ATP生物熒光法在達芬奇機械臂清洗效果檢測中的應用

莫軍軍,黃 芳，沈紅梅,王 群,呂 蓓

浙江大學醫學院附屬第一醫院,浙江杭州 310003

達芬奇機器人手術系統是近年來快速發展的一項外科微創新技術，是傳統腹腔鏡手術的延伸和突破[1]，已在泌尿外科、心胸外科和婦產科等多個專科領域廣泛應用，被譽為微創外科領域的“革命性”進步[2]。機器人手術器械精密度高、功能復雜、成本昂貴，在清洗與消毒過程中出現任何失誤和疏漏都可能影響手術實施，造成嚴重后果[3]。因此，機器人手術器械的清洗消毒質量成為消毒部門面臨的重要課題[4]。目前臨床采用10倍放大鏡目測法檢測機器人手術器械的清洗消毒質量，但檢測過程存在很大的主觀性和隨意性，數據缺乏科學性和嚴謹性。三磷酸腺苷(ATP)生物熒光法是一種基于生物熒光反應，使用生物熒光光度計檢測微生物等有機體中的ATP含量，從而評估器械等物品潔凈度的方法，檢測完畢可立即獲取結果，操作快速便捷。殘留蛋白檢測法是基于雙縮脲反應原理，使用Pro-tect蛋白清洗測試棒和培養器，通過顏色的變化來評估器械清洗后表面蛋白質的殘留量，但每次培養觀察需耗時45 min，操作相對較麻煩。為了科學地評價達芬奇機械臂的清洗質量，浙江大學醫學院附屬第一醫院消毒供應中心(CSSD)分別采用了10倍放大鏡目測和ATP生物熒光法對達芬奇機械臂清洗質量進行檢測，當兩種檢測結果不一致時采用殘留蛋白檢測法進行檢測判斷。現將結果報道如下。

1 材料與方法

1.1 材料和工具

達芬奇機器人手術使用后的機械臂(SI型號)，各種型號的專用小毛刷、機械臂專用灌流管、3M70508全效多酶清洗劑、壓力氣槍、帶自動灌流器的多功能清洗工作站、超聲波清洗機、純化水制水設備、放大鏡(10倍)、3M ATP光度計和測試棒、一次性注射器(50 ml)若干、無菌等滲鹽水、無菌集水杯若干，3M Pro-tect蛋白清洗測試棒，3M蛋白殘留培養器。

1.2 方法

用便利抽樣方法抽取泌尿外科前列腺手術后機器人機械臂15套，每套次再用便利抽樣方法抽取機械臂4把(電凝剪、電凝鉤、針持、無損傷鉗各1把)，機械臂手工結合超聲波清洗后，采用10倍放大鏡目測和ATP生物熒光法兩種方法檢測清洗效果，當兩種檢測結果不一致時，采用殘留蛋白檢測法進行判斷。

1.2.1放大鏡目測檢查

達芬奇機械臂清洗完畢，由經專業培訓考核合格的護士使用10倍放大鏡對機械臂的各個部位進行清洗質量檢查，尤其是齒縫和關節處，若器械無血漬、污漬、銹斑、水垢，外觀清潔光亮者為清洗質量檢查合格；否則為不合格。

1.2.2ATP生物熒光法檢測

達芬奇機械臂放大鏡目測檢查后，由同一名護士采用3M ATP光度計和測試棒采樣和檢測。方法：第一步器械表面采樣，護士使用表面測試棒拭子在器械臂表面仔細涂擦取樣，包括機械臂頭端咬合面、銷軸關節處和機械臂腕部，各部位分別用力來回旋轉涂擦2遍，將拭子放回試管并震蕩5 s；放入光度計內，直接讀取數據并記錄。第二步管腔內部檢測采樣，通過灌流的方式使用水質采樣棒采樣。方法：用50 ml注射器從主沖洗口處注入40 ml無菌等滲鹽水，沖洗機械臂管腔內壁，出水口用無菌集水杯收集沖洗液，用水質采樣棒在沖洗液中停留5 s進行采樣，將拭子放回試管，按下拭子并震蕩5 s；放入光度計內，直接讀取數據并記錄。3M ATP生物熒光儀說明書推薦相對光單位(RLU)值≤150作為器械表面清洗合格的判定標準；推薦RLU值≤200作為管腔內清洗合格的判定標準，機械臂表面或管腔內只要有一處超過上述標準，就判定此機械臂為清洗不合格。

1.2.3殘留蛋白檢測法

對放大鏡目測檢查合格、ATP生物熒光法檢測不合格的機械臂采用殘留蛋白檢測法判斷。方法：由同一名護士采用3M Pro-tect蛋白清洗測試棒進行檢測。先從測試管中取出測試棒，點4滴專用的采樣液濕潤測試棒采樣部位，然后將測試棒在機械臂頭端咬合面和銷軸關節處、機械臂腕部保護套正面和背面縫隙處，分別用力來回旋轉涂擦2遍，將測試棒插回測試管內，用力按壓，然后快速震蕩最少5 s；將測試管放入37℃培養器內進行培養，45 min后觀察測試管中液體的顏色變化。對照測試管上的標準色，顏色保持淺綠色不變為陰性，表示清洗合格；顏色變為灰色或紫色為陽性，表示蛋白質殘留，需要重新清洗。

1.3 統計學方法

所獲數據輸入Minitab統計軟件進行分析和處理，計數資料用百分數表達，采用Fisher精確檢驗和x2檢驗進行計數資料的比較，以P<0.05表示差異有統計學意義。

2 結果

達芬奇機械臂清洗后兩種檢測效果的比較見表1，兩種檢測法合格率比較差異有統計學意義(P<0.05)。60件機械臂放大鏡目測檢查其中有3件不合格，采用ATP生物熒光法檢測中有13件清洗不合格，故50件機械臂兩種檢查方法結果一致，另有10件機械臂兩種檢測結果不一致,進一步采用殘留蛋白清洗測試棒檢測，結果殘留蛋白檢測法檢測均為不合格。

表1 達芬奇機械臂清洗后兩種檢測效果的比較(n=60) 件(%)

3 討論

現代醫療器械的結構越來越復雜，精細化程度越來越高，給清洗和清洗效果評價帶來挑戰[5]。臨床上對達芬奇機械臂清洗質量評價多采用放大鏡目測法進行評價，雖然該方法具有操作簡單、成本低廉等優勢，是醫療器械清洗質量的常用檢測方法之一，但此方法對于結果的判斷存在較大的人員主觀性，且沒有明確的可量化評價指標，同時對于帶管腔等結構復雜器械無法觀察到管腔內部的清洗質量。消毒供應中心行業標準明確指出，器械清洗質量的日常檢測應目測和(或)借助帶光源放大鏡檢查；清洗效果評價，可定期采用定量檢測的方法，對器械和物品的清洗效果進行評價[6]。ATP是一種在所有動物、植物、細菌、真菌、酵母菌等活細胞中均存在的能量單位，ATP生物熒光法可以檢測被測物體的生物負載量[7-8]。國內外均有研究表明，ATP生物熒光法可用于評估物體表面、醫療器械和手衛生清潔效果[9-11]。為此，本研究將ATP生物熒光法應用于達芬奇機械臂清洗質量評價中，即考慮可量化評價，又兼顧了采樣方法(器械表面采樣、管腔內部采樣)，從而客觀定量檢測殘留物的量，進而降低人為主觀判斷的影響。本研究結果顯示，60件機械臂放大鏡目測法檢查清洗合格率為95.00%，ATP生物熒光法檢測清洗合格率為78.33%，兩種檢測法合格率比較差異有統計學意義(P<0.05)，對兩種檢測結果不一致的10件機械臂采用殘留蛋白檢測法進一步檢測，結果殘留蛋白檢測均為不合格，再次證明了ATP生物熒光法檢測達芬奇機械臂清洗效果較10倍放大鏡目測法更客觀、有效。但ATP生物熒光檢測法因其所需的成本比較高,故不能被推廣到每件器械的常規檢測中,只適用于清洗效果的定期監測, 以便于指導臨床及時調整清洗流程，從而總結和改進器械清洗方法。