胎盤中信號轉導和轉錄活化因子3與妊娠期肝內膽汁淤積癥患者圍產結局的關系

裴廣麗 謝潔 劉德榮 徐金娥

近年來，有數據顯示，ICP患病率達0.20%～2.00%，多發于妊娠中晚期，可致羊水胎糞污染、早產、新生兒窒息等妊娠并發癥[1]。該病發病機制復雜，屬多因素(如環境、內分泌、遺傳變異、免疫功能失常等)共同作用所致[2-4]。據報道顯示，信號轉導和轉錄活化因子3(STAT3)參與ICP的發生及發展，但目前鮮有報道分析胎盤中STAT3表達與ICP的關系，且關于胎盤中STAT3表達與ICP孕婦分娩結局的關系尚無文獻報道[5]。本研究通過測定健康順產孕婦和ICP孕婦胎盤中STAT3表達，觀察不同分娩結局產婦STAT3表達特征。

資料與方法

一、一般資料

選擇我院ICP孕婦126例為觀察組，納入時間為2016年1月至2020年1月，另選擇同期入院的102例健康順產孕婦為對照組，獲我院醫學倫理委員會批準。入選標準：①ICP孕婦：入院后確診[6]；臨床資料完整；②健康順產孕婦：年齡≥18歲；既往身體健康，未發現妊娠期高血壓、糖尿病等并發癥；臨床資料完整。排除標準：①未發現輸血和免疫治療史；②不良孕產病史，如死胎、復發性自然流產等；③胎位異常；④妊娠期高血壓等妊娠合并癥。126例ICP孕婦年齡18～37(28.10±1.54)歲，102例健康順產孕婦年齡20～37(29.20±1.62)歲，兩組基線資料無顯著差異性(P>0.05)。

二、 研究方法

(一)免疫組織化學法測定胎盤組織中STAT3表達 娩出胎盤后10 min內，在臍根正對面取2塊無羊膜和蛻膜組織的絨毛組織，約1 cm×1 cm×1 cm，期間注意避開鈣化以及壞死區域，其中1塊絨毛組織利用無菌生理鹽水沖洗后浸入10%甲醛中進行固定，經脫水、透明等處理后行石蠟切片制作，后備用以行免疫組織化學檢測。另1塊絨毛組織置于甲醛中，行蛋白印跡法檢測。以SP法測定胎盤組織中STAT3表達(上海康朗生物科技)。由2位經驗豐富的病理學專業醫師以雙盲法行結果判定，若細胞內有棕黃色顆粒出現，則為STAT3陽性信號，根據陽性細胞百分率賦分(≥75%、25%～<75%、5%～<25%、0%～<5%分別賦3、2、1、0分)，并根據細胞質或胞核著色度賦分(棕褐、棕黃、淺黃、未著色分別賦3、2、1、0分)，將兩項賦分乘積<2分則為陰性，反之為陽性。

(二)蛋白印跡法測定STAT3蛋白表達 留取蛋白樣本，測定細胞總蛋白濃度，上樣電泳處理后將蛋白轉印至聚偏二氟乙烯印跡膜上，小牛血清封閉，STAT3一抗、β-actin抗體4℃孵育過夜，二抗室溫孵育后利用增強化學發光法發光。借助Quantity圖像分析系統對目的條帶進行分析，詳細觀察條帶灰度值，分析STAT3蛋白表達。

三、統計學方法

結 果

一、兩組胎盤中STAT3表達分析

兩組胎盤滋養層細胞胞質和胞核處均出現STAT3表達，呈褐色、棕黃、淺黃色染色顆粒，而觀察組、對照組胎盤中STAT3分別呈強陽性表達和弱陽性表達(圖1)。針對胎盤中STAT3細胞陽性率及平均光密度值，觀察組均顯著高于對照組(P<0.001，表1)。

表1 比較兩組STAT3細胞陽性率與平均光密度值(±s)

圖1 兩組胎盤中STAT3表達(A：觀察組；B：對照組)

二、兩組胎盤中STAT3蛋白表達分析

兩組孕婦胎盤中均發現STAT3蛋白表達，其中觀察組、對照組分別為1.060±0.110、0.370±0.080，兩組差異顯著(t=53.004，P<0.001)。

三、ICP孕婦不同分娩結局胎盤中STAT3表達觀察

126例ICP孕婦中，順產39例(30.95%)，剖宮產87例(69.05%)。針對胎盤中STAT3細胞陽性率，順產者和剖宮產者分別為(0.250±0.036)%、(0.760±0.068)%，存在顯著差異(t=44.084，P<0.001)；針對平均光密度值，順產者和剖宮產者分別為0.038±0.011、0.074±0.015，存在顯著差異(t=13.443，P<0.001)。

討 論

STAT3在諸多組織中具有重要作用，屬細胞生長過程中的有效調劑者，基于諸多生長因子、細胞因子及其他刺激因素干擾下可被激活，進而發揮對其他細胞因子表達的調節作用，并介導細胞生理過程(如增殖、凋亡等)[7-10]。有報道發現，絨毛外滋養層細胞侵襲、遷移等生物學功能與STAT3轉錄因子活性有關[11-13]。譚楨等[14]報道推測，誘導STAT3信號通路受抑可發揮抗炎作用，抑制肝內膽汁淤積。

結果顯示STAT3在胎盤中有明確表達，其中兩組胎盤中STAT3細胞陽性率、平均光密度值存在顯著差異；STAT3蛋白表達水平在觀察組更高，表明相較于健康順產孕婦，ICP孕婦母胎界面STAT3表達明顯上升，提示STAT3可能參與ICP發生及發展。葉云飛等[15]通過對50例ICP孕婦和30例健康孕婦進行系統研究，也發現ICP孕婦胎盤中STAT3細胞陽性率較健康孕婦高，且隨著病情加重，STAT3細胞陽性率呈遞增態勢，證實ICP發生及發展過程中STAT3發揮著重要作用，證實了本結論。筆者推測，STAT3可誘導大量白細胞介素-6等合成并釋放，活化Janus激酶/信號通路，并出現正反饋調節作用，加劇炎癥級聯反應，最終誘發ICP的發生及發展。有研究表明，膽酸基于誘導腸道低度炎性反應下可促使白細胞介素-6/STAT3通路被激活[16]。筆者推測，造成本結論的原因，還可能跟ICP孕婦膽汁酸水平相關，具體機制尚未明確。

此外，本研究發現，順產者胎盤中STAT3細胞陽性率及平均光密度值均明顯低于剖宮產者，預示胎盤中STAT3可能與ICP孕婦分娩結局有關。ICP的發生及發展可能與白細胞介素-6/STAT3通路有關，而STAT3、白細胞介素-6表達又與ICP病情嚴重程度有關，故推測胎盤中STAT3可能與ICP孕婦分娩結局密切相關。

綜上，ICP孕婦分娩結局可能與胎盤中STAT3表達有關，但考慮本文選取病例數偏少，且未分析圍生兒結局與胎盤中STAT3表達的關系，故今后需深入分析。