HIV感染者血液T淋巴細胞亞群表達水平的變化及其臨床意義

郭蕊，戴同欣，錢宏波

西安市第八醫院檢驗科，陜西 西安 710061

人類免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus，HIV)感染會導致人體免疫系統受損，免疫功能異常，進而使患者極易出現各種機會性感染的臨床綜合征，這種獲得性免疫缺陷綜合征被稱為艾滋病(AIDS)，從HIV 感染發展到AIDS，過程時間長，臨床表現復雜，且具有較長的潛伏期、傳染性強，具有較高的病死率[1-2]。目前HIV感染的發病機制尚不清楚，一般認為HIV感染機體后，直接或間接的導致CD4+T數量減少，損害細胞免疫功能；也有臨床指出HIV 感染是導致CD8+T 細胞喪失抗病毒的活性或誘發機體自身免疫系統疾病，從而導致各種機會性感染或腫瘤風險上升[3-4]。臨床中檢測T淋巴細胞亞群，用以反映機體免疫功能狀況，因此對T 淋巴細胞亞群的檢測有助于觀察HIV感染患者機體免疫狀況，為防治和預后判斷等提供理論參考依據[5]。本研究旨在進一步探究HIV感染者血清T淋巴細胞亞群表達水平的變化及其臨床意義，為患者的臨床診斷提供指導。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2018 年1 月至2019 年5月期間西安市第八醫院收治的60 例HIV 感染患者作為研究對象(觀察組)，其中男性33 例，女性27 例；年齡17～75 歲，平均(42.28±12.46)歲；≤50 歲43 例，＞50 歲17 例。納入標準：①均確認HIV 抗體為陽性，診斷符合《艾滋病和艾滋病病毒感染診斷》(WS293-2019)；②能夠配合診療及隨訪，依從性較好者。排除標準：①既往有抗HIV 藥物治療史者；②既往有合并腫瘤者；③近期(1 個月內)接受過增強免疫相關治療者；④不能完成相關檢測者。選取同期健康者60 例作為對照組，其中男性35 例，女性25 例；年齡18～78 歲，平均(43.36±12.37)歲。兩組受檢者的性別和年齡比較，差異均無統計學意義(P＞0.05)，具有可比性。本研究經醫院倫理委員會批準，患者及其家屬同意。

1.2 檢測方法 取所有受檢者外周靜脈血1～2 mL，于乙二胺四乙酸二鈉(EDTA-K2)抗凝管中，24 h 內染色處理，使用CD45Per-cp CD3-FITC CD4-APC CD8-PE CD1656-PE (雙管中的第二管)和TruCOUNT管(美國BD公司)，在TruCOUNT管中加入20 μL T淋巴細胞亞群試劑和50 μL抗凝全血，混勻室溫暗置15 min，加入10 倍稀釋FACS 溶血素450 μL，室溫暗處靜置反應15 min，1 h內采用美國生產的BD FACSCanto Ⅱ流式細胞儀，雙激光6 色，分析T 淋巴細胞亞群包括CD3+、CD4+、CD8+細胞絕對數以及CD4+、CD8+占細胞百分比，計算CD4+/CD8+比值，實驗操作過程嚴格遵守儀器相關說明書。輔助性T細胞T4=CD3+CD4+，細胞毒性T細胞T8=CD3+CD8+。

1.3 觀察指標 ①兩組受檢者外周血T4、T8細胞計數情況；②兩組受試者T 淋巴細胞亞群的檢測情況；③HIV 感染者不同年齡、性別的T 淋巴細胞亞群檢測情況。

1.4 統計學方法 應用SPSS24.0 統計軟件分析數據，計量資料符合正態分布，以均數±標準差(x-±s)表示，組間比較采用t檢驗，計數資料比較采用χ2檢驗。檢驗水準α=0.05，以P＜0.05 為差異具有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組受檢者外周血T4、T8細胞計數比較 觀察組患者T4、T8細胞計數及T4/T8比值與對照組比較差異均具有顯著統計學意義(P＜0.01)，見表1。

表1 兩組受檢者外周血T4、T8細胞計數比較(±s，/mm3)

表1 兩組受檢者外周血T4、T8細胞計數比較(±s，/mm3)

組別觀察組對照組t值P值例數60 60 T4(CD3+CD4+)382±110 849±250 10.643 0.000 1 T8(CD3+CD8+)1031±301 579±150 9.367 0.000 1 T4/T8 0.42±0.01 1.54±0.35 13.256 0.000 1

2.2 兩組受檢者的T淋巴細胞亞群水平比較 觀察組患者的CD3+、CD4+、CD4+%、CD4+/CD8+明顯低于對照組，CD8+、CD8+%明顯高于對照組，差異均具有顯著統計學意義(P＜0.01)，見表2。

2.3 不同年齡、性別患者的T 淋巴細胞亞群水平比較 不同性別患者的CD4+、CD8+、CD4+/CD8+水平相比，男性患者CD4+、CD4+/CD8+水平低于女性患者，CD8+高于女性患者，差異均具有顯著統計學意義(P＜0.01)；50 歲以下與50 歲以上的患者CD4+、CD8+、CD4+/CD8+比較差異均無統計學意義(P＞0.05)，見表3。

表2 兩組受檢者的T淋巴細胞亞群水平比較(±s，個/μL)

表2 兩組受檢者的T淋巴細胞亞群水平比較(±s，個/μL)

組別觀察組對照組t值P值例數60 60 CD3+1 065.21±315.98 1 844.34±364.07 12.519 0.000 1 CD4+492.95±145.17 1 104.17±152.21 22.508 0.000 1 CD8+995.32±169.98 583.34±169.11 13.309 0.000 1 CD4+%27.15±7.17 36.87±8.41 6.812 0.000 1 CD8+%63.87±7.78 33.34±8.31 20.774 0.000 1 CD4+/CD8+0.38±0.02 1.67±0.14 70.656 0.000 1

表3 不同年齡、性別患者的T淋巴細胞亞群水平比較(±s)

表3 不同年齡、性別患者的T淋巴細胞亞群水平比較(±s)

指標性別男性女性t值P值年齡(歲)≤50＞50 t值P值例數33 27 43 17 CD4+14.34±4.17 19.17±5.22 5.599 0.000 1 14.95±4.06 14.24±3.81 0.987 0.325 CD8+80.32±17.28 70.34±10.76 23.268 0.000 1 76.32±10.24 77.34±9.48 0.566 0.572 CD4+/CD8+0.28±0.01 0.37±0.04 16.908 0.000 1 0.29±0.03 0.29±0.01 0.000 1.000

3 討論

HIV 作為一種多嗜性病毒，能夠侵入機體感染多種細胞，其中人體免疫系統中T 淋巴細胞反應最為敏感[6]。T 淋巴細胞表面的CD4 分子是HIV 的主要受體，當HIV 感染細胞時，直接或間接地導致CD4+T 淋巴細胞核其他T淋巴細胞的損傷、死亡，導致病情最終發展為AIDS[7-8]。因此在HIV 疾病發展過程中，機體表現的主要特征是CD4+T淋巴細胞數量驟減、病毒增加，由此，臨床可通過檢測人體免疫系統中的T淋巴細胞數量及百分比，從而可直觀地反應出患者HIV感染程度及免疫系統損傷情況[9-10]。

另外，HIV 患者的NK 細胞與T 淋巴細胞亞群聯系緊密，這是由于NK 細胞是人體天然免疫系統的主要組成部分，能夠在不需要預先致敏作用下對人體發揮免疫作用，因此，NK細胞可在人體獲得性免疫系統應答之前，對機體起保護作用[11-12]。同時NK細胞也能夠通過分泌各細胞因子，誘導和調節獲得性免疫功能。因此，通過檢測和分析HIV患者T淋巴細胞，判斷NK細胞情況，進而確定患者感染狀況，從而診斷其是否進入發病期，對臨床預防和早期抗HIV治療具有重要意義[13]。

本研究結果顯示，HIV 感染患者的CD3+、CD4+、CD4+%計數顯著低于正常健康者，CD8+、CD8+%計數高于健康者，因此，CD4+/CD8+比值也顯著較低。這可能在于總T 淋巴細胞即CD3+絕對數計數正常情況下在690～2 540 個/μL，當機體受到病毒感染或其他原因導致免疫系統損傷或造血系統異常時，T 淋巴細胞表達異常[14]。本研究中觀察組患者T 淋巴細胞CD3+、CD4+明顯較低，CD8+陽性細胞表達不顯著，臨床中輔助T 淋巴細胞是CD3+CD4+，而抑制性T 淋巴細胞是CD3+CD8+細胞，提示觀察組患者受病毒感染使輔助T淋巴細胞降低，抑制性T淋巴細胞功能異常，機體免疫系統損傷。

根據HIV 感染時機體CD4+＜200 個/μL 或≤14%時，可判定患者進入AIDS 發病期。這主要在于CD4+是免疫系統的中樞細胞，是效應細胞，可以通過分泌腫瘤壞死因子、干擾素等細胞因子，從而對病毒起抑制作用[15]。本研究結果顯示HIV 患者的CD4+顯著低于健康者，這是由于CD4+T淋巴細胞作為HIV的直接攻擊對象，其數量減少可直接反應人體免疫系統受損。這提示當機體感染HIV時，各細胞因子誘導B細胞產生抗HIV抗體，促進活化巨噬細胞和NK細胞，從而使機體CD4+T淋巴細胞計數顯著降低[16]。

本研究結果顯示HIV感染者CD8+、CD8+%計數高于健康者，與臨床相關研究資料[17-18]結果相一致，由于CD8+是T淋巴細胞中抗HIV的主要免疫細胞，在HIV感染機體后，CD8+T淋巴細胞發揮抗HIV作用，其數量隨著病毒增加而增加。因此CD4+/CD8+比值常在臨床中作為反映細胞免疫系統的敏感性指標，當比值下降時，可以作為判斷HIV病情嚴重程度的重要指標之一。

本研究比較不同年齡、性別的HIV 感染患者的T淋巴細胞亞群情況發現，50歲以下與50歲以上的患者其CD4+、CD8+、CD4+/CD8+比較差異無統計學意義。男女之間CD4+、CD8+、CD4+/CD8+相比，男性患者的CD4+、CD4+/CD8+小于女性患者，CD8+大于女性患者，其原因有待進一步調查研究。

綜上所述，HIV 感染改變機體T 淋巴細胞亞群表達情況，通過對外周血CD3+、CD4+、CD8+T淋巴細胞檢測可以進一步了解HIV 感染者的免疫功能受損和病情進展情況，從而更好地把握病程分期，為預防和早期治療提供理論依據。