頭孢氨芐片溶出曲線測定方法的比較和確定

張建麗 薛夢薇 柳世萍 賈全(華北制藥河北華民藥業有限責任公司，河北 石家莊 052165)

0 引言

頭孢氨芐片是臨床上應用非常普遍的一種抗菌藥[1]，且在國務院辦公廳發布的需開展仿制藥質量與療效一致性評價的289個基藥口服固體制劑范圍內[2]。對于普通口服固體制劑，可采用比較仿制制劑與參比制劑體外多條溶出曲線相似性的方法，評價仿制制劑的質量，所以選擇適合的溶出曲線測定方法對于研究過程來說十分重要。中國藥典中收載的頭孢氨芐片溶出度檢測方法為籃法100轉，并未檢測溶出曲線[3]，日本橙皮書中采用槳法50轉對頭孢氨芐膠囊進行溶出曲線的檢測，未涉及頭孢氨芐片[4]。本文主要對比籃法100轉和槳法50轉測定頭孢氨芐片參比制劑pH1.2鹽酸介質，pH4.0醋酸介質，pH6.8磷酸介質以及水介質中的溶出曲線結果并選出相對更適合頭孢氨芐片的溶出曲線測定方法。

1 儀器與試劑

1.1 儀器

電子天平(XS105，梅特勒-托利多)全自動溶出儀(RC12AD，天大天發)，紫外分光光度儀(UV-2700，島津)

1.2 試劑

頭孢氨芐片(Flynn Pharma Ltd)，鹽酸(天津風船)，氫氧化鈉(天津光復)，磷酸二氫鉀(科密歐試劑)，乙酸鈉(天津光復)，冰醋酸(天津永大)

2 溶出曲線的測定

2.1 溶出介質配制[5]

pH1.2鹽酸介質：取7.65mL的鹽酸，用水稀釋至1000mL，搖勻，即得。pH4.0醋酸介質：取乙酸鈉1.22g和2mol/L的醋酸溶液(取冰醋酸120.0g(114mL)用水稀釋至1000mL，搖勻，即得)20.5mL用水溶解并稀釋至1000mL，搖勻，即得。pH6.8磷酸介質：取0.2mol/L磷酸二氫鉀溶液(取磷酸二氫鉀27.22g，加水溶解并稀釋至1000mL)250mL與112.0mL的0.2mol/L氫氧化鈉溶液(取氫氧化鈉8.00g，加水溶解并稀釋至1000mL)混合，用水稀釋至1000mL，搖勻，即得。

2.2 溶出曲線測定

取本品12片，分別以水、鹽酸溶液(pH1.2)、醋酸鹽緩沖液(pH4.0)、磷酸鹽緩沖液(pH6.8)900mL為溶出介質，依法操作(兩種方法，籃法，轉速100轉和槳法，轉速50轉)，在5min、10min、15min、20min、30min、45min、60min 時，分別取溶液5mL，濾過，并及時在操作容器中補充溶出介質5mL，精密量取續濾液各適量，分別用溶出介質定量稀釋制成每1mL中約含頭孢氨芐(按C16H17N3O4S計)25μg的溶液，作為供試品溶液，照紫外-可見分光光度法[6]，在262nm的波長處測定吸光度；另精密稱取頭孢氨芐對照品適量，加溶出介質溶解并定量稀釋制成每1mL中約含25μg的溶液，同法測定，計算每片在不同時間的溶出量。 以取樣時間點為橫坐標，平均溶出量為縱坐標，繪制該介質的溶出曲線圖。

2.3 影響溶出數據的因素

除藥物制劑自身因素外，實驗的儀器裝置，溶出介質以及濾膜等均有可能對藥物的溶出數據產生影響[7]。

(1)不同設備檢測。分別使用天大天大和安捷倫溶出儀，采用籃法100轉的方法檢測頭孢氨芐片樣品的溶出數據，對比溶出曲線。

(2)溶液穩定性實驗。取頭孢氨芐片樣品，采用籃法100轉溶出曲線測定，分別在5min和45min時取溶液適量，濾過，精密量取續濾液適量，用溶出介質定量稀釋制成每1mL中約含頭孢氨芐25μg 的溶液，將該溶液于室溫下放置3h，分別于0、1、2、3h測定溶液的吸光度，計算吸光度的RSD%。

(3)濾膜吸附實驗。天大天大溶出儀使用天大天大系統保護過濾頭和濾膜，針對其過濾方式進行濾膜吸附實驗。配制相當于主藥溶出度10%的溶液和相當于主藥溶出度100%的溶液，這兩種溶液均分為兩份，一份過濾，一份不過濾。照紫外-可見光光度法在262nm波長處測定溶液的吸光度。

3 結果與討論

3.1 pH1.2鹽酸介質溶出曲線的測定

在pH1.2鹽酸介質中分別采用籃法100轉和槳法50轉對頭孢氨芐片的溶出曲線進行檢測，得出各個時間點對應的平均溶出量并繪制對應的溶出曲線見圖1。

圖1 pH1.2鹽酸介質中籃法100轉和槳法50轉的溶出曲線

圖1中的兩條溶出曲線基本重合，可知在pH1.2鹽酸介質中采用兩種方法檢測結果差異不大。

3.2 pH4.0醋酸介質溶出曲線的測定

在pH4.0醋酸介質中分別采用籃法100轉和槳法50轉對頭孢氨芐片的溶出曲線進行檢測，得出各個時間點對應的平均溶出量，繪制對應的溶出曲線見圖2。

圖2 pH4.0醋酸介質中籃法100轉和槳法50轉的溶出曲線

從圖2可以看出前期溶出籃法100轉略高于槳法50轉，且籃法100轉檢測的數據繪制的曲線更平滑。終溶出量兩者相當，且達到溶出平臺的時間兩種方法基本一樣。

3.3 pH6.8磷酸介質溶出曲線的測定

在pH6.8磷酸介質中分別采用籃法100轉和槳法50轉對頭孢氨芐片的溶出曲線進行檢測，得出各個時間點對應的平均溶出量，繪制對應的溶出曲線見圖3。

圖3 pH6.8磷酸介質中籃法100轉和槳法50轉的溶出曲線

圖3表明前期溶出籃法100轉略高于槳法50轉，終溶出量兩者相當，且達到溶出平臺的時間兩種方法基本一樣。

3.4 水介質溶出曲線的測定

在水介質中分別采用籃法100轉和槳法50轉對頭孢氨芐片的溶出曲線進行檢測，得出各個時間點對應的平均溶出量，繪制對應的溶出曲線見圖4。

圖4 水介質中籃法100轉和槳法50轉的溶出曲線

圖4可以直觀地看出前期溶出籃法100轉略高于槳法50轉，但最終溶出水平相當。

3.5 實驗現象

實驗開始時，采用槳法50轉的溶出杯中發現有樣品粘在杯壁而非直接掉至杯底。各樣品掉落位置不同，樣品周圍介質流速有一定區別，前期RSD值可能偏大。且投料時并非機器自動投料，有一定微小的時間差，可能會在后期研究過程中測定其他樣品時出現RSD較高的情況出現。而籃法100轉相對可以減少非片劑本身因素造成的溶出數據差異。

3.6 各時間點RSD對比

采用籃法100轉和槳法50轉檢測頭孢氨芐片溶出曲線數據，各時間點RSD值見表1。

表1 籃法100轉和槳法50轉檢測各時間點RSD對比

從表1中數據可知，采用槳法50轉檢測溶出曲線數據，前期RSD值高于籃法100轉。結合實驗現象，籃法100轉相比于槳法50轉有一定的優勢。

3.7 其他因素

采用不同設備檢測頭孢氨芐片的溶出數據四種介質中各時間點RSD均不超過5%。在1～3小時內，四種介質的5min和45min時間點溶出數據RSD均不大于2%，溶液穩定。在天大天大系統保護濾頭和濾膜的過濾方式下，四種介質回收率不低于98%，濾膜吸附不影響本品種的溶出測定。綜上，濾膜，設備，所選的溶出介質這三個外在因素不影響頭孢氨芐片的溶出。

4 結語

頭孢氨芐片是一種高溶解性的藥物，對比槳法50轉和籃法100轉兩種溶出方法檢測溶出曲線的結果，均能夠反應頭孢氨芐片制劑高溶解性的特點，區分力兩種方法接近。但是結合溶出杯中的實驗現象和各時間點RSD，籃法100轉優于槳法50轉，該方法與《中國藥典》和《美國藥典》中頭孢氨芐片溶出度方法一致。綜合來看，頭孢氨芐片體外溶出試驗方法選擇籃法100轉更為合適。