HPLC-柱后光化學(xué)衍生法檢測(cè)芝麻醬中黃曲霉毒素B1

基金項(xiàng)目：山西省青年科學(xué)研究項(xiàng)目（202203021212443）。

作者簡(jiǎn)介：李二冬（1989—），男，山西孝義人，碩士，工程師。研究方向：食品檢測(cè)。

摘 要：本文建立了HPLC-柱后光化學(xué)衍生-熒光檢測(cè)器測(cè)定芝麻醬中黃曲霉毒素B1的方法。結(jié)果表明，黃曲霉毒素B1在0.077 4～1.934 5 ng·mL-1線性關(guān)系良好，線性系數(shù)為0.999 9，加標(biāo)回收率為100.81%～105.46%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.48%，定量限為0.029 μg·kg-1，檢出限為0.01 μg·kg-1。該方法的前處理過程簡(jiǎn)單方便，結(jié)果準(zhǔn)確，可用于芝麻醬中黃曲霉毒素B1的批量快速檢測(cè)。

關(guān)鍵詞：高效液相色譜法；黃曲霉毒素B1；芝麻醬

Determination of Aflatoxin B1 in Sesame Paste by HPLC-Post-Column Photochemical Derivatization

LI Erdong

（Shanxi Inspection and Testing Center （Shanxi Institute of Standardization and Metrology Technology），

Taiyuan 030032， China）

Abstract： A method for the determination of aflatoxins B1 in tahini paste by HPLC-post column photochemical derivation-fluorescence detector was developed. The results showed that aflatoxins B1 had a good linear relationship between 0.077 4 ng·mL-1 and 1.934 5 ng·mL-1， the linear coefficient was 0.999 9， the standard recovery was 100.81%～105.46%， relative standard deviation was 0.48%， and the limit of quantition was 0.029 μg·kg-1. The detection limit was 0.01 μg·kg-1. The pretreatment process of this method is simple and convenient， the result is accurate， and it can be used for batch rapid detection of aflatoxin B1 in tahini paste.

Keywords： high performance liquid chromatography; aflatoxin B1; Sesame paste

黃曲霉毒素B1（Aflatoxin B1，AFB1）是一種真菌次級(jí)代謝物，能使人體或動(dòng)物的免疫功能喪失，對(duì)人體和動(dòng)物具有強(qiáng)烈致畸、致癌和致突變作用[1-4]。

近年來，芝麻醬的銷售量逐漸攀升，而在市場(chǎng)上出現(xiàn)并使用的芝麻醬有的出自正規(guī)食品廠商，有的出自小手工作坊，質(zhì)量參差不齊，有檢出AFB1的風(fēng)險(xiǎn)。因此，檢測(cè)芝麻醬中的AFB1就非常必要[5-8]。《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品中黃曲霉毒素B族和G族的測(cè)定》（GB 5009.22—2016）（第三法）[9]中規(guī)定了高效液相色譜-柱后衍生法測(cè)定黃曲霉毒素的方法。基于此，本研究參照GB 5009.22—2016建立了HPLC-柱后光化學(xué)衍生，經(jīng)熒光檢測(cè)器測(cè)定芝麻醬中AFB1的分析方法。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

某品牌芝麻醬，購自某超市。

黃曲霉毒素B1標(biāo)準(zhǔn)品（96.726 μg·mL-1），A Chemtek Inc；氯化鈉、磷酸二氫鉀和磷酸氫二鈉均為分析純，國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；甲醇，乙腈均為色譜純，迪馬科技；實(shí)驗(yàn)用水為超純水。

1.2 儀器與設(shè)備

LC-20A高效液相色譜儀（配備熒光檢測(cè)器），日本島津公司；XS204電子天平（精度0.1 mg），梅特勒托利多公司；MS105DU電子天平（精度

0.01 mg），梅特勒托利多公司；Mili-Q超純水機(jī)；超聲波清洗機(jī)，蘇州納森超聲科技有限公司；免疫親和柱，北京美正公司；0.45 μm微孔濾膜。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

（1）標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液的配制。取經(jīng)校準(zhǔn)的10 mL容量瓶，準(zhǔn)確吸取黃曲霉毒素B1標(biāo)準(zhǔn)品0.1 mL于其中，用甲醇定容至刻度，配制成黃曲霉毒素B1標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液（967.26 ng·mL-1）。

（2）標(biāo)準(zhǔn)中間液配制。取經(jīng)校準(zhǔn)的10 mL容量瓶，準(zhǔn)確吸取黃曲霉毒素B1標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液0.5 mL于其中，用甲醇定容至刻度，配制成黃曲霉毒素B1標(biāo)準(zhǔn)中間液（48.363 ng·mL-1）。

（3）標(biāo)準(zhǔn)使用液配制。取經(jīng)校準(zhǔn)的25 mL容量瓶，準(zhǔn)確吸取黃曲霉毒素B1標(biāo)準(zhǔn)中間液1 mL于其中，用甲醇定容至刻度，配制成為黃曲霉毒素B1標(biāo)準(zhǔn)使用液（1.934 5 ng·mL-1）。

（4）標(biāo)準(zhǔn)工作液配制。分別精密移取黃曲霉毒素B1標(biāo)準(zhǔn)使用液0.20 mL、0.25 mL、1.00 mL、

2.00 mL、3.75 mL和5.00 mL于5 mL容量瓶中，用流動(dòng)相定容，得到濃度分別為0.077 4 ng·mL-1、

0.096 7 ng·mL-1、0.386 9 ng·mL-1、0.773 8 ng·mL-1、

1.450 9 ng·mL-1和1.934 5 ng·mL-1的系列標(biāo)準(zhǔn)工作液。

1.3.2 試樣處理過程

取50 mL具塞離心管，準(zhǔn)確稱取質(zhì)量約5 g（精確到0.001 g）的試樣于其中，加20 mL 70%甲醇，渦旋混勻，于搖床振蕩20 min，用玻璃纖維濾紙過濾，過濾后取上清液備用。

準(zhǔn)確吸取上述過濾后的上清液4 mL于50 mL具塞離心管中，加入23 mL PBS溶液后搖勻。將在低溫下保存的免疫親和柱放至室溫，棄去小柱內(nèi)的液體，再將加入PBS溶液的全部樣液分批次全部通過免疫親和柱，再用20 mL水淋洗親和柱，抽干親和柱，最后取下親和柱后加入2 mL甲醇洗脫，將洗脫液全部收集在試管中。用氮吹儀在50 ℃條件下將試管中的試液吹至近干后加入1 mL初始流動(dòng)相，渦旋30 s，過0.45 ?m微孔濾膜，上機(jī)檢測(cè)。

1.4 液相色譜條件

色譜柱：CAPCELL PAK C18（150 mm×4.6 mm，5 μm）；檢測(cè)器：熒光檢測(cè)器；激發(fā)波長：360 nm；發(fā)射波長：440 nm；流動(dòng)相：甲醇+乙腈（50+50）∶水=35∶65，等度洗脫；流速：1 mL·min-1；柱溫：40 ℃；進(jìn)樣量：50 μL。

2 結(jié)果與分析

2.1 線性考察

分別將系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液按照1.4條件上機(jī)，以黃曲霉毒素B1濃度（x）為橫坐標(biāo)，測(cè)得的相應(yīng)色譜峰峰面積（y）為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線，得到曲線方程為y=232 398x+664.66，R2=0.999 9。結(jié)果表明，黃曲霉毒素B1在0.077 4～1.934 5 ng·mL-1呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系。

2.2 準(zhǔn)確性與精密度

分別準(zhǔn)確稱取9份陰性芝麻醬樣品約5 g，編號(hào)為1～9，向1～3號(hào)試樣中準(zhǔn)確添加0.25 mL濃度為1.934 5 ng·mL-1的黃曲霉毒素B1標(biāo)準(zhǔn)使用液，4～6號(hào)試樣中添加0.5 mL濃度為1.934 5 ng·mL-1的黃曲霉毒素B1標(biāo)準(zhǔn)使用液，7～9號(hào)試樣中添加2.5 mL濃度為1.934 5 ng·mL-1的黃曲霉毒素B1標(biāo)準(zhǔn)使用液，按照1.3.2所述過程對(duì)樣品進(jìn)行前處理操作，按照1.4條件進(jìn)行上機(jī)，可計(jì)算出該方法的加標(biāo)回收率。由表1可知，芝麻醬中AFB1的回收率為100.81%～105.46%。

將添加2.5 mL濃度為1.934 5 ng·mL-1的黃曲霉毒素B1標(biāo)準(zhǔn)使用液的9號(hào)樣品上機(jī)平行測(cè)定6次，考察精密度。由表2可知，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.48%。由此可見，該方法的準(zhǔn)確性和精密度均符合《實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制規(guī)范 食品理化檢測(cè)》（GB/T 27404—2008）[10]的規(guī)定，適用于芝麻醬中黃曲霉毒素B1的測(cè)定。

2.3 檢出限和定量限

準(zhǔn)確稱取5 g陰性芝麻醬樣品，加入0.08 mL濃度為1.934 5 ng·mL-1的黃曲霉毒素B1標(biāo)準(zhǔn)溶液，按照1.3.2所述方法進(jìn)行樣品前處理，并上機(jī)測(cè)定，色譜峰響應(yīng)值大于3倍信噪比，由此可計(jì)算出檢出限為0.029 μg·kg-1。方法的定量限為0.01 μg·kg-1。

3 結(jié)論

本研究參照GB 5009.22—2016建立了HPLC-柱后光化學(xué)衍生-熒光檢測(cè)器測(cè)定芝麻醬中黃曲霉毒素B1的方法，經(jīng)驗(yàn)證，使用批次的免疫親和柱能實(shí)現(xiàn)對(duì)黃曲霉毒素B1的有效分離，經(jīng)熒光檢測(cè)器可以進(jìn)行高靈敏度的定性定量。通過驗(yàn)證，發(fā)現(xiàn)此方法有著良好的線性關(guān)系，準(zhǔn)確性和精密度也符合相關(guān)規(guī)定要求，檢出限和定量限也滿足相關(guān)檢測(cè)要求，可用于快速批量檢測(cè)芝麻醬中黃曲霉毒素B1。

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