CXCR4表達與三陰性乳腺癌的相關性研究

唐超莉

[摘要]目的 探討趨化因子受體4（CXCR4）在三陰性乳腺癌中的表達及與復發轉移預后的關系。方法 收集我院2015年5月～2018年1月的160例三陰性乳腺癌患者的組織，利用免疫組化法對CXCR4的表達進行分析，對其臨床病理特征及CXCR4與無疾病進展時間、總生存時間的關系進行分析。結果 三陰性乳腺癌患者的年齡、腋窩淋巴結、CXCR4組間無病生存期（DFS）比較，差異有統計學意義（P<0.001）。年齡≤45歲、腋窩淋巴結陽性、CXCR4陽性有較短的DFS。CXCR4陽性較CXCR4陰性有更短的總生存期（OS）。結論 CXCR4過表達不僅是腫瘤侵襲性的標志，也可能是三陰性乳腺癌患者預后不良的標志。

[關鍵詞]三陰性乳腺癌;趨化因子受體4;無疾病進展期;總生存期

[中圖分類號] R737.9? ? ? ? ? [文獻標識碼] A? ? ? ? ? [文章編號] 1674-4721（2020）7（a）-0118-04

Correlation study between CXCR4 expression and triple negative breast cancer

TANG Chao-li

Department of Oncology， Chongzuo People′s Hospital， Guangxi Zhuang Autonomous Region， Chongzuo? ?532200， China

[Abstract] Objective To investigate the expression of the chemokine receptor 4 （CXCR4） in triple negative breast cancer and its relationship with the prognosis of recurrence and metastasis. Methods A total of 160 cases of triple negative breast cancer from May 2015 to January 2018 in our hospital were collected， immunohistochemistry was used to analyze the expression of CXCR4. The clinicopathological features and the relationship between CXCR4， time of disease progression and total survival were analyzed. Results There were significant differences in the age， axillary lymph nodes and disease-free survival （DFS） of CXCR4 group （P<0.001）. There were shorter DFS with age ≤ 45 years old， axillary lymph node positive and CXCR4 positive. The overall survival （OS） of CXCR4 positive patients was shorter than that of CXCR4 negative patients. Conclusion CXCR4 overexpression is not only a marker of tumor invasiveness， but also a marker of poor prognosis in triple negative breast cancer patients.

[Key words] Triple negative breast cancer; Chemokine receptor 4; Disease free survival; Overall survival

三陰性乳腺癌是指缺乏雌激素受體（ER）、孕激素受體（PR）和人類表皮生長因子受體2（HER2）的表達，占乳腺癌總數的15%～20%[1]。三陰性乳腺癌即使早期治療復發的可能性也較高，尤其是遠處轉移，這種表型的轉移進展通常以早期復發和肝、肺和中樞神經系統轉移為主[2]。因此，找尋三陰性乳腺癌復發轉移的靶點尤為重要。趨化因子受體4（chemokine receptor 4，CXCR4）是一種進化高度保守的G蛋白偶聯受體，表達于外周血單核細胞、B細胞和幼稚T細胞。其配體CXCL12是一種穩態趨化因子，能夠控制造血細胞的運輸、黏附、免疫監視和發育[3]。CXCR4在三陰性乳腺癌中的表達鮮少報道。本研究對三陰性乳腺癌組中的CXCR4基因表達水平進行分析，旨在探討CXCR4表達與患者臨床病理特征、疾病復發轉移及預后的關系。

1資料與方法

1.1一般資料

收集我院2015年5月～2018年1月收治的160例三陰性乳腺癌患者，年齡21～75歲，中位年齡51.6歲。160例三陰性乳腺癌病例為治療過程中或治療完成后發生首次復發轉移的三陰乳腺癌患者，復發轉移的部位包括胸壁（52例）、腦（36例）、肺（89例）、肝（103例）、骨轉移（78例）、其他轉移（41例），其他單個部位轉移62例，多個部位轉移98例。納入標準：①曾行乳腺癌改良根治術，術后免疫組化證實為三陰性乳腺癌，術后病理證實為乳腺浸潤性導管癌、髓樣癌、其他類型癌;②術后經病理活檢或臨床證實出現胸壁復發或其他器官的遠處轉移;③根治性手術前未行任何抗腫瘤治療;④女性，漢族，年齡21～75歲;⑤臨床病理資料完整。排除標準：①合并其他部位惡性腫瘤或重要臟器嚴重疾病者;②乳腺癌根治術前已出現遠處轉移者;③年齡>75歲，不能耐受放療、化療者;④臨床資料不完整者。本研究經崇左市人民醫院醫學倫理委員會批準，患者或其家屬知情。所有病例均行乳腺癌改良根治術，其手術切除標本常規石蠟包埋、固定后行HE染色，經2名病理科醫生按世界衛生組織（WHO）《乳腺病理組織學分類》（2003新版）標準讀片確認其病理類型。

1.2免疫組化及結果判定

對每位患者的石蠟包埋塊進行相應處理，進行IHC染色及免疫組化染色。計數4個不同高倍視野下200個癌細胞，計算陽性細胞百分數。陽性細胞百分數為0%～49%計為陰性，陽性細胞百分數>50%計為強陽性（+）。腫瘤細胞核著色<1%，則ER、PR定義為陰性。HER-2免疫組化的判讀標準：無著色或≤10%的浸潤癌細胞呈現不完整的、微弱的細胞膜染色為陰性（0）;>10%的浸潤癌細胞呈現不完整的、微弱的細胞膜染色為陰性（1+）;>10%的浸潤癌細胞呈現不完整的和（或）弱～中等強度的細胞膜染色，或≤10%的浸潤癌細胞呈現強而完整的細胞膜染色為不確定（2+）;>10%的浸潤癌細胞呈現強、完整、均勻的細胞膜染色為陽性（3+）。對于免疫組化不確定的病例（陽性2+）需進行熒光原位雜交（FISH）進一步檢測。

1.3觀察指標與療效判定

采集所有患者的人口統計學、病理特征及臨床癥狀等相關信息。此外，所有患者的腫瘤分期根據第7版美國癌癥聯合委員會發布的癌癥分期手冊（AJCC 7.0）進行評估。隨訪截止日期為2019年6月31日，中位隨訪時間為16.8個月?？偵嫫冢╫verall survival，OS）和無病生存期（disease free survival，DFS）的時間分別是從手術日期至由任何原因引起的死亡之間的時間以及手術時間開始到出現腫瘤復發或由任何原因引起死亡之間的時間。

1.4統計學方法

采用SPSS 22.0統計軟件進行數據分析，不符合正態分布的計量資料采用中位數表示，計數資料采用頻數表示，組間比較采用χ2檢驗，采用Kaplan-Meier計算患者的生存時間，采用Logrank法進行組間比較，采用多因素Cox回歸分析對疾病無病生存期的獨立影響因素進行分析，以P<0.05為差異有統計學意義。

2結果

2.1三陰性乳腺癌患者臨床病理特征及CXCR4與DFS的關系

對160例三陰性乳腺癌患者進行長期隨訪，患者無疾病進展時間為4.0～13.0個月，中位時間為9.7個月。對三陰性乳腺癌的臨床病理特征進行分析，經過Logrank檢驗分析，組間比較結果顯示，患者絕經狀態、病理分類、腫瘤大小、輔助治療方式與無疾病進展時間無關（P>0.05）。年齡、腋窩淋巴結狀態、CXCR4表達的組間無病生存期比較，差異有統計學意義（P<0.001）（表1）。多因素回歸分析結果顯示，年齡、腋窩淋巴結狀態、CXCR4表達均為影響無進展生存期的獨立影響因素，其中，腋窩淋巴結陽性、CXCR4陽性均為獨立危險因素（表2）。

2.2 CXCR4表達與三陰乳腺癌患者預后的關系

三陰乳腺癌患者的總生存時間為9.1～20.1個月，中位總生存時間為15.6個月。隨訪分析結果顯示，三陰乳腺癌CXCR4陽性組中位總生存時間為14.90個月，顯著短于CXCR4陰性組的17.80個月，差異有統計學意義（P<0.001）。

3討論

乳腺癌主要分為三種治療亞型，分別為雌激素和/或黃體酮受體陽性（ER+，PR+）、HER2+、三陰性乳腺癌。三陰性乳腺癌是世界上最復雜、最具侵襲性的乳腺癌[4-7]，遠處轉移的風險性高，預后較差，死亡風險較高。轉移性三陰性乳腺癌越來越引起人們的注意。由于乳腺癌細胞缺乏激素受體，因此化療成為唯一的治療方案。除了預后差和存活率低外，其轉移和復發的高傾向促使找尋有效的靶點。CXCR4是一個高度保守的七跨膜G蛋白偶聯受體，與配體基質細胞衍生因子1（SDF-1，也稱為CXCL12）相結合能夠形成反映軸CXCL12-CXCR4，而針對CXCL12-CXCR4軸的靶向治療可能對治療癌癥有效，目前抗CXCL12適配體、CXCR4拮抗劑和抗CXCR4單克隆抗體已被開發出來[8]。CXCL12信號通過CXCR4和CXCR7受體在癌細胞中上調，并激活多種分子通路，如絲裂原活化蛋白激酶（MAPK）、肌醇1，4，5-三磷酸腺苷（IP3）和磷酸肌醇肽3-激酶（PI3K）[9]。與CXCR4結合的CXCL12能夠啟動各種信號通路，導致細胞內鈣、基因轉錄、趨化、細胞存活和增殖的增加，其與腫瘤細胞向區域和遠處轉移的能力有關[10]。CXCL12-CXCL4異源二聚阻止了CXCL12驅動的乳腺癌細胞遷移[11]。相關研究顯示，浸潤性乳腺癌樣本中CXCR4-CXCL12趨化軸與正常鄰近組織相比升高。在晚期轉移的腫瘤樣本中，CXCR4-CXCL12軸的表達水平與轉移相關基因（E-cadherin和MMP2）之間也存在顯著的相關性[12]。對人乳腺腫瘤的分析顯示，在不同的分子亞型中，三陰性乳腺癌細胞中CXCR4的表達水平最高[13]。Shanmugam等[14]的研究表明胸腺醌（TQ）主要發揮其對趨化因子受體CXCR4表達下調的影響，具有抗乳腺癌轉移的潛力，靶向CXCR4可以提高轉移性乳腺癌的療效。Yang等[15]的研究表明通過CXCR4或CXCR7基因的單次敲除能夠顯著降低三陰性乳腺癌細胞增殖、生長、遷移和侵襲，延緩G1/S周期的轉化，而共敲除對這些生物學能力的抑制作用更顯著。Guembarovski等[16]的研究提示CXCL12、CXCR4多態性和CXCR4免疫染色可能在三陰性乳腺癌發病機制中具有易感性和預后作用。

本研究結果顯示，CXCR4過表達的三陰性乳腺癌患者獲得較短的OS及DFS，發生復發及遠處轉移的風險明顯更高，預后更差。多因素分析顯示，CXCR4蛋白過表達是三陰性乳腺癌患者DFS差的獨立危險有因素。目前的研究顯示，CXCR4蛋白的過表達增加了三陰性乳腺癌患者發生遠處轉移和生存不良的風險，有可能成為控制三陰性乳腺癌遠處轉移的新靶點。其可能的機制為CXCR4-LASP1-eIF4F軸的激活可能有助于致癌mRNA的優先翻譯，從而導致乳腺癌的進展和轉移[17]，也可能是三陰型乳腺癌細胞通過激活CXCL12/CXCR4/MMP-2信號通路，抑制CXCR4表達，進而抑制乳腺癌細胞的惡性生物學行為如增殖和遷移[18]，進一步的機制需要去探索。本研究的數據與Guembarovski等[16]近期報道的數據一致。對三陰性乳腺癌組織進行免疫組化檢測，結果顯示53.12%的三陰性乳腺癌組織中CXCR4蛋白表達量較高，提示CXCR4可能在具有侵襲表型的乳腺癌細胞中特別高表達。此外，本研究還發現三陰性乳腺癌患者的DFS與患者絕經狀態、病理分類、腫瘤大小、輔助治療方式無關，而在年齡分組、腋窩淋巴結方面CXCR4表達，差異有統計學意義（P<0.001）。

綜上所述，本研究中超過一半的三陰性乳腺癌組織標本中CXCR4表達上調。CXCR4過表達不僅是腫瘤侵襲性的標志，也可能是三陰性乳腺癌患者預后不良的標志。對CXCR4的進一步研究有助于明確三陰性乳腺癌復發及遠處轉移的分子機制，為控制三陰性乳腺癌復發及遠處轉移提供可能的新策略。

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（收稿日期：2020-02-24）