陰道灌洗液中IL-6、IL-17、IFN-γ、TGF-β檢測在宮頸高危型HPV感染患者中的臨床意義

在全世界范圍內(nèi)，宮頸癌是女性常見的惡性腫瘤，且近年來呈年輕化趨勢[1]。現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究已明確，人乳頭瘤病毒（HPV）感染屬于宮頸癌及其癌前病變的主要病因[2]。根據(jù)HPV 病毒的不同致癌風(fēng)險，將其分為低危型HPV 與高危型HPV（HRHPV），臨床最 常見的HR-HPV 亞型為HPV16 及HPV18[3]。正常人體具備完善的自身免疫系統(tǒng)，大多數(shù)女性感染HPV 后經(jīng)機體自身進行病毒清除，為一過性感染，持續(xù)性感染HPV 才可能引發(fā)宮頸病變[4]。宮頸癌進展中的3 個關(guān)鍵環(huán)節(jié)為存在HR-HPV 持續(xù)感染、持續(xù)感染誘導(dǎo)宮頸上皮不典型增生（CIN）、增生突破機體基底膜形成浸潤癌[5]。機體腫瘤免疫主要是細胞免疫，其中以T 細胞的免疫調(diào)節(jié)、免疫監(jiān)視為主。T 細胞亞群包含輔助性T 細胞（Th 細胞）、細胞毒性T 細胞（Tc）和調(diào)節(jié)性T 細胞（Treg），其中Th 細胞中的Th1、Th2 兩類淋巴細胞分泌的細胞因子在機體免疫中發(fā)揮重要作用，分泌IL-6、IL-17、IFN-γ、TGF-β 等一系列細胞因子。有研究表明，Th1、Treg 等T 細胞亞群在機體內(nèi)失衡與宮頸癌的發(fā)生和進展有關(guān)[6]。本研究旨在探討陰道灌洗液中IL-6、IL-17、IFN-γ 及TGF-β 檢測在宮頸高危型HPV 感染患者中的臨床意義，現(xiàn)報道如下。

1 材料與方法

1.1 研究對象選取2018年1月～2019年12月我院收治的84 例宮頸HR-HPV 感染患者為研究組，選擇同期來我院體檢的84 例健康成年人為對照組。兩組年齡、體質(zhì)指數(shù)（BMI）比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），見表1。

納入標準：①有HR-HPV 持續(xù)感染史者；②年齡＞18 歲者；③有性生活史者；④非月經(jīng)期者；⑤患者及家屬充分知情同意并簽署知情同意書。本研究嚴格遵循赫爾辛基宣言。排除標準：①檢查1 周內(nèi)有陰道用藥者；②妊娠期、哺乳期者；③合并原發(fā)性心腦血管、肝腎疾病者；④合并非宮頸腫瘤的其他惡性腫瘤者；⑤合并造血功能異常者；⑥合并血液系統(tǒng)疾病者；⑦存在精神疾病者；⑧近半年內(nèi)使用糖皮質(zhì)激素、免疫調(diào)節(jié)劑者；⑨有盆腔放療史者。

表1 兩組患者臨床資料比較（±s）

表1 兩組患者臨床資料比較（±s）

組別 n年齡（歲） BMI（kg/m2）研究組 84 33.85±4.32 23.57±2.51對照組 84 34.02±4.41 23.46±2.64 t 0.252 0.277 P 0.801 0.782

1.2 研究方法

1.2.1 標本采集 囑患者在取樣前72h 禁止性生活，且在取樣前1 周內(nèi)不使用陰道藥物，并在患者月經(jīng)干凈后第3 天入院取樣?；颊咦孕星逑赐怅帲〗厥唬褂酶Q陰器撐開陰道，暴露宮頸。取宮頸活檢前，使用10ml 生理鹽水沖洗宮頸及陰道上1/3處，生理鹽水在患者宮頸內(nèi)停留10s，經(jīng)后穹隆吸出灌洗液3.0～4.5ml，剔除含有血液的標本，灌洗液取出后室溫離心5min，取上清液于-80℃冷凍保存。使用HPV 專用宮頸刷沿順時針方向刷宮頸5 次，收集患者宮頸口脫落細胞，于-4℃條件下保存。

1.2.2 灌洗液相關(guān)細胞因子測定 取出患者灌洗液解凍，恢復(fù)室溫后，采用酶聯(lián)免疫吸附試驗法檢測IL-6、IL-17、IFN-γ、TGF-β 水平。

1.2.3 HR-HPV 負荷量檢測 取宮頸細胞，使用第二代雜交捕獲法基因雜交信號放大系統(tǒng)進行檢測。

1.2.4 HR-HPV 分型檢測 取患者宮頸細胞，使用美國ABI 公司生產(chǎn)的熒光定量PCR 儀檢測HR-HPV分型。

1.3 觀察指標比較研究組和對照組IL-6、IL-17、IFN-γ、TGF-β 水平。將研究組患者根據(jù)病理組織檢查結(jié)果分為3 個亞組，宮頸癌患者為A 組（n=27），宮頸上皮不典型增生（CIN）Ⅰ級患者為B組（n=29），CINⅡ、Ⅲ級患者為C 組（n=28）；根據(jù)患者HPV 檢測分型分為3 個亞組，即HPV16 組（n=31）、HPV18 組（n=30）、其他組（n=23）。比較不同病理結(jié)果患者HR-HPV 負荷量，分別比較不同病理結(jié)果、不同HPV 分型患者IL-6、IL-17、IFN-γ、TGF-β 水平。使用Spearman 法分析IL-6、IL-17、IFN-γ、TGF-β 水平與宮頸HR-HPV 感染患者HR-HPV 負荷量的相關(guān)性。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法采用SPSS 19.0 統(tǒng)計學(xué)軟件對數(shù)據(jù)進行分析，計數(shù)資料以百分率（%）表示，采用χ2檢驗，計量資料以均數(shù)±標準差（±s）表示，組間比較采用t檢驗，采用Spearman 進行相關(guān)性分析，P＜0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 研究組和對照組陰道灌洗液中細胞因子比較研究組IL-6、IL-17、TGF-β 水平均高于對照組，IFN-γ 水平低于對照組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），見表2。

表2 研究組和對照組陰道灌洗液中細胞因子比較 （±s，pg/ml）

表2 研究組和對照組陰道灌洗液中細胞因子比較 （±s，pg/ml）

組別 IL-6 IL-17 IFN-γ TGF-β研究組 55.58±8.51 92.76±10.24 31.64±4.21 28.98±5.81對照組 32.21±2.34 30.43±4.36 60.31±10.62 20.32±2.17 t 24.268 51.329 23.001 12.797 P 0.000 0.000 0.000 0.000

2.2 不同病理結(jié)果患者HR-HPV 負荷量比較隨著病情加重，HR-HPV＞1 000 拷貝/ml 的患者比例也隨之增加，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（Z=22.040，P=0.001），見表3。

表3 不同病理結(jié)果患者HR-HPV 負荷量比較 [n（%），拷貝/ml]

2.3 不同病理結(jié)果患者陰道灌洗液中細胞因子比較B、C 組IL-6、IL-17、TGF-β水平均低于A 組，IFN-γ 水平高于A 組（P＜0.05）；C 組IL-6、IL-17、TGF-β 水平均高于B 組，IFN-γ 水平低于B 組（P＜0.05），見表4。

表4 不同病理結(jié)果患者陰道灌洗液中細胞因子比較 （±s，pg/ml）

表4 不同病理結(jié)果患者陰道灌洗液中細胞因子比較 （±s，pg/ml）

注：與A 組比較，aP＜0.05；與B 組比較，bP＜0.05

組別 IL-6 IL-17 IFN-γ TGF-β A 組（n=27） 66.52±7.64 116.45±12.54 27.14±2.88 31.52±4.63 B 組（n=29） 39.68±4.65a 42.54±5.17a 34.82±3.42a 23.68±3.12a C 組（n=28）58.53±5.39ab 100.53±10.12ab 30.38±2.87ab 27.98±3.86ab

2.4 不同HPV 分型患者陰道灌洗液中細胞因子比較 HPV16 組、HPV18 組、其他組組間IL-6、IL-17、IFN-γ、TGF-β 水平比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），見表5。

表5 不同HPV 分型患者陰道灌洗液中細胞因子比較 （±s，pg/ml）

表5 不同HPV 分型患者陰道灌洗液中細胞因子比較 （±s，pg/ml）

組別 IL-6 IL-17 IFN-γ TGF-β HPV16 組（n=31） 54.35±7.11 91.68±12.63 30.57±4.53 28.98±4.51 HPV18 組（n=30） 54.96±7.57 92.84±13.24 29.06±4.67 29.87±4.39其他組（n=23） 55.49±7.69 92.67±12.59 30.86±4.42 28.45±4.27

2.5 相關(guān)性分析經(jīng)Spearman 相關(guān)性分析，HR-HPV 感染患者陰道灌洗液中細胞因子IL-6、IL-17、TGF-β 水平與HR-HPV 負荷量呈正相關(guān)（r=0.613、0.517、0.512，P＜0.05），IFN-γ 水平與HR-HPV 負荷量呈負相關(guān)（r=-0.557，P＜0.05）。

3 討論

宮頸癌屬于感染性疾病，主要發(fā)病原因為患者持續(xù)感染HR-HPV。HPV 是人類癌癥發(fā)病中唯一確認的致癌性病毒，HPV 感染人體后，使患者宮頸上皮細胞獲得較強的增殖活性，可能促使上皮細胞過度增殖而發(fā)生癌變[7]。大部分婦女被HPV 感染后的1～2年內(nèi)能自行清除HPV 病毒，然而人體免疫力不同，部分機體免疫力較差的感染者會出現(xiàn)持續(xù)感染，最終可能進展為宮頸癌。有研究證實，HR-HPV 的持續(xù)性感染導(dǎo)致機體細胞因子介導(dǎo)的抗腫瘤免疫被抑制，陰道免疫微環(huán)境發(fā)生紊亂，最終誘發(fā)宮頸癌[8]。正常人體受到抗原刺激后，CD4+T 細胞亞群開始進行增殖分化，分泌各類細胞因子，參與機體的免疫應(yīng)答，其中Th1 細胞可產(chǎn)生IFN-γ，Th17 細胞可產(chǎn)生IL-17，Treg 細胞可產(chǎn)生TGF-β，活化T 細胞可產(chǎn)生IL-6。

本研究結(jié)果顯示，研究組患者陰道灌洗液中細胞因子水平除IFN-γ 外均高于對照組，其原因可能與HR-HPV 感染患者體內(nèi)存在HR-HPV 病毒，機體發(fā)生免疫調(diào)控，而持續(xù)性感染導(dǎo)致機體免疫失衡有關(guān)。段律芳等[9]研究結(jié)果顯示，HR-HPV 負荷量隨患者CIN 級別增加而增加，認為HR-HPV 負荷量增加可能導(dǎo)致宮頸逐漸發(fā)生病變。本研究結(jié)果中，隨著患者病情加重，HR-HPV＞1 000 拷貝/ml的患者比例也隨之增加，說明HR-HPV 負荷量越大，患者病情越嚴重，與之結(jié)果一致。

不同病理結(jié)果患者陰道灌洗液中細胞因子水平比較顯示，宮頸癌患者IL-6、IL-17、TGF-β 水平最高，CIN Ⅱ、Ⅲ級患者其次，CIN Ⅰ級患者最低，IFN-γ 水平則相反。IL-6 屬于單鏈糖蛋白細胞因子，由多種細胞產(chǎn)生，為Th2 細胞相關(guān)細胞因子，具有促進T 細胞、B 細胞增殖及分化的功能，參與機體早期炎癥反應(yīng)[10]。IL-17 是Th17 細胞分泌的特征性細胞因子，主要功能為促進機體中性粒細胞聚集、活化，介導(dǎo)促炎癥反應(yīng)的發(fā)生[11]。IFN-γ 是水溶性二聚體細胞因子，其主要功能在于激活機體巨噬細胞，進行抗病毒，誘導(dǎo)Th1 細胞分化而抑制Th2細胞分化[12]。IFN-γ 作為干擾素，旨在通過干擾病毒的基因轉(zhuǎn)錄及病毒蛋白組分的翻譯來清除人體內(nèi)的病毒，患者陰道灌洗液中IFN-γ 水平降低可能導(dǎo)致機體免疫力降低，而最終導(dǎo)致宮頸癌變的發(fā)生。TGF-β 屬于生長因子，與腫瘤演變進程存在密切關(guān)系，可調(diào)控機體細胞增殖、遷移、侵襲、轉(zhuǎn)換[13]。正常情況下，機體Th1/Th2、Treg/Th17 處于動態(tài)平衡，以維持機體免疫平衡。

已有研究證實，HPV16、HPV18 屬于HPV 高危亞型，70%的宮頸癌患者源于此兩類高危亞型[14]。本研究將HR-HPV 感染患者根據(jù)HPV 亞型進行分組后，比較患者陰道灌洗液中細胞因子水平，發(fā)現(xiàn)陰道灌洗液中細胞因子水平差異不顯著，說明HRHPV 病毒類型對患者免疫系統(tǒng)影響差異不大。經(jīng)Spearman 相關(guān)性分析，HR-HPV 感染患者陰道灌洗液中細胞因子IL-6、IL-17、TGF-β 水平與HRHPV 負荷量呈正相關(guān)，IFN-γ 水平與HR-HPV 負荷量呈負相關(guān)，說明HPV 感染可能導(dǎo)致患者免疫功能受損，機體更易被病毒侵襲。陳志芳等[15]研究亦證實，宮頸HR-HPV 感染患者IL-6、IL-17、TGF-β水平與患者HR-HPV 負荷量存在相關(guān)性。

綜上所述，聯(lián)合檢測HR-HPV 感染患者陰道灌洗液中IL-6、IL-17、IFN-γ、TGF-β 水平有助于評估患者HPV 感染情況，且上述因子與HR-HPV負荷量有一定的相關(guān)性。但本研究樣本量較小，有待于擴大樣本量進行進一步研究。