呼吸道病原體抗體檢測在成人感染中的臨床應用

司 序,楊裕穎,陳 雷

(長春市中心醫院 放免中心,吉林 長春130051)

在日常生活中，呼吸道感染屬于常發疾病之一，主要臨床癥狀為發熱，如沒有得到及時治療，會導致患者的神經系統等受到損害[1]。這種疾病的病原學較為復雜，同時具備季節性流感等特征。隨著醫療水平不斷提高，呼吸道病原體IgM抗體檢測在患者的呼吸道感染中具有較大的占比，使用范圍也不斷的擴大，診斷過程中主要是依靠間接免疫熒光法，對較為常見的呼吸道非細菌病原體，例如：肺炎支原體(MP)、副流感病毒(PIV)、流感病毒A型(INFA)等進行檢測，可以及早診斷，盡早治療[2]。為更好的探討呼吸道病原體IgM抗體檢測在成年呼吸道感染中的應用，選取2018年2月-2019年3月因呼吸道感染來我院就診的住院患者，共計1722例，進行有效的分析，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2018年2月-2019年3月因呼吸道感染來我院就診的住院患者，共計1722例，納入標準：①所有患者具有較為明顯的呼吸道感染；②主要癥狀為：扁桃體腫大、肺部濕啰音、咽部充血、發熱、喘息、咳嗽等；③所有患者均知曉本次研究，簽署知情同意書表示自愿參與。排除標準：①具有口服抗菌藥物史；②接受過外院的治療；③患有白血病、腫瘤疾病、自身免疫性疾病等。其中男856例，女866例，其中≥50歲的患者人群占總人數的75.8%，其余均為成年人。此次研究經過醫院倫理委員會批準。

1.2 方法

所有患者均在空腹狀態下抽取靜脈血2.0 ml，在采集血清樣本后的8 h之內進行檢測，如果超出時間需要保存在2-8℃的環境中，如果7 d之內不檢測，需要在-20℃的環境中冷凍，檢測選擇間接免疫熒光法[3]。

試劑：選擇歐蒙醫學實驗診斷股份公司提供的產品。將抗原放置到載玻片中，具體包括呼吸道合胞病毒(RSV)、流感病毒B型(INFB)、嗜肺軍團菌(LP)、肺炎衣原體(CP)、肺炎支原體(MP)、流感病毒A型(INFA)、副流感病毒(PIV)、腺病毒(ADV)。等待檢測樣本中的IgM抗體和載玻片上的抗原之間出現特異性反應，之后再和熒光素標記的抗人球蛋白反應形成抗體、抗原、抗人IgM-FITC復合物，之后再從熒光顯微鏡中觀察最終的結果。使用的其他試劑還包含：PBS溶液、吸附劑、抗人IgM磷酸緩沖液等[4]。

儀器：臺式高速冷凍離心機，選擇的是上海盧湘儀離心機儀器有限公司，型號為TGL-16；低速離心機，同樣選擇上海盧湘儀離心機儀器有限公司，型號為TD5；水平搖床，選擇的是上海天呈實驗儀器制造有限公司，型號為TS-200B；恒溫水浴箱選擇的是天津市恒奧科技發展有限公司，型號為HWT-6B；熒光顯微鏡選擇的是OLYMPUS BX51熒光顯微鏡。

方式：使用磷酸鹽緩沖液和25 μl的血清進行稀釋，之后和150 μl和30 μl的吸附劑進行混合，10 min離心，速度為13 000 r/min，避免在檢測過程中被其他原因所干擾，去除沉淀。將處理后的血清放置到載玻片中15 μl/孔。沒有進行過稀釋的15 μl陽性對照放到每一個孔中，同時將沒有稀釋的15 μl陰性對照放到另外一個孔中。將所有載玻片放到37℃的濕盒中進行培育，時間為1.5 h。使用磷酸鹽緩沖液清洗載玻片，之后再沉淀到磷酸鹽緩沖液中，使用水平搖床晃動10 min。載玻片在蒸餾水中進行清洗，晾干。每一個孔中需要加入15 μl IgMFITC結合物溶液(這個過程不需要稀釋)，之后放到37℃的濕盒中進行溫育，時間為0.5 h。重復前面的洗滌晾干步驟，將封閉介質放入蓋上蓋玻片。在熒光顯微鏡400倍放大中觀察結果[5]。

1.3 觀察指標

(1)分析病原體感染陽性占比。陽性判斷為：特異性蘋果綠色熒光；陰性的判斷為：沒有見到細胞呈現紅色或者沒有見到特異性熒光。IgM抗體陽性提示急性感染。

(2)分析不同季節中呼吸道病原體檢出情況。3-5月為春季，6-8月為夏季，9-11月為秋季，12-2月為冬季。

1.4 統計學方法

數據應用SPSS18.0進行分析，其中計數資料進行χ2檢驗，P<0.05提示有顯著差異。

2 結果

2.1 病原體感染陽性占比分析

在所有住院的患者中，檢測8項呼吸道病原體為陽性的為822例患者，占據所有受檢人群的47.7%。其中發生單項感染的患者有409例，占所有感染患者的49.8%；三重感染的患者有137例，占所有感染患者的16.7%；雙重感染的患者有264例，占所有感染者的32.1%；四重感染的患者有12例，占所有感染患者的1.4%，見表1。

表1 主要病原體感染陽性占比比較

2.2 不同季節中呼吸道病原體檢出情況分析

秋、冬兩季呼吸道病原體檢出率較高，夏季、春季檢出率較低，肺炎支原體(MP)在秋冬兩季的檢出率為(25.8%、12.1%)，見表2。

表2 不同季節中呼吸道病原體檢出情況分析(例，%)

3 討論

臨床中，患者發生呼吸道感染，主要是支原體、病毒、細菌等引起的，特點為：發病急、傳播快、感染力強等[6]。陽性率以及感染病原體的種類和年齡、季節、地區等有一定的關系，所以檢測的方式也會不同[7]。呼吸道發生感染后患者會出現氣喘、咳嗽、發熱、咳痰、咽痛癥狀，因為沒有特異性的表現，所以診斷比較困難，并不能及時給出準確治療方案，給臨床治療帶來一定困難，使很多人不得不應用廣譜抗生素治療[8]。早期對呼吸道感染患者給出明確的病原學診斷，不僅可以及時的給出準確的治療方法，增強效果，改善預后，幫助患者快速恢復，還可以減輕痛苦以及家庭經濟負擔等[9]。

呼吸道感染的病原體不會有特異性癥狀，所以需要采用相應的檢測方法對患者的疾病進行相關的診斷，目前為止，臨床中使用較多的檢測方法為：免疫熒光抗體法、血清學、病原體的分離培養法、核酸擴增、直接檢測法、組織細胞培養法等，可以有效的診斷出患者的病情[10]。近年，隨著免疫標記技術以及醫療技術的不斷進步，間接或者直接免疫熒光學技術在醫學領域的應用處于不斷擴大階段，這是因為，這種技術具有低成本、方便、快速等優勢[11]。在本次研究過程中，就是借助間接免疫熒光法對8項呼吸道病原體的IgM抗體篩查，只需要患者的一份血清樣品就可以檢測，避免多次采集樣本的麻煩，并且檢測的設備只需要使用熒光顯微鏡，最終的結果容易判斷，所以這項技術更加簡便、直觀、經濟、高效，加上對相關數據較為敏感，所以不僅在實驗室還是臨床中，所存在的價值都較高[12]。

病原學檢查主要是培養，所檢測的陽性率會受到樣本的接種、運動、采集是否及時因素的影響[13]。分子生物學技術雖然特異性較強，但是在檢驗通量中并不能滿足不斷增加的標本數量，便捷和快速的檢測方法受到更多人的關注，有學者認為LuminexxMAP多重分析技術平臺、多重PCR可以有效的建立快速篩查呼吸道感染，經過對肺炎患者的咽拭子或者支氣管肺泡灌洗液標本進行檢驗，可以快速的對感染病原體以及其亞型進行鑒定，分析流行病原學中有一定的意義[14]。

不同地區的呼吸道感染特征被多種因素所決定，在近段時間中認為，空氣污染程度和患者發生呼吸道感染有密切的聯系，研究表明，汽車的尾氣會產生微顆粒，人類吸入后會影響呼吸道中的Th2過敏型免疫反應不斷增高，降低Th1的保護性免疫功能，導致呼吸道感染升高[15]。因為呼吸道感染可能是使用其他的抗菌藥物導致的，所以有研究顯示，21%的呼吸道感染患者是由于其他疾病導致的一種并發癥，例如：皮疹、腹瀉等，所以會被濫用抗菌藥物，早期的患者使用抗菌藥物會形成過敏性哮喘[16]。使用合理檢測手段，可以有效避免濫用抗菌藥物，在國外的研究中，會制作容易理解的呼吸道感染制作手冊，方便患者和家屬了解更多疾病的知識，同時促進家屬和患者和醫生溝通中得到更多有效、準確的信息，減少抗菌藥物的使用[17]。

從病原部位分離出病原體或者從病原部位取樣培養出病原體在臨床中被認為是一種標準，但是在培養過程中會占用較多的時間，并且常規的培養方法不能更好的培養出非經典細菌類病原體[18]。病毒等非典型細菌類病原體對于常見的抗生素并不靈敏，所以導致治療方案受到影響。早期使用快速的檢驗方法，盡早明確病原體在臨床中屬于最為重要的目的[19]。身體受到病原體刺激后會出現體液免疫應答，產生 IgM抗體，所以使用間接免疫熒光法可以更好的檢測出病原體IgM抗體，同時還可以作為臨床中早期的診治依據[20]。8項呼吸道病原體的IgM抗體篩查的試劑是將病原體作為抗原包，更好的檢測出血清中的IgM抗體，使用吸附劑對血清處理，可以有效的避免IgG抗體非特異結合對研究造成影響，提高這種方法的有效性。本次研究顯示：在所有住院的患者中，檢測8項呼吸道病原體為陽性的為822例患者，占所有受檢人群的47.7%。其中發生單項感染的患者有409例，占所有感染患者的49.8%；三重感染的患者有137例，占所有感染患者的16.7%；雙重感染的患者有264例，占所有感染者的32.1%；四重感染的患者有12例，占所有感染患者的1.4%，可以證明此點。

秋、冬兩季呼吸道病原體檢出率較高，夏季、春季檢出率較低，肺炎支原體(MP)在秋冬兩季的檢出率為(25.8%、12.1%)，我們可以得出結論，在秋冬兩季導致呼吸道感染的概率會明顯增加，所以在日常生活中要高度關注秋冬季中身體反應，及時診斷和治療。

綜上所述，在實施8項呼吸道病原體抗體檢測對成人感染的診斷過程中，結果較為顯著，在臨床中具有較大的意義，應當進一步推廣應用。