黏液型和實體型肺腺癌ALK 和EGFR 表達的研究

鐘斌，彭芳，王建，張功亮

（1.贛州市人民醫院病理科，江西 贛州341000；2.贛南醫學院第一附屬醫院藥劑科，江西 贛州341000）

肺癌是嚴重危害人類健康的惡性腫瘤之一，在我國肺癌的發病率及病死率均居第一。 近幾年來，分子生物學技術的迅速發展，研究者根據肺癌患者的藥物基因組學等特征,進行分子靶向藥物治療是研究的熱點, 如表皮生長因子受體（epithelial growth factor receptor，EGFR）信號通路和棘皮類微管相關樣蛋白-4-間變型淋巴瘤激酶（echinoderm microtubule associated -protein like 4 -anaplastic lymphoma kinase，EML4-ALK）融合基因。 EGFR 信號通路在肺癌,特別是非小細胞肺癌的發生和發展過程中起著重要作用[1-3]。 表皮生長因子受體酪氨酸激酶抑制劑是針對表皮生長因子受體治療非小細胞肺癌的分子靶向藥物[3,4]。 EML4-ALK 融合基因的出現為肺癌的分子治療發展帶來了新的有效靶點[5]。 但不同的肺腺癌亞型基因表達有所不同，患者進行靶向治療也有差異[5]。 而且，在不同亞型的肺腺癌中，EGFR 和ALK 的表達亦有所差異。 本研究采用免疫組織化學技術探討黏液型和實體型肺腺癌ALK 和EGFR 蛋白和基因表達的情況，為肺癌的精準靶向治療提供依據。

1 資料和方法

1.1 臨床資料 收集本院2012 年7 月-2018 年12月間,黏液型肺腺癌和實體型肺腺癌患者活檢和腫物切除病例并有病理確診的病例共30 例。 其中男性12 例，女性17 例，年齡范圍41~82 歲，平均年齡63 歲。

1.2 免疫組織化學方法 免疫組化學試劑的一抗使用是福州邁新生物技術開發公司生產的EGFR和ALK。檢測系統是使用福建邁新公司的Elivision試劑盒。石蠟切片厚度為3~4μm，60 攝氏度烤箱烤片1h， 多梯度二甲苯進行脫蠟， 并用梯度乙醇水化， 蒸餾水浸泡約5min，3%H2O2室溫孵育10min以阻斷內源性過氧化酶的活性， 然后用PBS 液進行沖洗，高壓鍋把抗原修復，冷卻至室溫環境。 加入免疫組化二步法中試劑A，室溫孵育20min，PBS液沖洗3 次，每次5min，然后加入試劑B，室溫下孵育30min，并進行PBS 液沖洗3 次，每次5min。在顯微鏡下控制DAB 的顯色效果， 并用水沖洗以終止反應。 用蘇木素進行復染和鹽酸酒精分化，返藍、脫水、透明，最后用中性樹膠封片，每次均做陽性及PBS 陰性對照。

1.3 結果判定 免疫組織化學判斷的標準：定位準確， 黃色顆粒為陽性，EGFR 蛋白的陽性定位于細胞漿或細胞膜，ALK 蛋白的陽性定位于細胞質核旁：陽性細胞數的比例<10%為陰性，>10%為陽性，結果判定采用雙盲對照法觀察。

2 結果和結論

30 例免疫組織化學結果為：黏液型肺腺癌EG FR 陽性率40%，ALK 陽性率10%； 實體型肺腺癌EGFR 陽性率50%，ALK 陽性率13.3%。 見圖1，圖2。

3 討論

圖1 腫瘤細胞陽性表達EGFR（EnVision 法×200）

圖2 腫瘤細胞陽性表達ALK（EnVision 法×400）

肺癌是全球最常見的惡性腫瘤之一,嚴重危害人類健康，其中非小細胞肺癌占80%以上[1-5]，采用手術療效較差，5 年生存率低于20%[6-9]。近幾年來，分子生物學技術的迅速發展,研究者根據肺癌患者的藥物基因組學等特征,進行分子靶向藥物治療是研究的熱點，而且隨著研究的深入，更多的靶點基因被發現，為靶向治療提供了依據[9-11]。

本實驗用組織芯片及免疫組織化學方法測定ALK 和EGFR 在黏液型和實體型肺腺癌的蛋白表達, 探討ALK 和EGFR 在黏液型和實體型肺腺癌的表達差異,為肺癌的精準靶向治療提供依據[12]。

研究發現, 黏液型肺腺癌和實體型肺腺癌的ALK 陽性率分別為10%和13.3%，而其它亞型（腺泡狀亞型、貼壁亞型、乳頭狀亞型）ALK 陽性表達率為5%左右[13,14]，黏液型肺腺癌和實體型肺腺癌的ALK 陽性率明顯增高（P<0.05）。 黏液型肺腺癌和實體型肺腺癌的EGFR 陽性率分別為40%和50%，較其它亞型EGFR 陽性(表達率為56%左右)稍低。 本研究同樣發現有ALK 陽性表達的病例EGFR 一般為陰性表達。