基質金屬蛋白酶9 和凝血酶敏感蛋白1 在亞臨床甲狀腺功能減退癥稽留流產病人絨毛和蛻膜組織中表達的意義

文麗，楊小燕，張桂麗，張漢英

作者單位：深圳市龍華區人民醫院婦科，廣東 深圳518109

亞臨床甲狀腺功能減退癥（Subclinical hypothyroidism，SCH）是由多種原因而引起的甲狀腺激素正常而促甲狀腺激素（Thyroid Stimulating Hormone，TSH）升高［1］。臨床研究顯示，妊娠期間異常升高的TSH會抑制腺垂體的功能，影響性腺軸，減少促性腺激素的分泌，從而影響胎盤的營養代謝，最終會導致稽留流產等［2］。稽留流產是流產疾病中的一種特殊類型，指胚胎停止發育后2 個月尚未能排出體外的現象［3］。研究表明，基質金屬蛋白酶9（Matrix metalloproteinase 9，MMP-9）及凝血酶敏感蛋白1（Thrombospondin 1，TSP-1）的表達與流產密切相關［4-5］。MMP-9是一種細胞外蛋白水解酶，可以降解細胞外基質，研究顯示，MMP-9 可以促進滋養細胞的侵襲，其高表達有利于胚胎著床［6］。TSP-1是一種血管生成抑制劑，在血管完整性和血栓形成中具有重要意義，其表達增加可以抑制血管形成，影響胚胎種植，從而導致稽留流產發生［7］。目前，MMP-9和TSP-1的表達與SCH病人早期稽留流產之間的關系尚不十分清楚，因此，本研究分析了SCH 稽留流產病人絨毛和蛻膜組織中MMP-9 和TSP-1 的表達水平，旨在明確其在SCH稽留流產診斷和預后中的應用價值。

1 資料與方法

1.1一般資料選擇 2017 年 9 月至 2018 年 6 月在深圳市龍華區人民醫院確診的SCH 稽留流產病人25 例，年齡（28.44±4.57）歲，范圍為18～37 歲。納入標準：符合SCH 的診斷標準［8］；符合第9 版《婦產科學》中稽留流產的診斷標準［9］；均為單胎妊娠病人；孕周≤10周；均獲得病人及其近親屬知情同意，本研究符合《世界醫學協會赫爾辛基宣言》相關要求。排除標準：由遺傳、支原體或衣原體感染等因素引起的稽留流產病人；連續自然流產＞2次者；合并明顯肝腎功能不全、心、腦血管疾病者；合并惡性腫瘤者；合并血液或免疫系統疾病者；合并精神系統疾病者。收集同期在該院就診的正常妊娠并自愿行人工流產的25 例早孕SCH 病人作為對照，年齡（28.15±4.43）歲，范圍為18～35歲。

1.2檢測指標標本采集：兩組病人均在其人工流產的同時留取每例病人的絨毛組織及蛻膜組織制備標本，采用0.9%氯化鈉溶液沖洗后放入10%甲醛中固定，制作切片。采用免疫組織化學SP 法檢測絨毛和蛻膜組織中MMP-9 和TSP-1 的表達，依次經二甲苯脫蠟、梯度乙醇脫水后，加3%過氧化氫室溫孵育10 min，進行抗原修復TSP-1，滴加一抗，4 ℃孵育過夜，滴加二抗37 ℃孵育20 min，二氨基聯苯胺顯色，蘇木素復染，常規脫水、透明，中性樹膠封片。

結果判定：細胞質或細胞膜有明顯棕黃色顆粒沉著為陽性表達，顯微鏡下采用隨機數字表法選取10個視野，采用圖像分析系統分析其灰度值。

1.3統計學方法采用SPSS 19.0 軟件進行分析。計量資料均以xˉ±s表示。對計量資料首先進行正態性檢驗，如果兩組均滿足正態性且兩組間方差齊，采用成組t檢驗分析。計數資料均以率（%）表示，采用χ2檢驗進行組間比較。此外，采用受試者工作特征曲線（ROC）分析MMP-9和TSP-1對SCH稽留流產病人的診斷價值，以曲線下面積（AUC）描述之。聯合檢測先采用logistic 分析，再進行ROC 分析。均以P＜0.05表示差異有統計學意義。

2 結果

2.1 SCH稽留流產病人的一般資料SCH 稽留流產病人和SCH 早孕病人的年齡、體質量指數、學歷等一般資料差異無統計學意義（P＞0.05），見表1。

2.2 SCH稽留流產病人絨毛和蛻膜組織中MMP-9和TSP-1的表達與 SCH 早孕組相比，SCH 稽留流產組病人絨毛和蛻膜組織中MMP-9 的表達水平明顯下調（P＜0.05），TSP-1的表達水平明顯上調（P＜0.05），見圖1、表2。

2.3絨毛組織中MMP-9和TSP-1的表達對SCH稽留流產的預測價值絨毛組織中MMP-9、TSP-1以及MMP-9聯合TSP-1預測SCH病人稽留流產的AUC依次為 0.824、0.794 和 0.912；MMP-9 聯合 TSP-1 預測SCH 病人稽留流產的AUC 明顯高于MMP-9 或者TSP-1單獨檢測（P＜0.05），見圖2。詳細參數見表3。

表1 亞臨床甲狀腺功能減退癥（SCH）稽留流產與SCH早孕病人的一般資料/例（%）

表2 亞臨床甲狀腺功能減退癥（SCH）稽留流產與SCH早孕病人絨毛和蛻膜組織中基質金屬蛋白酶9（MMP-9）和凝血酶敏感蛋白1（TSP-1）的表達/xˉ± s

圖2 絨毛組織中基質金屬蛋白酶9（MMP-9）和凝血酶敏感蛋白1（TSP-1）的表達對亞臨床甲狀腺功能減退癥（SCH）稽留流產的預測價值

表3 絨毛組織中基質金屬蛋白酶9（MMP-9）和凝血酶敏感蛋白1（TSP-1）的表達對亞臨床甲狀腺功能減退癥（SCH）稽留流產的預測價值

2.4蛻膜組織中MMP-9和TSP-1的表達對SCH稽留流產的預測價值蛻膜組織中MMP-9、TSP-1 以及MMP-9聯合TSP-1預測SCH病人稽留流產的AUC依次為0.814、0.806和0.915；MMP-9聯合TSP-1預測SCH病人稽留流產的AUC明顯高于MMP-9或者TSP-1單獨檢測（P＜0.05），見圖3。詳細參數見表4。

3 討論

圖3 蛻膜組織中基質金屬蛋白酶9（MMP-9）和凝血酶敏感蛋白1（TSP-1）的表達對亞臨床甲狀腺功能減退癥（SCH）稽留流產的預測價值

表4 蛻膜組織中基質金屬蛋白酶9（MMP-9）和凝血酶敏感蛋白1（TSP-1）的表達對亞臨床甲狀腺功能減退癥（SCH）稽留流產的預測價值

稽留流產是一種妊娠失敗，也稱為過期流產，其病因復雜，包括染色體異常、內分泌異常、免疫功能異常、環境因素影響等［10］。已有研究顯示，妊娠期間的甲狀腺功能異常（SCH、臨床甲減、甲狀腺自身免疫疾病等）均會影響性腺軸，引起性激素分泌異常，影響臨床妊娠結局［11］。張立巖等［12］比較了100 例稽留流產病人和100 例早孕病人的甲狀腺功能，發現甲狀腺過氧化物酶抗體陽性為影響稽留流產的高危因素。甲狀腺過氧化物酶抗體可以抑制甲狀腺激素的合成，增加TSH 的分泌，也是SCH 發生的危險因素［13］。因此，本研究分析了SCH病人中相關分子標志物的表達，旨在為臨床診斷和治療提供依據。本研究中，SCH 稽留流產病人的絨毛組織和蛻膜組織中MMP-9 的表達顯著下調。MMP-9 是MMP 家族的一員，可以降解、重塑細胞外基質中的多種成分，還可以參與細胞基質間的信號傳遞［14］。MMP-9是滋養細胞自分泌的一種重要的酶，可以水解子宮內膜基質成分，包括Ⅳ型和Ⅴ型膠原、明膠等，促進滋養細胞的侵襲能力［15］。臨床研究顯示，在妊娠早期，MMP-9 主要表達于絨毛滋養細胞、蛻膜細胞和腺上皮細胞等，可以降解子宮內膜細胞的基底膜和細胞外基質，促進滋養細胞的侵襲力，有利于胚胎種植［16］。張吟、許小鳳［17］的研究顯示，SCH 孕鼠中核因子-κB 和 MMP-9 的表達顯著下調，血清絨毛促性腺激素、孕酮等的分泌降低，提示MMP-9 的表達可以影響SCH 稽留流產病人的性腺激素水平。劉麗媛等［18］比較了20 例正常妊娠以及20例自然流產病人絨毛組織中MMP-9的表達，發現早期自然流產病人絨毛組織中MMP-9 的表達明顯下降，本研究結果與其基本一致，提示MMP-9 可能通過促進滋養細胞的侵襲，促進胚胎著床。

本研究中，SCH 稽留流產病人的絨毛組織和蛻膜組織中TSP-1 的表達顯著上調。TSP-1 是由機體多種細胞分泌的反向血管生成調節因子，可以與細胞內相應的受體結合，誘導內皮細胞凋亡，抑制血管生成，影響細胞的遷移和黏附［19］。在正常的子宮內膜組織中，TSP-1主要分布于血管內皮細胞、腺上皮細胞等，可以抑制血管形成，減少新生血管，影響胚胎種植［20］。劉梅梅等［21］的研究顯示，絨毛組織中TSP-1的高表達可能通過抑制血管內皮生長因子的分泌，抑制絨毛組織中血管生成，導致流產，提示SCH 病人稽留流產可能與絨毛組織和蛻膜組織中TSP-1 的高表達有關。本研究中，絨毛和蛻膜組織中MMP-9 和TSP-1 的表達均對SCH 病人稽留流產具有一定的預測價值，且絨毛和蛻膜組織中MMP-9和TSP-1的聯合檢測可以顯著提高其對SCH早孕病人稽留流產具有一定的預測價值，提示MMP-9 和TSP-1在SCH早孕病人稽留流產的發生發展中具有重要作用，有望應用于臨床預測稽留流產的發生。

綜上所述，SCH 稽留流產病人的絨毛和蛻膜組織中MMP9 的表達顯著下調，TSP-1 的表達顯著上調，MMP9 聯合 TSP-1 檢測對 SCH 早孕病人稽留流產具有較高的診斷價值，臨床有望作為其診斷與預后標志物。本研究不足之處為樣本量較少，但本研究為SCH 稽留流產病人的診斷和預防提供了一定的理論依據。

（本文圖1見插圖9-3）

圖1 亞臨床甲狀腺功能減退癥（SCH）稽留流產與SCH早孕病人絨毛和蛻膜組織中基質金屬蛋白酶9（MMP-9）和凝血酶敏感蛋白1（TSP-1）的表達（免疫組織化學染色×400）