體外模擬胃腸道對鯽魚卵唾液酸糖蛋白的降解作用

王 婷，田迎櫻，李雪靜，王 菲，王靜鳳,*

（1.中國海洋大學食品科學與工程學院，山東 青島 266003；2.青島海洋生物醫藥研究院，山東 青島 266003）

我國是世界第一水產大國，據2017年中國漁業年鑒統計，我國養殖和捕撈魚類總產量達6 446萬 t[1]。魚類在加工過程中大約會產生30%～50%包括魚卵在內的加工的重要副產物，魚卵中富含多不飽和脂肪酸二十碳五烯酸/二十二碳六烯酸、糖蛋白、卵磷脂等多種功效成分[2-3]。然而目前除少量優質魚卵被用來加工為腌漬魚卵、魚子醬等初級形式食品外，大部分未被高值化利用。造成了資源的嚴重浪費[4-5]。本課題組前期通過追蹤前成骨細胞MC3T3-E1的增殖活性，從14 種水產魚卵中篩選出了一種新型的鯽魚卵唾液酸糖蛋白（sialoglycoproteins ofCarassiusauratuseggs，Ca-SGP)[6]，并闡明了其結構輪廓和生物活性。

Ca-SGP是由分子質量為10.87 kDa的唾液酸糖肽（Ca-SGPP）重復連接而成的，N-糖鏈通過β-N-乙酰氨基葡萄糖連接在肽鏈N端4位的天冬酰胺上，由4 條支鏈構成，各支鏈存在分支鏈結構，其糖鏈末端的唾液酸為Neu5Ac，Neu5Ac通過α(2→3)糖苷鍵連接在糖鏈末端半乳糖上[7]；Xia Guanghua等[8-9]對其活性研究發現Ca-SGP在細胞水平上可以促進前成骨細胞MC3T3-E1增殖、分化和礦化，同時可以抑制破骨細胞的成熟和分化；通過動物實驗發現Ca-SGP可以抑制去卵巢骨質疏松大鼠的骨吸收，減少骨丟失；Mao Lei等[10]發現Ca-SGP可以促進間充質干細胞向成骨細胞轉化；周曉春等[11]發現Ca-SGP對免疫力低下的小鼠具有調節作用；Wang Fei等[12]發現Ca-SGP能夠促進骨質疏松癥型骨折小鼠早期軟骨骨痂的形成、中期軟骨骨痂向骨性骨痂的轉化以及后期骨性骨痂的重建，從而加速骨折愈合。然而，Ca-SGP屬于大分子物質，其如何通過胃腸道被降解并利用仍不清楚。

近年來，體外消化模型因其簡單、廉價、可重復性高、可實現多樣本同時檢測等優點被廣泛應用于藥物劑型分解、營養成分生物利用度、物質消化等研究中[13]。體外胃腸模擬系統能夠有效解決胃腸道消化研究常存在的倫理問題，且廣泛應用于研究機體胃腸道對食物或藥物的消化行為[14-15]。該系統通過調節合適的消化酶濃度、pH值、消化時間、鹽濃度及其他因子，最大程度地模擬體內口腔、胃、小腸及大腸的生理條件。因此，本實驗采用靜態胃腸模擬模型，在體外體系中對Ca-SGP進行胃腸液消化及腸道菌群厭氧發酵，通過對Ca-SGP降解產物的分析探究其在消化道內的降解情況。

1 材料與方法

1.1 動物、材料與試劑

3月齡SPF 級健康雌性Wistar大鼠，體質量（200.0±2.0）g，生產許可證號：SCXK（京）2016-0001，購自北京維通利華實驗動物技術有限公司。

Ca-SGP干粉由中國海洋大學夏光華博士提供。在冰浴條件下迅速取出成熟的雌性鯽魚（Carassius auratus）魚卵，剔除魚卵包膜，然后稱取100 g魚卵用均質機破碎，加入3.8 倍體積的NaCl（0.38 mol/L）溶液，攪拌4.2 h。提取液5 000 r/min離心10 min除雜后，加入等體積的90%苯酚溶液，攪拌2 h。離心得到的上清液用截留分子質量10 kDa的透析袋流水透析3 d，蒸餾水透析1 d。將離心后所得的上清液凍干即制得Ca-SGP粗品。本實驗采用陰離子交換樹脂單步純化Ca-SGP粗品所得，純度為84.6%，含質量分數16.55%的Neu5Ac，分子質量為195.35 kDa，不含磷。Ca-SGP的結構輪廓如圖1所示。

圖 1 Ca-SGP結構輪廓Fig. 1 Structure of Ca-SGP

胃蛋白酶、胰酶、唾液酸標準品（Neu5AC）、葡聚糖標準品 美國Sigma公司；豬膽鹽 上海源葉生物科技有限公司；鄰苯二胺鹽酸鹽 美國BBI公司；乙腈（色譜純）、甲醇（色譜純） 德國Merck公司；牛血清白蛋白、Folin-酚試劑、L-抗壞血酸 上海索萊寶生物科技有限公司；牛肉粉 北京奧博星生物科技有限責任公司；胰蛋白胨 北京雙旋微生物培養基制品廠；其他試劑均為國產分析純。

1.2 儀器與設備

Milli-QSynthesis超純水系統 美國Millipore公司；SHZ-82A數顯氣浴恒溫振蕩器 上海雙捷實驗設備有限公司；1200高效液相色譜儀、ZORBAX SB-C18色譜柱美國Aglient公司；TSK-GELG4000PWxl色譜柱 日本TOSOH公司；BS224S型精密電子天平 北京賽多利斯儀器系統有限公司；UV-2450分光光度計 日本島津公司。

1.3 方法

1.3.1 胃腸液配制

人工胃腸消化液儲備液配制參照Minekus等[16]的方法，具體配方見表1。

表 1 人工胃腸液儲備液配制Table 1 Preparation of simulated gastrointestinal fluids

1.3.2 胃腸消化條件

準確稱取60 mg的Ca-SGP樣品溶于20 mL超純水中。取10 mL樣品水溶液，加入8 mL人工胃液（simulated gastric fluid，SGF）儲備液，用1 mol/L HCl溶液調pH值至2.0。然后加入100 mg胃蛋白酶、5 μL 0.3 mol/L的CaCl2，最后加超純水補至20 mL，作為胃消化組；取10 mL樣品，加入10 mL超純水，作為胃消化對照組；取10 mL超純水，加入8 mL SGF儲備液，調pH值至2.0，加入與胃消化組等量的酶和CaCl2，作為胃消化基質對照組。在37 ℃恒溫振蕩箱內進行消化，消化結束后調pH值至中性滅酶。取胃消化后產物10 mL，加入8 mL人工腸液（simulated intestinal fluid，SIF）儲備液，調pH值至7.0，加入60 mg胰酶、136 mg豬膽鹽、20 μL CaCl2，用超純水補至20 mL，作為腸消化組；取胃消化實驗中的對照組10 mL，加入等體積的水作為小腸消化實驗中的對照組；取胃消化實驗中的基質對照組10 mL，加入與腸消化組等量的SIF儲備液、胰酶、豬膽鹽和CaCl2，作為小腸消化實驗的基質對照組。置于37 ℃恒溫振蕩箱內進行消化，消化結束后煮沸滅酶。

1.3.3 厭氧培養基配制及菌懸浮液制備

厭氧培養基參照Zhou Jing等[17]的方法進行配制。取37.5 mL A溶液（含1.18%（質量分數，下同）NaCl、0.47% KH2PO4、0.12% CaCl2、1.2% (NH4)SO4、0.25% MgSO4· H2O）、37.5mL溶 液B（0.78% K2HPO4）、2 mLL-抗壞血酸（25%）、0.5gL-半胱氨酸、2 mL Na2CO3（8%）、1 g牛肉粉、1 g胰蛋白胨，加超純水補至1 L。用1 mol/L NaOH溶液調pH值至7.5～8.0，隨后加入0.05gL-半胱氨酸鹽酸鹽。無菌條件下取出健康大鼠的結腸內容物，稱取1.0 g內容物于離心管中，加入10 mL無菌0.1 mol/L磷酸鹽緩沖液，靜置片刻，用無菌槍頭搗碎，充分漩渦振蕩。懸濁液在1 500 r/min條件下離心5 min，取上清液置于新管中再次離心，重復2 次，得腸道菌懸液（現用現配）。

1.3.4 腸道菌群發酵條件

在厭氧管中充入高純N2，加入5 mL培養基，加塞密封，121 ℃條件下高壓滅菌。用無菌的磷酸鹽緩沖液配制質量濃度為15 mg/mL的Ca-SGP溶液，過0.45 μm無菌水系濾膜。在無菌操作臺上用1 mL的注射器在裝有培養基的各厭氧管管內分別注入0.5 mL樣品和0.5 mL菌懸液。將各厭氧管置于37 ℃恒溫振蕩箱分別發酵0、6、12、24 h和48 h。發酵結束后，立即放在-80 ℃冰箱內終止反應。

1.3.5 消化樣品分子質量測定

取適量消化后的樣品，過0.45μm 水系濾膜，采用高效空間排阻色譜法（high-performance sizeexclusion chromatography，HPSEC）測定樣品的分子質量。采用分子質量為5、12、50、270 kDa的葡聚糖作為標準品，以保留時間為橫坐標，以分子質量的對數值為縱坐標，繪制標準曲線。HPSEC條件為：色譜柱：TSK-GELG4000PWxl（30 cm×7.8 mm，10 μm）；流動相：0.2 mol/L NaCl溶液；流速：0.5 mL/min；進樣量：20 μL；柱溫：25 ℃；檢測器：示差檢測器和紫外檢測器（230 nm）。

為排除酸性條件（pH 2）電解質對Ca-SGP分子質量的影響，將Ca-SGP分別于pH 2.0的樣品水溶液、儲備液（加入0.3 mol/L CaCl2）中消化6 h，檢測消化后產物的分子質量。

1.3.6 消化樣品還原糖質量濃度測定

采用3,5-二硝基水楊酸（3,5-dinitrosalicyclic acid，DNS）法測定消化后樣品的還原糖質量濃度。分別取0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2 mL葡萄糖標準液（1 mg/mL）于試管中，用蒸餾水補齊至2 mL；消化后樣品用蒸餾水5 倍體積稀釋。各管加入1.4 mL的DNS試劑，搖勻，沸水浴中準確加熱5 min，取出，冰浴冷卻至室溫，用蒸餾水定容至25 mL，加塞混勻，于540 nm波長處測定吸光度。

1.3.7 消化樣品唾液酸質量分數測定

將消化后的樣品用8 kDa的透析袋透析3 d，每6 h換一次水。取1 mL透析后的樣品，加入1 mL 0.5 mol/L的NaHSO4，在80 ℃水浴鍋中水解30 min，冷卻。將Neu5Ac標準品用超純水配成500 μg/mL的儲備液，然后梯度稀釋成500、200、100、10、1 μg/mL的標準體系。然后取1 mL標準溶液和酸解后的樣品溶液，加入1 mL的20 mg/mL鄰苯二胺鹽酸鹽0.25 mol/L的NaSO4溶液配制），在80 ℃水浴鍋中衍生40 min，冷卻后過無菌0.22 μm的濾膜，置于4 ℃冰箱中保存。然后采用高效液相色譜（high performance liquid chromatography，HPLC）法測定樣品消化后剩余唾液酸的含量。HPLC色譜條件：色譜柱：ZORBAX SB-C18柱（150 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相：1.0%四氫呋喃溶液（含0.2%磷酸）-乙腈（98∶2，V/V）；流速：1 mL/min；進樣量：20 μL；柱溫：35 ℃；檢測器：二極管陣列檢測器（227 nm）。

1.3.8 消化樣品蛋白質量濃度測定

采用Folin-酚法測定胃腸消化后的蛋白質量濃度。稱取10 g Na2CO3、2 g NaOH、0.25 g酒石酸鉀鈉，用蒸餾水定容至500 mL，作為A液；稱取0.5 g CuSO4·5H2O，用蒸餾水定容至100 mL，作為B液。試劑A和B以50∶1（V/V）混勻，得到試劑甲。試劑乙為Folin-酚試劑。配制250 μg/mL的牛血清白蛋白作為標準物質，分別取0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mL，加水補足至1 mL；消化后的樣品經8 kDa透析袋透析后，取1 mL。各濃度的標準物質和樣品分別加入5 mL試劑甲，混勻，室溫靜置10 min。再加入0.5 mL試劑乙，迅速漩渦混勻，室溫靜置30 min，于650 nm波長處測定吸光度。

1.4 數據統計分析

2 結果與分析

2.1 Ca-SGP最適胃腸消化時間的確定

為了確定胃消化的最適時間，首先將胃消化時間設置為2、4、6 h，采用HPSEC法檢測胃消化不同時間后分子質量的變化。如圖2A所示，胃消化基質液的出峰時間與樣品水溶液的出峰時間不一致，表明胃消化基質液對樣品分子質量變化無干擾。如圖2B所示，與對照組相比，胃消化后樣品峰右移，說明樣品的分子質量減小，且在6 h偏移最大。

取胃消化6 h后的樣品進行下一步的小腸消化，同時設置小腸消化時間為2、4、6 h，采用HPSEC法檢測小腸不同消化時間后分子質量的變化。如圖3A所示，小腸消化基質液的出峰時間與樣品水溶液的出峰時間不一致，可排除胃消化基質液對樣品分子質量變化的干擾。如圖3B所示，與對照組相比，小腸消化后樣品峰右移，說明樣品的分子質量減小，在2 h偏移最大且再延長小腸消化時間分子質量基本不變。綜上所述，胃消化最適時間為6 h，小腸消化最適時間為2 h。

圖 2 Ca-SGP在胃消化2、4、6 h后分子質量的變化Fig. 2 Change in olecular mass of Ca-SGP after gastric digestion for 2, 4 and 6 h

圖 3 Ca-SGP在小腸消化2、4、6 h后分子質量的變化Fig. 3 Change in molecular mass of Ca-SGP after intestinal digestion for 2, 4 and 6 h

2.2 胃腸消化對Ca-SGP分子質量的影響

采用HPSEC法測定胃消化后產物的分子質量。如圖4A所示，經胃消化6 h后，樣品峰右移，Ca-SGP分子質量由（194.78±10.31）kDa減小到（155.00±13.59）kDa，說明胃對Ca-SGP有一定的消化作用。將Ca-SGP的胃消化產物進行小腸消化2 h，如圖4B所示，Ca-SGP的胃消化產物經小腸消化后，分子質量進一步減小，平均減小到（38.94±2.26）kDa，說明小腸對Ca-SGP有較明顯的消化作用。

圖 4 胃腸消化對Ca-SGP分子質量的影響Fig. 4 Effect of gastric and intestinal digestion on molecularmass of Ca-SGP

圖 5 pH值和電解質對Ca-SGP消化的影響Fig. 5 Effect of pH and electrolytes on the digestion of Ca-SGP

有研究表明，pH值和鹽類會造成大分子的解聚和斷裂[18]。為了研究pH值對Ca-SGP分子質量的影響，在不加入消化酶的情況下，將Ca-SGP置于pH 2.0的樣品水溶液中消化6 h，采用HPSEC法測定消化后產物的分子質量。如圖5所示，與樣品水溶液相比，Ca-SGP在pH 2.0的條件下消化后的分子質量并沒有發生改變。為了研究鹽類對Ca-SGP分子質量的影響，將Ca-SGP于鹽溶液中消化6 h，檢測消化后產物的分子質量，如圖5所示，與樣品水溶液相比，Ca-SGP在鹽溶液中消化6 h后產物分子質量并沒有發生變化。因此，pH值和電解質對Ca-SGP在胃腸消化無影響，說明Ca-SGP分子質量的減小是因為消化酶的作用。

2.3 胃腸消化對Ca-SGP蛋白質量濃度的影響

Ca-SGP中含有14.33%的蛋白，采用Folin-酚法檢測了胃和小腸消化后樣品中蛋白質量濃度的變化。如圖6所示，與對照組相比，消化后樣品的蛋白質量濃度無顯著降低，推測胃和小腸對Ca-SGP的蛋白部分無消化作用。但不排除是因為消化液中大量蛋白酶的存在使消化前后樣品的蛋白質量濃度變化被掩蓋。

圖 6 胃腸消化對Ca-SGP蛋白質量濃度的影響Fig. 6 Effect of gastric and intestinal digestion on protein content of Ca-SGP

2.4 胃腸消化對Ca-SGP還原糖質量濃度的影響

圖 7 胃腸消化對Ca-SGP還原糖質量濃度的影響Fig. 7 Effect of gastric and intestinal digestion on reducing sugar content of Ca-SGP

多糖易在水相體系中形成聚合物，有時很難區分聚合物分子質量的改變是由于聚合物的解聚還是由于分子鏈共價鍵的斷裂[19]。若分子質量的降低是由于糖苷鍵斷裂引起，則還原末端的量將增加[20]，因此采用DNS法測定了Ca-SGP經胃腸消化后還原糖的變化。如圖7所示，胃消化6 h后，還原糖質量濃度極顯著增加，小腸繼續消化2 h后，還原糖質量濃度進一步增加，因此，推測Ca-SGP經胃腸消化后分子質量的減小是糖苷鍵的斷裂所致。

2.5 胃腸消化對Ca-SGP唾液酸質量分數的影響

胃腸消化酶理論上可以消化α-糖苷鍵，Ca-SGP糖鏈末端的Neu5Ac以α(2→3)糖苷鍵連接在半乳糖上。為了研究胃腸消化對唾液酸的影響，采用HPLC-UV法檢測Ca-SGP經胃腸消化后唾液酸質量分數的變化。如圖8所示，與對照組相比，Ca-SGP經胃消化后，唾液酸有部分丟失且質量分數降低17.53%（P＜0.05），小腸消化后唾液酸大量丟失，質量分數降低71.94%（P＜0.01）。因此，胃腸消化能夠使Ca-SGP上的唾液酸脫落。由Ca-SGP的N-糖鏈的結構輪廓（圖9）可知，糖鏈的支鏈與主鏈之間以α(1→3)糖苷鍵連接，也容易受到胃腸酶的作用，因此，被消化下來的Neu5Ac是游離的、帶支鏈的，還是兩者均有仍需進一步探討。

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圖 8 胃腸消化對Ca-SGP唾液酸質量分數的影響Fig. 8 Effect of gastric and intestinal digestion on Neu5Ac content of Ca-SGP

圖 9 Ca-SGP的N-糖鏈結構輪廓Fig. 9 Structure of N-glycan chain of Ca-SGP

2.6 發酵過程中Ca-SGP分子質量的變化

上述結果發現，Ca-SGP經胃和小腸消化后分子質量減小，其Ca-SGP糖鏈末端的Neu5Ac可以被脫除。然而Ca-SGP的糖鏈大多以β-糖苷鍵連接，胃腸消化酶只能作用于α-糖苷鍵，因此Ca-SGP會進入大腸進行下一步的降解。使用健康小鼠的腸道菌懸液對Ca-SGP進行厭氧發酵，采用HPSEC法分別檢測了發酵0、6、12、24、48 h后Ca-SGP的分子質量，如圖10所示，隨著發酵時間的延長，樣品峰不斷右移且峰值下降，說明Ca-SGP的分子質量減小且含量降低。提示腸道菌群可以降解Ca-SGP，并同時利用其降解產物。如圖11定量結果顯示，經過48 h發酵后，Ca-SGP分子質量由195.69 kDa降到34.77 kDa。

圖 10 發酵不同時間后Ca-SGP的分子質量變化Fig. 10 Change in molecular mass of Ca-SGP after fermentation for different periods

圖 11 發酵不同時間后Ca-SGP的分子質量Fig. 11 Change in molecular mass of Ca-SGP after fermentation for different durations

2.7 發酵過程中Ca-SGP還原糖質量濃度和pH值的變化

圖 12 發酵不同時間后Ca-SGP的還原糖質量濃度和pH值變化Fig. 12 Change in reducing sugar content of Ca-SGP and change in pH after fermentation for different durations

采用DNS法測定了Ca-SGP經發酵后還原糖的變化，如圖12所示，Ca-SGP經腸道菌群發酵后，還原糖質量濃度隨發酵時間的延長而不斷降低。還原糖質量濃度沒有因糖鏈的裂解而升高，說明Ca-SGP能夠不斷被微生物發酵并且利用。

pH值的變化可作為發酵過程中的指示劑，用pH計檢測了發酵0、6、12、24、48 h后溶液的pH值。如圖12所示，溶液最初的pH值為7.77，呈弱堿性，隨著發酵時間的延長，pH值不斷降低，48 h后降到6.26，呈現弱酸性。有研究表明pH值的降低是由多糖發酵引起的，與短鏈脂肪酸的產生有關[21-22]。因此，推測本研究中pH值的降低是由腸道菌群發酵利用Ca-SGP，產生短鏈脂肪酸等酸性物質引起的。

3 討 論

本實驗在體外水平對鯽魚卵唾液酸糖蛋白的胃腸和菌群發酵的降解產物進行了研究。結果表明，胃腸液對Ca-SGP有一定的降解作用，Ca-SGP糖鏈末端的活性因子唾液酸能夠在胃腸消化酶的作用下發生脫落；大腸腸道菌群能夠進一步降解Ca-SGP并利用其降解產物。

本研究中，Ca-SGP經歷胃和小腸消化后分子質量減小，推測胃和小腸消化后Ca-SGP的蛋白鏈和糖鏈發生變化。由2.3節可知，Ca-SGP經胃和小腸消化后蛋白質量濃度無顯著降低，推測胃和小腸對Ca-SGP的蛋白部分無消化作用。靜態胃腸模擬模型中參與消化蛋白質的是胃蛋白酶和胰蛋白酶，胃蛋白酶優先作用于酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、亮氨酸殘基所組成的肽鍵[23]，胰蛋白酶專一作用于精氨酸及賴氨酸殘基所組成的肽鍵[24]。Ca-SGP含有天冬氨酸/天冬酰胺、蘇氨酸、絲氨酸、谷氨酸、丙氨酸、甘氨酸、脯氨酸8 種氨基酸，氨基酸殘基數目之比約為2∶2∶1∶2∶1∶1∶1[25]。Ca-SGP經過胃消化后蛋白質含量變化不大，推測是因為Ca-SGP的蛋白鏈上連接了大量的糖鏈，阻礙了胃蛋白酶的作用位點，且Ca-SGP不含胃蛋白酶優先作用的氨基酸殘基形成的肽鍵。將胃消化產物進行下一步的小腸消化后蛋白質的變化不大，說明胰蛋白酶對Ca-SGP中的蛋白質無消化作用，推測是因為Ca-SGP不含胰蛋白酶作用的氨基酸殘基形成的肽鍵。此外Ca-SGP的蛋白質量分數為14.33%，因體外胃腸模擬模型中存在大量的胃蛋白酶和胰蛋白酶，故并不能排除實驗模型本身對樣品蛋白質變化的干擾。

Ca-SGP經歷胃和小腸消化后分子質量減小，推測是因為糖苷鍵的斷裂。胃和小腸消化后還原糖質量濃度的增加進一步證明了上述推測。在Ca-SGP的糖鏈中，末端的Neu5Ac以α(2→3)糖苷鍵連接在半乳糖上，支鏈與主鏈之間以α(1→3)糖苷鍵連接，這兩處連接位點可能受到消化酶的作用。胃和小腸消化后Neu5Ac的含量減少約71%，說明末端Neu5Ac可以被脫除。前期研究結果顯示，小鼠單次灌胃Ca-SGP后0.5 h內，Neu5Ac可快速進入小腸腸壁，質量分數達到峰值，血清中Neu5Ac的質量分數自灌胃后持續增加，并在5 h時達到峰值。提示Ca-SGP的活性因子Neu5Ac可以被小腸吸收，進入血液循環[26]。小腸消化后，Ca-SGP的分子質量大幅度減小，推測主鏈與支鏈之間的糖苷鍵也會發生斷裂，因此Ca-SGP的糖鏈在經歷胃和小腸消化后產生的碎片可能包括主鏈、支鏈、Neu5Ac、支鏈+Neu5Ac。Wang Cong等[27]發現體內內源性蛋白酶（唾液酸酶、胰蛋白酶）只能消化殼聚糖中的α-糖苷鍵，對β-糖苷鍵幾乎不能分解或者少量分解。因Ca-SGP的糖鏈大多以β-糖苷鍵連接，受限于胃腸道的消化，因此會進入大腸受到腸道菌群的降解和發酵。在體外模擬腸道菌群發酵時，由于培養基的消耗及代謝產物的積累，細菌不能長期生長，因此通常不宜超過48 h[28]。本研究將發酵時間設置為0、6、12、24 h和48 h，發現隨著發酵的不斷進行，Ca-SGP的分子質量和水平均不斷減小，且還原糖質量濃度及pH值呈現不斷降低的趨勢，說明腸道菌群在裂解Ca-SGP的同時利用了其降解產物。這一研究結果與秦清娟等[29]發現腸道菌群能夠降解并利用魔芋葡甘低聚糖相似。

綜上所述，胃腸液對Ca-SGP有一定的消化作用，胃腸消化酶能夠使Ca-SGP糖鏈上的唾液酸脫落。大腸腸道菌群能夠裂解Ca-SGP并利用其降解產物。本實驗在體外水平上研究了Ca-SGP在胃腸和腸道菌群的降解作用，為深入探索Ca-SGP作用機理提供了理論支撐。