高效液相色譜技術在噁蟲威殺蟲劑及其微膠囊有效含量測定中的應用研究

周蓉(南京市產品質量監督檢驗院，江蘇 南京 210000)

0 引言

噁蟲威殺蟲劑是一種氨基甲酸酯類殺蟲劑，具有觸殺和胃毒作用，能夠高效殺蟲，并且殘留率低[1-2]，是一種衛生和農業生產兩用的廣譜殺蟲劑。但由于噁蟲威在堿性介質中易分解、難溶于水且具有中等危害毒性[3]，因此可以將噁蟲威殺蟲劑進行微膠囊化從而降低毒性，延長其有效期。殺蟲劑分析方法報道的有分光光度法、液相色譜法、氣相色譜-質譜聯用法等。目前，對于噁蟲威殺蟲劑及其微膠囊有效含量的測定方法的研究相對較少。本研究采用反相高效液相色譜法，對噁蟲威殺蟲劑及其微膠囊的有效含量進行分析研究，并對此方法的有效性進行評估。高效液相色譜技術簡稱HPLC技術是一種利用高壓泵將極性溶劑泵入裝有填充劑的色譜柱中，經進樣閥注入的樣品被流動相帶入色譜柱內進行分離后進入檢測器，由記錄儀記錄色譜信號并進行數據處理得到分析結果的一種新型技術[4-5]。由于HPLC技術具有響應快速、反應靈敏、準確度好、精密度高的優點，目前已廣泛使用于農藥、氨基酸、蛋白質、多糖、金屬有機物等物質的分析[6]。

1 實驗部分

1.1 實驗儀器與試劑

儀器：920-LC高效液相色譜儀(美國Varian公司)；Millipore Q超純水器(美國Millipore公司)；Inertsil ODS-2色譜柱(島津(上海)實驗器材有限公司)；超聲波清洗機(上海科導超聲儀器有限公司)；FA1604N分析天平(上海菁海儀器有限公司)；0.22μm有機相濾膜。試劑：噁蟲威殺蟲劑標樣(上海谷研有限公司)；噁蟲威殺蟲劑原藥(某公司)；噁蟲威殺蟲劑微膠囊(自制)；乙腈：色譜純(西格瑪奧德里奇貿易有限公司)。

1.2 實驗方法

1.2.1 高效液相色譜檢測條件

①色譜柱：Inertsil ODS-2(4.6×250mm，5μm)；②流動相：乙腈：水=6:4(V:V)；③流速：1.0mL/min；④柱溫：35℃；⑤進樣量：20μL；⑥檢測波長：254nm。

1.2.2 標準曲線制作

確稱取噁蟲威殺蟲劑標樣0.0500g(精確到0.0001g)置于100mL容量瓶中，用乙腈溶解并定容，搖勻，配制500ppm的噁蟲威標樣儲備液。分別移取噁蟲威儲備液1、2、5、10、2、50mL 置于100mL容量瓶中，用乙腈定容，搖勻。測試前用0.22μm的有機相濾膜過濾。在上述高效液相色譜條件下進行測試，以噁蟲威殺蟲劑濃度為橫坐標，峰面積為縱坐標繪制標準曲線。然后利用精密度、檢出限和加標回收率來對本測試方法進行評價。

1.2.3 噁蟲威殺蟲劑微膠囊有效成分提取

準確稱取0.1000g噁蟲威殺蟲劑微膠囊樣品于樣品瓶中，加入10mL乙腈，室溫下超聲萃取60min，取上清液用0.22μm的有機相濾膜過濾，待檢。

2 結果與討論

2.1 色譜條件的選擇

在190～400nm的波長范圍內，掃描了噁蟲威的吸收光譜。結果顯示，噁蟲威在254nm處有最大吸收波長，因此選擇254nm作為試驗的檢測波長。根據噁蟲威的性質，選擇乙腈作為有機溶劑，研究發現乙腈-水體系不僅溶解度高，且柱壓低，因此選擇乙腈-水作為流動相。經測定，選用乙腈：水=6:4作為流動相。當流速分別為0.8、1.0、1.5、2.0mL/min，考察不同流速對分離效果的影響。研究發現當流速達到1.0mL/min時，有效成分噁蟲威和其他雜質能夠很好的分離且峰形對稱完整；柱壓隨著流速的增大而不斷增加。綜合考慮分離效果、峰形、柱壓等因素，選擇流速為1.0mL/min。在上述高效液相色譜條件下對噁蟲威標樣和原藥進行測定，分別在2.34、2.33min時出峰，保留時間一致。圖1、2中噁蟲威有效成分和雜質均能夠有效分離，且峰形對稱完整，基線穩定，出峰時間短，能夠準確高效地進行檢測。

圖1 噁蟲威殺蟲劑標樣高效液相色譜圖

圖2 噁蟲威殺蟲劑原藥高效液相色譜圖

2.2 標準曲線

定量分析主成分時，要求標準曲線的線性相關系數高于0.999。在上述高效液相色譜檢測條件下，噁蟲威殺蟲劑濃度與峰面積響應值線性關系如圖3所示。標準曲線的線性方程為y=2730.7x+13103.3，線性相關系數為0.99925，滿足定量分析要求。

圖3 噁蟲威殺蟲劑濃度與峰面積響應值線性關系圖

由于本方法將用于噁蟲威原藥及其微膠囊樣品的定量分析，因此需要通過精密度、檢出限、加標回收率來進行評價。

2.3 精密度測試

選擇濃度為50ppm的噁蟲威溶液樣品，在上述高效液相色譜條件下連續進樣7次進行相對標準偏差(RSD)計算，用相對標準偏差來表征該方法的精密度。如表1。

對主成分進行定量分析時，要求此方法的RSD在0～3%之間。計算得RSD為0.64%，可以達到定量分析的要求。

2.4 加標回收率測試

取濃度為100ppm的噁蟲威溶液樣品0.8mL，加入濃度為100ppm的噁蟲威殺蟲劑/甲醇標準溶液0.2mL中，形成加標樣進行測定。

表1 精密度分析結果

計算得到加標回收率R=104.1%，符合95%～105%的要求。如表2。

表2 加標回收率分析結果

2.5 噁蟲威殺蟲劑微膠囊有效成分測定

在上述液相色譜條件下，測定噁蟲威殺蟲劑微膠囊有效成分的萃取液，保留時間為2.32min。在相同的高效液相色譜條件下，噁蟲威殺蟲劑標樣、原藥與噁蟲威殺蟲劑微膠囊有效成分萃取液二者保留時間一致。

3 結語

文章建立了一種測定噁蟲威殺蟲劑及其微膠囊有效含量的高效液相色譜方法，采用C18反向色譜柱，以乙腈：水=6:4作為流動相，流速為1.0mL/min，柱溫為35℃，實現了噁蟲威有效成分和其他雜質的有效分離。該液相色譜條件有良好的精密度和回收率，能夠高效、準確地對噁蟲威殺蟲劑及其微膠囊有效成分進行定量分析。