上皮性卵巢癌組織NFAT3、Maspin 表達及臨床意義

王英，閃海霞，孫勃

（鄭州大學附屬南陽市中心醫院婦產科，河南 南陽473000）

上皮性卵巢癌是卵巢腫瘤最常見的病理類型,但由于早期上皮性卵巢癌多無明顯的臨床表征，超過80%的患者確診時已存在腹腔內種植、 淋巴轉移或處于中晚期階段,這也是造成上皮性卵巢癌患者較高病死率的最主要原因[1]。 臨床研究[2]證實上皮性卵巢癌由于分級或分期不同,給予的手術方案也不盡相同,因此提高上皮性卵巢癌早期診斷和評估疾病進展準確率對提高治療效果具有重要意義。 現臨床針對上皮性卵巢癌的診斷主要依靠影像學檢查聯合血清標志物,但診斷的特異性較低且對腫瘤分期無法確準。 活化T 細胞核因子3(Activated T cell nuclear factor 3,NFAT3) 與轉錄關系密切，存在于多種非免疫組織細胞中，被證實可參與脂肪細胞分化、心肌細胞肥大及乳腺癌的發生、發展過程[3]；乳腺絲氨酸蛋白酶抑制劑（Mammary serine protease inhibitor，Maspin）是新發現的腫瘤抑制基因，具有誘導細胞凋亡，抑制腫瘤細胞轉移和血管生成的作用,但現階段NFAT3、Maspin 與卵巢癌的作用研究資料較少[4]。 故而，本研究探討了上皮性卵巢癌組織NFAT3、Maspin 表達及臨床意義，旨在為臨床卵巢癌的診斷、 治療和預后提供數據參考，現報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2017 年1 月至2019 年4 月我院保存的上皮性卵巢癌組織97 例，同時選取良性卵巢腫瘤56 例，正常卵巢組織50 例作為對照，各組臨床資料比較差異無統計學意義（P＞0.05），見表1。納入標準：⑴均經病理學確診；⑵術前未行放療、化療等治療；⑶患者及家屬知情同意。 排除標準：⑴合并有其他系統惡性腫瘤；⑵有免疫缺陷性疾病、內分泌疾病、肝腎功能障礙等疾病。

表1 各組一般資料比較

1.2 實驗方法 采用免疫組化染色法檢測NFAT3、Maspin 表達： 取適量上皮性卵巢癌組織甲醛固定后常規石蠟包埋并切片;梯度乙醇水化;3 次PBS 沖洗;根據對應一抗要求修復相關組織;過氧化氫10 min 孵育后3 次PBS 沖洗; 分別滴加NFAT3、Mas pin 一抗，室溫2h 孵育；分別滴加對應后1h 室溫孵育；吸除PBS 液后，DAB 溶液顯色；蘇木精復染；封片觀察;已知卵巢癌陽性切片為陽性對照;PBS 代替一抗作陰性對照[5]。

1.3 判斷標準 采用半定量評分，染色范圍：陽性細胞比例＜5%為0 分，5%～25%為1 分，26%～50%為2 分，51%～75%為3 分，＞75%為4 分； 染色強度：無著色為0 分，黃色為1 分，棕黃色為2 分，棕褐色為3 分。染色范圍和染色強度得分之積≥4 分為陽性表達[6]。

1.4 統計學處理 統計分析采用SPSS22.0 軟件，年齡、體質量等資料采用（x±s)表示，多組間比較使用方差分析,兩兩比較采用LSD-t 檢驗；各組NFAT3、Maspin 陽性率比較使用χ2檢 驗；NFAT3、Maspin相關性采用Spearman 秩相關分析。 P＜0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 各組織NFAT3、Maspin 表達比較 上皮性卵巢癌NFAT3、Maspin 蛋白陽性表達率明顯高于良性卵巢腫瘤和正常卵巢組織（P＜0.05）,見表2 和圖1。

表2 各組織NFAT3、Maspin 表達比較

圖1 免疫組化染色圖

2.2 NFAT3 表達與臨床病理特征關系 臨床分期Ⅲ～Ⅳ期、中低分化和有淋巴結轉移患者NFAT3 蛋白陽性表達率明顯高于Ⅰ～Ⅱ期、高分化和無淋巴結轉移患者（P＜0.05），見表3。

2.3 Maspin 表達與臨床病理特征關系 臨床分期Ⅲ～Ⅳ期和有淋巴結轉移患者Maspin 蛋白陽性表達率明顯低于Ⅰ～Ⅱ期和無淋巴結轉移患者 （P＜0.05），見表4。

2.4 相關性分析 將上皮性卵巢癌組織NFAT3 和Maspin 蛋白進行相關分析，結果顯示：上皮性卵巢癌組織NFAT3 和Maspin 蛋白呈負相關(rs=-0.373，P＜0.05)，見表5。

表3 NFAT3 表達與臨床病理特征關系

表4 Maspin 表達與臨床病理特征關系

3 討論

上皮性卵巢癌是最常見的卵巢癌類型,屬于女性生殖系統腫瘤死亡率最高的惡性腫瘤,由于缺乏高特異性的腫瘤標記物和早期診斷的特異性臨床癥狀,上皮性卵巢癌的5 年生存率非常低,不足20%[7]。現階段關于卵巢癌的發病機制尚存在分歧，但普遍認為可考慮從分子或基因水平研究細胞周期的相關調控機制,分析惡性腫瘤的發生、發展過程。

表5 相關性分析

NFAT 是表達于淋巴細胞和活化T 細胞的一種轉錄因子,可抵抗多種致癌物質，而激活的NFAT可誘導IL-8、TNF-α 及COX-2 等各種與癌癥進展有關的細胞因子的表達[8,9]。 甲狀腺、前列腺及乳腺等人體多種器官均可發現Maspin 的高表達, 而對應部位的惡性腫瘤細胞中存在Maspin 的表達下調甚至表達缺失, 這均提示Maspin 的表達可能與腫瘤的發生、發展具有密切相關性[10]。 但早期的研究[11，12]發現正常的卵巢組織并未發現Maspin 的表達，國內也有研究發現卵巢癌中Maspin 存在高表達，這也說明了Maspin 在卵巢腫瘤進展過程中的表達復雜化，需要研究者給予額外的重視。

本研究對各組織NFAT3、Maspin 表達比較結果顯示上皮性卵巢癌NFAT3、Maspin 蛋白陽性表達率明顯高于良性卵巢腫瘤和正常卵巢組織。 上述結果說明NFAT3、Maspin 均有可能成為診斷上皮性卵巢癌重要指標。 本研究中Maspin 的結果入前列腺癌及乳腺癌的結果相反可能是因為Maspi在腫瘤細胞中呈現出復雜的后生性改變,特別是甲基化和轉錄因子均可通過轉錄調節上調Maspin 的表達。

NFAT3 表達與臨床病理特征關系結果顯示臨床分期Ⅲ～Ⅳ期、中低分化和有淋巴結轉移患者N FAT3 蛋白陽性表達率明顯高于Ⅰ～Ⅱ期、 高分化和無淋巴結轉移患者。 該結果說明NFAT3 可能參與上皮性卵巢癌的發生、發展，與惡性腫瘤的惡性程度正相關。 Maspin 表達與臨床病理特征關系結果顯示臨床分期Ⅲ～Ⅳ期和有淋巴結轉移患者Maspin 蛋白陽性表達率明顯低于Ⅰ～Ⅱ期和無淋巴結轉移患者。 該結果提示Maspin 的陽性表達情況隨卵巢腫瘤的發展而下降,可以成為卵巢癌預后的重要標記物。 相關研究[13-16]對胃癌及正常黏膜的Maspin 表達情況研究也發現了相似結果,我們推測Maspin 可能是通過抑制腫瘤細胞的侵襲和運動能力，增加細胞黏附性等抑制腫瘤細胞的轉移。

本研究將上皮性卵巢癌組織NFAT3 和Maspin 蛋白進行相關分析，結果顯示：上皮性卵巢癌組織NFAT3 和Maspin 蛋白呈負相關。該結果提示NFAT3 和Maspin 蛋白可通過相關信號通路或路徑進行調控，NFAT3 的活化抑制了Maspin 的表達，并在腫瘤發生、發展中發揮重要作用，這為疾病的預后提供新的參考指標。

綜上所述，上皮性卵巢癌組織NFAT3、Maspin表達上調，與臨床分期、分化程度及淋巴結轉移有關，兩者間存在負相關關系。