3。

表3 積水LDL-C 試劑在Modular P800上對羅氏ApoA1檢測的干擾情況

2.3 羅氏LDL-C 試劑對羅氏ApoA1檢測比色杯攜帶污染干擾不同清洗方案的效果分析

比色杯攜帶污染干擾效應驗證結果顯示，在羅氏Modular P800全自動生化分析儀上存在羅氏LDL-C 試劑對羅氏ApoA1檢測比色杯攜帶污染，為消除此干擾，實驗室采用酸性洗液和去離子水進行清洗，發現清洗后干擾均消除，見表4。

表4 羅氏LDL-C 試劑對羅氏ApoA1檢測比色杯攜帶污染干擾不同清洗方案的效果分析

3 討論

全自動生化分析儀是臨床實驗室必備的檢驗儀器，是生化檢測系統的重要組成部分，精密度、準確性和效率特性均高。但是，儀器使用過程中會出現攜帶污染現象，其中，比色杯的攜帶污染是臨床生化項目檢測不正確度的來源之一[6]。攜帶污染將影響檢測結果的準確性和重復性，導致結果失真，誤導臨床診斷和治療，因此，在使用全自動生化分析儀檢測標本時，應對可能發生攜帶污染的項目采取相應的清洗措施，以科學的處理方法和解決措施，有效降低攜帶污染的影響程度，確保檢測結果的準確、可靠[7]。

比色杯污染實驗的難點在于比色杯定位，羅氏Modular P800有160個比色杯。本研究發現，未進行樣本稀釋的項目隨著樣本號的遞增，比色杯的間隔是41個，觀察到一圈160個比色杯全部用完后，第161個測試開始和第1個測試的比色杯號相同，該現象可以通過測試項目的反應曲線得到驗證，由于要保證1～160的測試連續進行，才能進行驗證，所以實驗安排上應確保連續測試160個才可進行第2圈比色杯重新排序測試；進行樣本稀釋的項目，用0.9%氯化鈉注射液作預稀釋，連續測試時比色杯的間隔為86個，主要原因為稀釋過程需要增加5個加樣機械動作，設計實驗方案需考慮第2圈受污染項目進行了樣本稀釋動作，所用比色杯號和第1圈施污染項目測試所用比色杯號要一一對應才能達到評價干擾的目的。

攜帶污染的常見類型：試劑中含有下一測定的待測成分；殘留物作為下一測試的中間產物；殘留物影響下一測試的吸光度；殘留物與下一測試標本發生其他反應產生與下一測試類似的產物；原因不明等[8]。隨著使用時間的延長，全自動生化分析儀比色杯內表面黏附作用增強，沖洗能力下降，攜帶污染相應地增加。比色杯攜帶污染不僅與儀器清洗效率有關，還與所測項目的檢測方法及試劑成分有關。本實驗中，羅氏LDL-C 試劑高、低濃度對羅氏ApoA1高、中、低濃度的6組數據顯示，均存在嚴重的比色杯攜帶污染，且LDL-C 高濃度影響較大，由清洗效果可以看出，經過特殊清洗（去離子水、酸性洗液）后，可以排除攜帶污染的影響，且水清洗與酸清洗效果基本一致；而積水LDL-C 試劑對羅氏ApoA1檢測不存在比色杯攜帶污染。因此，在羅氏Modular P800全自動生化分析中，當羅氏LDL-C 和羅氏ApoA1項目組合時，臨床實驗室可采用水清洗方法解決比色杯攜帶污染問題，節約特殊清洗通道及清洗成本。本實驗結果顯示，干擾效應與特定試劑、儀器等因素相關，本實驗的比色杯攜帶污染干擾效應評價方案可為臨床提供參考。

本研究僅針對羅氏公司和積水公司特定試劑進行分析，其他品牌試劑尚不可輕易判定干擾效應是否有意義，因此，實驗室應根據干擾評價實驗數據、檢測成本，綜合考慮并選擇合理的清洗液。