氣相色譜法快速測定花椰菜中12種有機磷農藥殘留

□ 楊珍燕 曾丹丹 湛江市食品藥品檢驗所

近年來，隨著人們對食品安全問題越來越重視，農產品中農殘的檢測任務也越來越重。有機磷農藥作為一種高效、廣譜的殺蟲劑被廣泛運用于農產品的種植過程中，如何更高效且準確的對大批量的農產品中有機磷農殘進行檢測成為亟需解決的問題[1]。本文參考NY/T761-2008中第一部分方法二果蔬中有機磷農殘檢測方法[2]，把花椰菜作為空白基底，采用改進后的前處理方法，通過氣相色譜儀檢測[3]可同時測定花椰菜中敵敵畏等12種有機磷農藥殘留。該方法效率高、回收率高、有機試劑使用量小，適用于測定大批量樣品的有機磷農殘項目。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

乙腈、乙酸乙酯（均為色譜純；無水硫酸鈉、氯化鈉（均為分析純，使用前用馬弗爐在650 ℃灼燒4 h）；濃度均是100 μg/mL的敵敵畏、甲胺磷、乙酰甲胺磷、甲拌磷等12種有機磷單一標準溶液，購自北京壇墨質檢科技有限公司。

配有FPD火焰光度檢測器的GC-2010PLUS氣相色譜儀（SHIMADZU公司）；DTF-A300電子天平（福州志華科學儀器有限公司）；Centrisartg-16C高速冷凍離心機（賽多利斯科學儀器有限公司）；Auto EVA-20 plus氮吹儀（睿科儀器有限公司）；破壁料理機（美的）；全自動漩渦振蕩器（德國heidolph公司）；QuEChERS分散試劑盒（美國Agilent公司）。

1.2 配制標準溶液

1.2.1 配制標準混合儲備液

規格為10 mL的玻璃容量瓶中先加入少量乙酸乙酯，再準確移取12種有機磷標準溶液各0.50 mL加入其中，最后用乙酸乙酯定容到10.0 mL，配制成有機磷混合標準儲備液，濃度為5.0 μg/mL，于-18 ℃冰箱貯存，有效期為3個月。

1.2.2 配制純溶劑標準工作液

臨用時把有機磷混合標準儲備液 分 別 稀 釋 成 0.02、0.05、0.10、0.20 μg/mL和0.50 μg/mL 共 5 個濃度梯度的純溶劑混合標準工作液，用乙酸乙酯定容。

1.2.3 配制基質匹配標準工作液

將陰性花椰菜樣品按照1.3的步驟進行提取凈化后氮吹至近干，用1.2.2中的標準工作液復溶，配制成5個濃度梯度的基質匹配標準工作液，濃度分別是0.02、0.05、0.10、0.20 μg/mL和 0.50 μg/mL。

1.3 樣品的前處理方法

用破壁機攪碎花椰菜樣品，稱取5 g（精確至0.01 g）花椰菜于50 mL塑料離心管中，準確移取10.0 mL乙腈加入離心管中，用全自動旋渦振蕩器提取5 min，然后加入2.0 g氯化鈉進行鹽析分層，振蕩1 min，離心5 min（5 000 r/min），取出上層清液待凈化。

取約2 mL上述上清液至10 mL離心管中，此離心管已預先加入QuEChERS分散試劑盒吸附劑（含有150.0 mg無水硫酸鎂，50.0 mg乙二胺-N-丙基硅烷（PSA），50.0 mg C18，7.5 mg石墨炭黑（GCB）漩渦振蕩2 min，5 000 r/min離心 2 min，再精確移取1.0 mL上層清液于5 mL玻璃氮吹小管中，氮吹至近干，用乙酸乙酯定容至0.5 mL，移入進樣小瓶中，按1.4條件上機檢測。

1.4 色譜條件

色譜柱：規格為30 m×0.32 mm×0.25 μm的DB-17毛細管色譜柱；汽化室溫度：230 ℃；色譜柱升溫程序：初始溫度60 ℃保持2 min，25 ℃/min升到200 ℃，再以5 ℃/min升到255 ℃保持5 min；FPD檢測器溫度：280 ℃；載氣是高純氮氣，純度≥99.999%；吹掃流量為5.0 mL/min；高純氫氣，純度≥99.999%，流量為60.0 mL/min；干燥空氣流量為90.0 mL/min；進樣量：1.0 μL；進樣模式：不分流。

2 結果與分析

2.1 提取試劑的選擇

大部分有機磷農藥具有中等極性或弱極性，依據相似相溶原理，可以選擇乙腈、丙酮、石油醚等作為提取溶劑[4]。由于丙酮毒性較高，沸點低易揮發，除雜能力較弱。石油醚具有麻醉效果，對實驗操作者存在一定的安全風險。而乙腈具有極性強、溶解能力強、提取雜質較少的優點，所以相比之下，選擇乙腈作為提取溶劑較為合適。

2.2 提取方式的選擇

本方法用破壁機攪碎樣品，加入乙腈提取液后電動振蕩處理，代替NY/T761-2008中的勻漿機處理樣品。因為勻漿法每次只能處理單個樣品，提取效率低。而采用可以同時振蕩20個樣品的電動振蕩機則更適合處理大批量樣品。而且破壁機可以破除蔬菜樣品的細胞壁結構，使殘留的有機磷農殘更充分的被乙腈提取出來[5]。

2.3 凈化條件的選擇

QuEChERS吸附劑凈化法[6-8]被越來越廣泛用于有機磷農殘的前處理過程中，本試驗選擇的QuEChERS分散試劑盒的吸附劑粉末由乙二胺-N-丙基硅烷（PSA），C18，石墨炭黑（GCB），無水硫酸鎂混合組成。PSA可去除碳水化合物、脂肪酸、有機酸、酚類等雜質，C18可以有效去除脂類大分子物質，GCB的作用是去除色素，無水硫酸鎂是除水劑。與傳統樣品凈化方法相比較，本方法消耗試劑少、污染少、操作簡便、分析速度快，乙腈加到離心管后立即密封，減少試驗人員與有機試劑的接觸，適用于大批量樣品高效檢測。

2.4 方法的線性范圍及檢出限

為了更好地補償有機磷農藥基質效應[9-10]，提高檢測結果的準確性，采用基質匹配標準溶液來建立標準曲線。將空白陰性花椰菜作為基質匹配標準溶液的基質，配制成1.2.3的5個濃度梯度的基質匹配混合標準液，按1.4條件進行氣相色譜分析，以保留時間定性，峰面積定量，作標準曲線，其中X軸為質量濃度，Y軸為峰面積。12種有機磷農藥的線性回歸方程及相關系數R2見表1。

表1 12種有機磷農藥的線性回歸方程

由表1知，12種有機磷農藥標準曲線曲相關系數（R2）都達到0.995 7以上，在0.02～0.50 μg/mL濃度范圍內線性關系較好。根據公式方法檢出限（LOD）=3倍信噪比（S/N=3），得到12種有機磷農藥的LOD都是0.01 mg/kg，滿足GB/T 27404-2008的技術要求[11]。花椰菜基質匹配有機磷混標色譜圖見圖1。

圖1 12種有機磷混標色譜圖

2.5 方法精密度及加標回收率

對花椰菜陰性樣品進行低、中、高3個加標，加標濃度分別為0.02、0.10、0.20 mg/kg，每個濃度制備6個平行樣品，上機檢測后計算加標回收率及精密度。12種有機磷農藥的平均加標回收率為80.7%～95.9%，相對標準偏差（RSD）為4.8%～9.3%（見表 2）。

表2 12種有機磷農藥的加標回收率和相對標準偏差（n=6）

3 結論

本研究改進了NY/T761-2008中第一部分方法二的前處理方法，縮減了稱樣量，節省了有機提取試劑的使用量。用破壁機代替普通攪拌機攪碎樣品，能使滲入組織細胞內的農殘在提取時更充分地釋放出來，提高了提取率。改用電動振蕩法替代勻漿法進行提取，可同時進行多個樣品的提取操作，提高了工作效率。QuEChERS吸附劑凈化法進行凈化，凈化效果好，除雜能力強。綜上所述，該方法操作更簡單、快速、節省提取溶液、人力和時間，加標回收率結果理想，對于大批量檢測具有較強的實際應用價值。