在肝組織網(wǎng)狀纖維染色中復(fù)染方法的選擇

張紅雷，單天鳳，王 芳，邵 晨，楊 磊，王泰齡?

（1.中日友好醫(yī)院 病理科，北京 100029；2.天津醫(yī)科大學(xué)，天津 300070）

網(wǎng)狀纖維染色在肝病病理診斷中起著關(guān)鍵作用。在不同的肝臟疾病中往往需要配合不同的復(fù)染方法以清晰顯示關(guān)鍵的組織及細(xì)胞結(jié)構(gòu)，有利于病變的分析。本文對比了3 種不同復(fù)染方法及無復(fù)染法在網(wǎng)狀纖維染色中的不同特點(diǎn)，并進(jìn)行了分析和總結(jié)，為肝病病理診斷染色選擇提供必要的依據(jù)和參考。

1 材料和方法

1.1 材料

組織切片：我院病理科肝組織標(biāo)本，中性福爾馬林固定，切片厚4μm。網(wǎng)狀纖維染色-渡邊染色法[1]試劑：酸性高錳酸鉀、草酸、硫酸鐵銨、氨銀液、還原液、氯化金。復(fù)染試劑：核固紅、麗春紅、亮綠、Schiff 液、蘇木素。

1.2 方法

1.2.1 無復(fù)染無分化

常規(guī)脫蠟至水，酸性高錳酸鉀5min，水洗；草酸2min，水洗；鐵明礬1min，水洗；氨銀液10～60s，還原數(shù)秒，水洗；脫水透明封固。

1.2.2 復(fù)染核固紅

常規(guī)脫蠟至水，酸性高錳酸鉀5min，水洗；草酸2min，水洗；鐵明礬1min，水洗；氨銀液10～60s，還原數(shù)秒，水洗；氯化金分化1～3min，水洗；核固紅復(fù)染5min，脫水透明封固。

1.2.3 復(fù)染Masson

常規(guī)脫蠟至水，酸性高錳酸鉀5min，水洗；草酸2min，水洗；鐵明礬1min，水洗；氨銀液10～60s，還原數(shù)秒，水洗；氯化金分化1～3min，麗春紅3min，水洗；磷鉬酸1min，亮綠2min，水洗；脫水透明封固。

1.2.4 復(fù)染過碘酸-雪夫（periodic acid-Schiff，PAS）染色

常規(guī)脫蠟至水，酸性高錳酸鉀5min，水洗；草酸2min，水洗；鐵明礬1min，水洗；氨銀液10～60s，還原數(shù)秒，水洗；氯化金分化1～3min，Schiff 液10min，水洗；蘇木素復(fù)染，脫水透明封固。

2 結(jié)果

無復(fù)染無分化：網(wǎng)狀纖維呈黑色，膠原纖維呈棕黃色，背景無色或淡黃色（圖1，見彩插一）。復(fù)染核固紅：網(wǎng)狀纖維呈黑色，膠原纖維呈棕黃色，細(xì)胞核呈紅色，背景淡紅色（圖2，見彩插一）。復(fù)染Masson：網(wǎng)狀纖維呈黑色，膠原纖維呈綠色，細(xì)胞核呈紅色，肌纖維呈深紅色，背景淡紅色（圖3，見彩插一）。復(fù)染PAS：網(wǎng)狀纖維呈黑色，肝細(xì)胞漿呈櫻桃紅色，背景淡紅色（圖4，見彩插一）。

3 討論

網(wǎng)狀纖維染色在病理診斷中應(yīng)用廣泛，對肝病病理尤為重要。該染色可清晰反映肝病變的網(wǎng)狀支架形態(tài)[2]，并在一定程度上區(qū)分網(wǎng)狀纖維及膠原纖維。一方面通過顯示肝板網(wǎng)架斷離、塌陷、膠原沉積甚至纖維化等，判斷肝臟疾病的性質(zhì)、程度及轉(zhuǎn)歸。另一方面還可用于觀察不同肝臟腫瘤細(xì)胞的排列模式，從而對判斷腫瘤性質(zhì)及來源亦有重要意義。根據(jù)觀察不同病變的需要，在網(wǎng)狀纖維染色的基礎(chǔ)上，附加不同復(fù)染方法，旨在對其它目標(biāo)組織結(jié)構(gòu)或細(xì)胞有選擇性地突出顯示，對疾病的觀察及診斷往往起到關(guān)鍵作用。

無復(fù)染無分化法可以區(qū)分肝組織膠原纖維和網(wǎng)狀纖維的變化，反映肝實(shí)質(zhì)損傷或纖維化程度，在一般的肝病病理診斷中應(yīng)用廣泛（圖1，見彩插一）。

復(fù)染核固紅后，在原網(wǎng)狀纖維染色顯示肝板結(jié)構(gòu)的基礎(chǔ)上，還可顯示肝細(xì)胞損傷，如大泡性脂變（見圖2，與圖1為同一部位連續(xù)切片）。與無復(fù)染法相比，病變觀察可以更加細(xì)致全面。

復(fù)染Masson 后，網(wǎng)織纖維呈黑色，膠原纖維呈綠色，肝細(xì)胞呈淺紅色，肝細(xì)胞胞核、紅細(xì)胞及平滑肌呈深紅色。優(yōu)勢較大，特別在重度肝炎病變中，既標(biāo)記出網(wǎng)織纖維同時又顯示膠原纖維，2 種纖維組織顏色對比度高，差別鮮明，在肝組織壞死帶內(nèi)可清晰顯示膠原纖維沉積的情況，以區(qū)分較為新鮮的壞死帶或纖維化帶，從而判斷病變發(fā)生的進(jìn)程，是評價(jià)肝組織結(jié)構(gòu)損傷、修復(fù)和纖維化程度的主要依據(jù)[3]。因此，該復(fù)染方法應(yīng)用廣泛。此外，Masson 還可以將平滑肌細(xì)胞等通過麗春紅標(biāo)記成紅色，可以清晰顯示匯管區(qū)間質(zhì)內(nèi)的動脈或門脈管壁的病變（圖3，見彩插一）。較網(wǎng)狀纖維染色（方法1.2.1）而言，復(fù)染Masson 對技術(shù)要求更高。玻璃器皿必須十分清潔，試劑必須達(dá)到相應(yīng)純度，各試劑比例必須精確[4]，其中氫氧化銨的量不能過多，否則將降低染色的敏感性，使網(wǎng)狀纖維浸染較弱或達(dá)不到浸染效果[5]。另外，氨銀液染色時間應(yīng)精確、網(wǎng)狀纖維鍍銀要恰好，染色程度達(dá)標(biāo)的同時，其余部位要避免非特異性黑顆粒沉積，以免背景過深或染色劑疊加等，影響后續(xù)復(fù)染效果。

雖然復(fù)染Masson 優(yōu)勢頗多，應(yīng)用廣泛，但仍有一些特殊肝病需要其它復(fù)染方法。肝細(xì)胞富含糖原，PAS 染色可以將肝細(xì)胞染成櫻桃紅色。在很多肝臟血管疾病中，例如肝小靜脈閉塞病引起的靜脈回流障礙，小葉中心帶肝實(shí)質(zhì)破壞嚴(yán)重，復(fù)染PAS，可顯示嚴(yán)重破壞的肝網(wǎng)架結(jié)構(gòu)及剩留的肝實(shí)質(zhì)（圖4，見彩插一），有利于辨別肝細(xì)胞損傷[3]，對于該類疾病的診斷起著關(guān)鍵作用。

綜上，4 種復(fù)染方法由于復(fù)染的目標(biāo)組織或細(xì)胞不同，決定了各自在不同肝臟病變中的染色優(yōu)勢，熟練掌握每種復(fù)染方法的優(yōu)缺點(diǎn)，并在疾病診斷中合理應(yīng)用，必將有助于疾病診斷。此外，不同的復(fù)染方法對技術(shù)的要求也有所不同，技師應(yīng)仔細(xì)認(rèn)真，與診斷醫(yī)師充分溝通與合作，更好地服務(wù)臨床。

圖1 網(wǎng)狀纖維呈黑色，膠原纖維呈棕黃色，背景無色或淡黃色。

圖2 網(wǎng)狀纖維呈黑色，膠原纖維呈棕黃色，細(xì)胞核呈紅色，背景淡紅色。

圖3 網(wǎng)狀纖維呈黑色，膠原纖維呈綠色，細(xì)胞核呈紅色，肌纖維呈深紅色，背景淡紅色。

圖4 網(wǎng)狀纖維呈黑色，肝細(xì)胞漿呈櫻桃紅色，背景淡紅色。