循環(huán)腫瘤細(xì)胞在肝細(xì)胞癌中的研究應(yīng)用

李鐘鳴 黃平

【摘要】肝細(xì)胞癌（hepatocellular carcinoma，HCC）在全球范圍內(nèi)是最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，發(fā)病率及死亡率高，預(yù)后差，嚴(yán)重威脅著人類(lèi)的健康。影響預(yù)后最主要原因包括早期診斷困難以及術(shù)后的肝癌復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移。因此，HCC 的早期診斷以及病程監(jiān)測(cè)對(duì)改善肝細(xì)胞癌患者的總體預(yù)后非常重要。循環(huán)腫瘤細(xì)胞（CTC）是由實(shí)體腫瘤脫落至外周血液循環(huán)中，與正常血細(xì)胞相比較，其標(biāo)志物以及形態(tài)存在著明顯差異。隨著富集與鑒定技術(shù)的進(jìn)步，在癌癥的早期診斷、術(shù)后動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)以及預(yù)后評(píng)估等方面具有極大的臨床應(yīng)用價(jià)值。本文回顧了國(guó)內(nèi)外CTC 的研究進(jìn)展，對(duì)其檢測(cè)技術(shù)及在 HCC 患者診斷以及預(yù)后等方面的研究與臨床應(yīng)用等進(jìn)行綜述。

【關(guān)鍵詞】：肝細(xì)胞癌;循環(huán)腫瘤細(xì)胞;富集技術(shù)

【中圖分類(lèi)號(hào)】R6 ? 【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A ? ?【文章編號(hào)】2107-2306（2020）03-018-03

worldwide， with high morbidity and mortality and poor prognosis. The main reason for poor prognosis are difficulties in early diagnosis， common recurrence and metastasis after surgery. Therefore， early diagnosis and postoperative monitoring of HCC are particularly important to improve the overall prognosis of HCC patients. Circulating tumor cells （ CTC） from solid tumors fall off to peripheral blood circulation， and there are differences in morphology and markers compared with normal blood cells. With the advancement of enrichment and identification methods， there exists great clinical application value in early tumor diagnosis， postoperative dynamic monitoring， and prognosis evaluation. In this article， the research progress of CTCs at home and abroad was retrospectively illustrated， and their detection methods， research， and clinical applications for diagnosis， prognosis， and other aspects of HCC patients were systematically reviewed.

Key words： hepatocellular carcinoma（HCC） ;Circulating tumor cell（CTC）; Enrichment technique

肝細(xì)胞癌（ HCC）是世界上最為常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，大部分患者就診時(shí)已處于疾病的中晚期階段，錯(cuò)過(guò)了手術(shù)根治的最佳治療時(shí)機(jī)，即使可行手術(shù)治療，術(shù)后也極容易復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移，預(yù)后極差。腫瘤的早發(fā)現(xiàn)、早診斷、早治療可以顯著提高 HCC 患者的生存質(zhì)量以及生存時(shí)間。AFP（甲胎蛋白）作為HCC最為經(jīng)典的血清腫瘤標(biāo)志物，已經(jīng)在臨床上得到普及和推廣，但其檢測(cè)的特異性以及敏感性都難以達(dá)到預(yù)期。因此，尋找特異性、敏感性高的的腫瘤標(biāo)志物一直以來(lái)便是臨床研究的熱點(diǎn)。近年來(lái)由原發(fā)癌灶釋放入血的循環(huán)腫瘤細(xì)胞（circulating tumor cell，CTC）引起腫瘤的復(fù)發(fā)及轉(zhuǎn)移成為了研究熱點(diǎn)。組織活檢等傳統(tǒng)有創(chuàng)性檢測(cè)方法相比，CTC的檢測(cè)具有可重復(fù)性高、高效、實(shí)時(shí)等特點(diǎn)[1]，在肝細(xì)胞癌早期的診斷 以及預(yù)后評(píng)估、病程監(jiān)測(cè)、復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移機(jī)制的研究中成為一種很有前景的檢測(cè)形式。但是CTC在人體外周血液中的含量極低，在含有大量血細(xì)胞的外周血中富集并鑒定出這一類(lèi)特殊細(xì)胞的難度特別高。現(xiàn)在主要基于循環(huán)腫瘤細(xì)胞的物理特性或者生物學(xué)特性等從患者的外周血液富集 CTCs，將富集到的 CTCs 再通過(guò)免疫熒光標(biāo)記法、流式細(xì)胞術(shù)、細(xì)胞的核質(zhì)比例法、RNA 原位雜交法等進(jìn)一步篩除非 CTCs。目前已經(jīng)證實(shí)CTCs在前列腺癌、肺癌、乳腺癌等腫瘤血行轉(zhuǎn)移過(guò)程中發(fā)揮著關(guān)鍵作用[2]。本文結(jié)合各類(lèi)文獻(xiàn)，就HCC中CTCs的檢測(cè)技術(shù)及其臨床應(yīng)用研究進(jìn)展作一綜述。

1. CTC 概述

早在1869年，ASHWORTH[3]等便發(fā)現(xiàn)血液里的一種血細(xì)胞與尸檢發(fā)現(xiàn)的腫瘤細(xì)胞極為相似，首次提出了CTC 的概念。現(xiàn)在將CTC 定義為：自發(fā)或因診療操作由實(shí)體腫瘤或轉(zhuǎn)移灶里釋放進(jìn)入外周血液循環(huán)里的腫瘤細(xì)胞[4]。進(jìn)入血液系統(tǒng)未被清理的循環(huán)腫瘤細(xì)胞通過(guò)遷移、粘附、互相集聚形成微小癌栓，然后一定條件下逐漸發(fā)展成為轉(zhuǎn)移灶[5]。近些年，隨著醫(yī)學(xué)對(duì)腫瘤轉(zhuǎn)移機(jī)制研究的深入，以及各種檢測(cè)技術(shù)的不斷更新和改進(jìn)，CTC的檢測(cè)技術(shù)已經(jīng)取得了一些突破性的進(jìn)展。部分檢測(cè)技術(shù)在特異性、敏感性及穩(wěn)定性等層面已經(jīng)較為理想，CTC 的臨床研究與應(yīng)用也已取得巨大進(jìn)步。

2. HCC CTC 富集鑒定

2.1 富集：

CTC在發(fā)現(xiàn)后的一百多年時(shí)間里，各種檢測(cè)技術(shù)得到不斷提高，并為進(jìn)一步研究循環(huán)腫瘤細(xì)胞在HCC發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中的具體作用機(jī)制提供了可能性。目前的檢測(cè)手段主要包括基于其力學(xué)、大小、密度、遷移能力、介電性質(zhì)等物理特性以及細(xì)胞表面的腫瘤相關(guān)特異性抗原的生物學(xué)特性。隨著分離技術(shù)的不斷涌現(xiàn)及臨床應(yīng)用，CTC的檢測(cè)手段也越來(lái)越多元、高效，大致可以分為三代：第一代主要包含以特殊過(guò)濾器、梯度離心以及免疫磁芯法為代表的批量處理 CTC 的方法;第二代主要包括微流體芯片技術(shù)、流式細(xì)胞術(shù)及CanPatrolTMCTC檢測(cè)技術(shù);第三代為在第二代基礎(chǔ)上研發(fā)的可以對(duì)一個(gè)細(xì)胞進(jìn)行分離富集的液滴微流體技術(shù)，此技術(shù)可以通過(guò)微流體裝置在單獨(dú)的一個(gè)細(xì)胞單元里形成液滴來(lái)分選細(xì)胞，含有單個(gè)細(xì)胞的液滴可應(yīng)用于對(duì)每個(gè)細(xì)胞的特征、生存預(yù)測(cè)能力的研究等，但目前僅見(jiàn)于肺癌的相關(guān)研究報(bào)道。近年在HCC CTC 研究中常用的檢測(cè)方法有流式細(xì)胞術(shù)、CellSearchTM系統(tǒng)、CanPatrolTMCTC以及微流體芯片檢測(cè)技術(shù)等[6]。每一種檢測(cè)技術(shù)的效率有所不同，將各種檢測(cè)技術(shù)的綜合應(yīng)用可能會(huì)提高最終的檢測(cè)效能。

多種方式相結(jié)合的CTC富集方法為處理CTC檢測(cè)中成本高、耗時(shí)久的弊端，微流控芯片技術(shù)作為新型檢測(cè)系統(tǒng)應(yīng)運(yùn)而生。微流控芯片技術(shù)把免疫親和性和細(xì)胞大小相結(jié)合，設(shè)計(jì)出一種可以高效分離循環(huán)腫瘤細(xì)胞的微結(jié)構(gòu)單元裝置，分離效率可超過(guò)90%[7]，由于微流控芯片技術(shù)富集CTC的特異性以及敏感性都較高，從而受到學(xué)者的廣泛關(guān)注[8]。在微流控芯片的表面布滿了可以包被特異性抗體的位點(diǎn)，在操作人員的精準(zhǔn)控制下，外周血液細(xì)胞在流過(guò)芯片時(shí)，微流控芯片上的抗體便會(huì)特異性識(shí)別，并和循環(huán)腫瘤細(xì)胞表面的抗原相結(jié)合[9]。和以往常規(guī)的富集方法比較，微流控芯片具有易脫洗、回收率高、細(xì)胞破壞少且分離速度快的特點(diǎn)[10]，并為之后 CTC 的培養(yǎng)與分析提供了機(jī)會(huì)，在臨床應(yīng)用中有著廣闊的應(yīng)用前景和巨大的潛力。

2.2 鑒定

免疫熒光標(biāo)記技術(shù)是在循環(huán)腫瘤細(xì)胞鑒定技術(shù)里最為常用的一種手段，熒光標(biāo)記法主要基于細(xì)胞的抗原-抗體反應(yīng)來(lái)識(shí)別CTCs與非CTCs細(xì)胞。所以，適合的熒光抗體或者抗體組合是鑒定技術(shù)的關(guān)鍵。CellSearch 系統(tǒng)便是使用免疫熒光標(biāo)記法對(duì)循環(huán)腫瘤細(xì)胞進(jìn)行鑒定，在這個(gè)系統(tǒng)里，通過(guò)應(yīng)用一種核內(nèi)染色劑（ DAPI） 來(lái)進(jìn)行免疫組化的染色，其原理是將攜帶EpCAM抗體的磁珠耦合，并定義為CK8、CK18、CK19陽(yáng)性，CD45陰性的有核細(xì)胞。但有研究發(fā)現(xiàn)，CTCs 在脫離原腫瘤組織進(jìn)入外周血液向其余組織轉(zhuǎn)移的過(guò)程中，細(xì)胞會(huì)發(fā)生EMT （上皮-間質(zhì)的轉(zhuǎn)化） 。但是與其余大部分類(lèi)型的上皮性腫瘤不同，幾乎所有的肝癌細(xì)胞都不能正常表達(dá)EpCAM，這從很大程度上限制了基于 EpCAM各項(xiàng)檢測(cè)技術(shù)在臨床上的應(yīng)用。

Liu[11]等使用一種基于磁珠負(fù)性富集的技術(shù)來(lái)達(dá)到去除CD45 + 白細(xì)胞的目的，并改進(jìn)了識(shí)別循環(huán)腫瘤細(xì)胞的標(biāo)志 物，該研究團(tuán)隊(duì)?wèi)?yīng)用了三種組合抗體：CPS1 （氨基甲酰磷酸合成酶-1）、CD45和ASGPR（去唾液酸糖蛋白受體）來(lái)標(biāo)記肝細(xì)胞癌患者外周循環(huán)腫瘤細(xì)胞，然后應(yīng)用三重免疫熒光染色處理的技術(shù)，將循環(huán)腫瘤細(xì)胞分選出來(lái)，最后在 91% （ 29 /32） 的 HCC 患者中檢測(cè)到了CPS1和（ 或） ASG-PR+CTCs，而在其余類(lèi)型的癌癥患者外周血中均未能檢測(cè)到，抗CPS1以及ASGPR單克隆抗體兩者的混合物比應(yīng)用單獨(dú)任一抗體鑒定HCC 細(xì)胞的特異性和敏感性都明顯增加。除此以外，包括DAPI 、CD45 、ASGPR、Hsp-Par1 + 、DAPI + 、CD45 - 、CK + 、pERK / Akt + 等在內(nèi)的標(biāo)志物抗體組合也都被用于 CTCs 的鑒定技術(shù)。

通過(guò)探針技術(shù)實(shí)現(xiàn)的多重RNA原位分析雜交法應(yīng)用于CTCs的分型與鑒定也是常見(jiàn)的方法之一。其中，Canpatrol 系統(tǒng)便是應(yīng)用這一原理[12]。Canpatrol系統(tǒng)針對(duì)EMT這一途徑，可以同時(shí)對(duì)間質(zhì)標(biāo)志物（ 如 Twist、Vimentin）和上皮標(biāo)志物 （ 如EpCAM、CK8、CK18、CK19）進(jìn)行檢測(cè)。相關(guān)研究顯示，在肝細(xì)胞癌患者外周血液中，其間質(zhì)型的循環(huán)腫瘤細(xì)胞會(huì)更常見(jiàn)于已經(jīng)出現(xiàn)轉(zhuǎn)移的肝癌患者外周血液樣本里，并且間質(zhì)型循環(huán)腫瘤細(xì)胞的數(shù)目越多，提示肝癌患者的預(yù)后則會(huì)越差[13]。Qi[14]等應(yīng)用該系統(tǒng)發(fā)現(xiàn)，112 例 HCC 患者（ 包含早期 HCC）中有 111 例（90.18% ） CTCs 陽(yáng)性; 另外，在 12 例乙型肝炎病毒感染患者中，其中有2 例乙型肝炎病毒感染患者也測(cè)到了循環(huán)腫瘤細(xì)胞，這 2 例患者在5個(gè)月內(nèi)均檢測(cè)到微小肝細(xì)胞癌。除去商業(yè)化的產(chǎn)品 Canpatrol 系統(tǒng)以外，Guo[15]等對(duì)肝細(xì)胞癌患者的外周血液首先應(yīng)用CD45的負(fù)性富集，然后再利用 qRT-PCR 的方法對(duì) 多 標(biāo) 記物 表 征 （ EpCAM、CD133、CD90 和 CK19） 的 CTCs 進(jìn)行鑒定，最后發(fā)現(xiàn)該鑒定手段在 肝細(xì)胞癌的診斷中具有極高的特異性以及敏感性，可以作為治療監(jiān)測(cè)以及風(fēng)險(xiǎn)預(yù)測(cè)實(shí)時(shí)參考數(shù)據(jù)。

多重RNA 原位雜交法以及免疫熒光標(biāo)記法是目前世界上最常用的兩種循環(huán)腫瘤細(xì)胞鑒定方法，但是這兩種檢測(cè)技術(shù)都極其依賴(lài)所對(duì)應(yīng)的標(biāo)志物，也就是說(shuō)，當(dāng)循環(huán)腫瘤細(xì)胞標(biāo)志物不同，將會(huì)直接導(dǎo)致循環(huán)腫瘤細(xì)胞鑒定的特異性以及敏感性出現(xiàn)不同。除此以外，基于細(xì)胞的核質(zhì)比例法、流式細(xì)胞術(shù)等鑒定循環(huán)腫瘤細(xì)胞也都有不少文獻(xiàn)報(bào)道。

3. HCC 外周血 CTCs 檢測(cè)的臨床應(yīng)用

3.1 臨床分期

最近研究表明，外周血液循環(huán)腫瘤細(xì)胞陽(yáng)性率與肝癌病人的腫瘤分期（ BCLC 分期、TNM 分期） 呈正相關(guān)的關(guān)系，若出現(xiàn)肉眼血管侵犯或者肝外轉(zhuǎn)移的患者體內(nèi)，其循環(huán)腫瘤細(xì)胞的陽(yáng)性率則會(huì)更高。Schulze[16]等應(yīng)用CellSearch 系統(tǒng)檢測(cè) HCC 外周血發(fā)現(xiàn)，循環(huán)腫瘤細(xì)胞的計(jì)數(shù)與肝癌患者的甲胎蛋白水平（AFP）、微血管侵犯、巴塞羅那（BCLC）分期、總生存率等因素都密切相關(guān)。這和Sun[17]等報(bào)道結(jié)果基本一致。循環(huán)腫瘤細(xì)胞按照不同表型可以分為上皮型、混合型、間質(zhì)型三種，不同表型的循環(huán)腫瘤細(xì)胞可以從不同的方面反映肝細(xì)胞癌患者的臨床特征，可作為評(píng)估 HCC 患者病情的輔助指標(biāo)。應(yīng)用CellSearch 系統(tǒng)檢測(cè)肝細(xì)胞癌患者外周血液循環(huán)腫瘤細(xì)胞時(shí)還發(fā)現(xiàn)，在很多TNM 分期提示為早期的肝

細(xì)胞癌患者的外周血液里也會(huì)檢測(cè)到循環(huán)腫瘤細(xì)胞[18]。這從側(cè)面反映 HCC早期即有可能發(fā)展為全身性疾病，僅僅只依靠目前的臨床病理分期并不能如實(shí)地反映出肝細(xì)胞癌的生物學(xué)特點(diǎn)以及疾病的發(fā)展情況。因此，倘若能夠?qū)?CTCs 應(yīng)用于日常檢查，如同乳腺癌一樣將循環(huán)腫瘤細(xì)胞納入 NCCN 指南將會(huì)對(duì)肝細(xì)胞癌患者的早期診斷大有裨益，不僅如此，循環(huán)腫瘤細(xì)胞還可以監(jiān)測(cè)肝癌患者的預(yù)后，進(jìn)而延長(zhǎng)患者的生存期。

3.2 診斷監(jiān)測(cè)和預(yù)后隨訪

臨床上，肝細(xì)胞癌的診斷主要依賴(lài)于血清學(xué)的檢測(cè)、醫(yī)學(xué)影像、病理組織活檢等方法，這些方法往往對(duì)癌癥的早期診斷存在一定的局限性。循環(huán)腫瘤細(xì)胞的檢測(cè)僅僅只需采集少量外周血，是一項(xiàng)非侵入性的診斷方法，十分有利于反復(fù)獲取以及實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)。YANG [19]等采用了流式細(xì)胞術(shù)來(lái)檢測(cè)HCC患者的循環(huán)腫瘤細(xì)胞，結(jié)果顯示循環(huán)腫瘤細(xì)胞的陽(yáng)性率可高達(dá)91.17%，且腫瘤組織越大，陽(yáng)性率越高。而健康對(duì)照組以及肝硬化組均未檢測(cè)出CTCs。此外，在肝細(xì)胞癌患者的治療前后，循環(huán)腫瘤細(xì)胞的數(shù)量也有一定的變化。因此循環(huán)腫瘤細(xì)胞的檢測(cè)可用于臨床上的治療監(jiān)測(cè)，并輔助臨床醫(yī)生評(píng)估療效和預(yù)后，并對(duì)治療方案進(jìn)行及時(shí)地修正。LI[20]等的研究結(jié)果顯示，Erk 和 Akt 為表皮生長(zhǎng)因子受體（ epidermal growth factor receptor， EGFR）的 下 游分 子 ， 磷 酸 化 后 為 pErk 及 pAkt，pErk+/pAkt-和 pErk+/pAkt+的肝癌患者在使用索拉菲尼治療后，CTC的平均下降率為 41.3%。SUN[21]等采用 CellSearch 系統(tǒng)檢測(cè) 87 例肝細(xì)胞癌患者的 CTC，發(fā)現(xiàn) CTC≥2個(gè)/7.5 mL 的肝細(xì)胞 癌 患 者 的 復(fù) 發(fā) 率 為 87.5%， 明 顯 高 于 CTC<2 個(gè) /7.5 mL 的 肝 細(xì) 胞 癌 患者（ 15.5%，P<0.001），且 CTC≥2 個(gè)/7.5 mL 的患者的 CTC 數(shù)量與大血管的入侵情況、分化程度及 AFP水平有關(guān)。此外，獲得治療后的外周血液，循環(huán)腫瘤細(xì)胞計(jì)數(shù)的變化能夠反映此次的治療效果[22]，患者在獲得治療后（包括外科手術(shù)切除、經(jīng)動(dòng)脈化療栓塞術(shù)以及靶向藥物等）外周血液里循環(huán)腫瘤細(xì)胞的計(jì)數(shù)減少或著消失提示治療效果較好;若出現(xiàn)循環(huán)腫瘤細(xì)胞計(jì)數(shù)無(wú)任何變化或者下降后又再次升高的患者往往提示治療的效果欠佳甚至出現(xiàn)腫瘤的復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移或者已經(jīng)產(chǎn)生耐藥。Ye[23]等研究了循環(huán)腫瘤細(xì)胞計(jì)數(shù)與乙型病毒性肝炎相關(guān)的肝細(xì)胞癌在根治性切除術(shù)后與患者預(yù)后的關(guān)系，發(fā)現(xiàn)術(shù)后循環(huán)腫瘤細(xì)胞計(jì)數(shù)較低的一組（≤2/5 mL）與細(xì)胞計(jì)數(shù)較高的一組（>2/5 mL）患者相對(duì)比，DFS 和 OS 均有明顯的增加，表明更高的循環(huán)腫瘤細(xì)胞計(jì)數(shù)可能是肝細(xì)胞癌患者預(yù)后不良的一個(gè)獨(dú)立的因素。Yu[24]等研究了肝手術(shù)切除后肝細(xì)胞癌患者循環(huán)腫瘤細(xì)胞技術(shù)的變化，結(jié)果提示在術(shù)后循環(huán)腫瘤細(xì)胞計(jì)數(shù)增加（術(shù)前的細(xì)胞數(shù)<2，術(shù)后的細(xì)胞數(shù)≥2）的HCC患者與循環(huán)腫瘤細(xì)胞計(jì)數(shù)未增加（術(shù)前 CTC<2，術(shù)后 CTC<2）的HCC患者相比較，DFS 和 OS都明顯減少;術(shù)前和術(shù)后循環(huán)腫瘤細(xì)胞計(jì)數(shù)持續(xù)≥2的HCC患者預(yù)后最差，而循環(huán)腫瘤細(xì)胞計(jì)數(shù)持續(xù)<2的患者其DFS 和 OS顯著增加。以上研究結(jié)果表明術(shù)后循環(huán)腫瘤細(xì)胞計(jì)數(shù)與 HCC 患者的預(yù)后明顯相關(guān)。

Hao[25]等為此進(jìn)行了更深一步的研究，結(jié)果提示采用了前入路肝切除術(shù)后的肝細(xì)胞癌患者與傳統(tǒng)入路肝切除術(shù)后的患者相比較，前一組HCC患者外周血中的循環(huán)腫瘤細(xì)胞計(jì)數(shù)顯著減少，并且兩年復(fù)發(fā)率也明顯降低，提示前入路肝切除與傳統(tǒng)肝切除相比，前入路肝切除顯著降低了術(shù)后循環(huán)腫瘤細(xì)胞的計(jì)數(shù)，并且明顯改善了患者的預(yù)后。循環(huán)腫瘤細(xì)胞在肝細(xì)胞癌預(yù)后的相關(guān)性研究中已經(jīng)展現(xiàn)出了巨大的優(yōu)勢(shì)和潛力，并且已使得部分HCC患者從中獲益。相信隨著更大樣本的研究，循環(huán)腫瘤細(xì)胞的應(yīng)用價(jià)值將會(huì)得到進(jìn)一步驗(yàn)證，并且能夠使得更多的HCC患者從中獲益。

4.總結(jié)

綜上所述，循環(huán)腫瘤細(xì)胞的應(yīng)用可能為臨床醫(yī)生和研究人員提供個(gè)性化方案，因?yàn)?CTCs 是敏感的生物學(xué)標(biāo)志物，在HCC的各個(gè)階段，比如腫瘤的診斷與分期、療效的監(jiān)測(cè)、預(yù)后評(píng)估和個(gè)體化精準(zhǔn)醫(yī)療方案的制定等各方面都發(fā)揮著很大的價(jià)值。然而，在臨床上使用循環(huán)腫瘤細(xì)胞分析前，必須建立一種能夠捕獲全部循環(huán)腫瘤細(xì)胞高特異性和敏感性的方法。截至目前，大多數(shù)的研究是單中心的病例對(duì)照研究，而且樣本量十分局限，今后需要進(jìn)行足夠樣本量和長(zhǎng)期隨訪的多中心前瞻性研究，以評(píng)估最合適的循環(huán)腫瘤細(xì)胞富集檢測(cè)和分離鑒定方法，以便循環(huán)腫瘤細(xì)胞更好地應(yīng)用用于HCC 臨床分期、預(yù)后評(píng)價(jià)以及療效評(píng)估等。

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