偶聯(lián)化殼聚糖-氧化石墨烯復(fù)合凝膠球的抑菌性研究

□ 程佳慧 大連工業(yè)大學(xué)

食品污染的污染源很多，從食品原料選取到送入人們手中，主要會(huì)經(jīng)歷3個(gè)過(guò)程：原料生產(chǎn)過(guò)程、生產(chǎn)加工過(guò)程以及運(yùn)輸和貯藏過(guò)程，而這3個(gè)過(guò)程又包含眾多環(huán)節(jié)，每個(gè)環(huán)節(jié)都不可避免地接觸人、機(jī)器、空氣等外界環(huán)境，都有可能造成重金屬或食源性致病微生物的污染。

1 殼聚糖/氧化石墨烯介紹

殼聚糖，是一種天然高分子聚合物，殼聚糖及其衍生物均無(wú)毒無(wú)害，有良好的生物相容性、反應(yīng)活性、抗菌性[1]，人們常常將其廣泛應(yīng)用于食品、環(huán)保、農(nóng)業(yè)、醫(yī)藥等領(lǐng)域[2]。

氧化石墨烯基底上有大量氧原子，邊緣含有環(huán)氧基、羥基和羧基[3]，這些含氧基團(tuán)賦予氧化石墨烯親水性，防止片層堆疊，具有很好的生物相容性[4]。

2 CS/GO抑菌性研究進(jìn)展

Beheshteh等人的研究表明，糖功能化的氧化石墨烯復(fù)合物不僅具有較強(qiáng)的吸附能力，而且具有較強(qiáng)的抗菌活性，可用于病原菌和染料污染水體的處理，特別是與甘露糖的聚合物可作為有效的細(xì)菌靶向劑。

3 復(fù)合凝膠球制備

冰乙酸溶解CS粉末得到濃度為1%CS的溶液。將GO與1%CS經(jīng)超聲2 h混勻，用1 mL注射器將混合液滴入NaOH溶液中形成小球。在濃度為5%的戊二醛（GA）中進(jìn)行交聯(lián)30 min，得偶聯(lián)前的凝膠球CS/GO。

將得到的CS/GO凝膠球在體積比1∶1的APS和乙醇混合溶液中偶聯(lián)4 h，得到CS/GO(APS)凝膠球。

4 抑菌性研究

4.1 實(shí)驗(yàn)材料

胰蛋白胨大豆肉湯（mTSB）：HB4114，青島海博生物；氯化鈉：A100241-0500，生工生物工程有限公司。

4.2 實(shí)驗(yàn)方法

4.2.1 培養(yǎng)基的配制

TSB 培養(yǎng)基的配制（1 L）：稱取33.00 g mTSB，加入1 000 mL蒸餾水，加熱溶解后，高溫高壓滅菌20 min。TSB培養(yǎng)基配制（1 L）：配制過(guò)程比TSB培養(yǎng)基多加入3%的NaCl。

4.2.2 菌株培養(yǎng)

在無(wú)菌環(huán)境中分別取金黃色葡萄球菌、白色念珠菌、枯草芽孢桿菌、單核細(xì)胞增生李斯特菌、大腸桿菌、沙門氏菌、志賀氏菌與副溶血性弧菌。

實(shí)驗(yàn)組，每個(gè)2 mL離心管中加入1 mL培養(yǎng)基、濃度為1 mg/L凝膠球材料和菌液，置于34 ℃、150 r/min搖床中，過(guò)夜培養(yǎng)。空白對(duì)照組，每個(gè)離心管中加入培養(yǎng)基和菌液。

4.2.3 酶標(biāo)儀分析方法

在波長(zhǎng)600 nm下，用酶標(biāo)儀檢測(cè)培養(yǎng)不同時(shí)間的菌液的吸光度。在96孔板中，每個(gè)孔加200培養(yǎng)基和20菌液，空白則只加入培養(yǎng)基即可。測(cè)得結(jié)果，繪制12 h內(nèi)的生長(zhǎng)曲線。

為了比較出對(duì)這8種食源性致病菌的抑菌程度，通過(guò)公式（1）計(jì)算12 h后的抑菌率。

4.3 結(jié)果與討論

對(duì)比空白組發(fā)現(xiàn)革蘭氏陽(yáng)性菌中，對(duì)單核細(xì)胞增生李斯特菌的抑菌效果最好，其次是白色念珠球菌，抑菌率分別為45.8%和41.5%；革蘭氏陰性菌中，對(duì)志賀氏菌的抑制效果最好，其次是沙門氏菌，抑菌率為43.29%和34.84%。

針對(duì)金黃色葡萄球菌，做了濃度為4 mg/L的 GO、CS、GO/CS、GO/CS（APS）材料的抑菌實(shí)驗(yàn)。得出，CS和GO對(duì)金黃色葡萄球菌抑菌效果好，但偶聯(lián)后的復(fù)合材料的抑菌效果遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過(guò)他們各自的抑菌能力。

5 結(jié)語(yǔ)

本文主要探究CS/GO（APS）復(fù)合凝膠球?qū)Ω锾m氏陽(yáng)性菌和革蘭氏陰性菌的抑菌作用，抑菌效果最好的是單核細(xì)胞增生李斯特菌和志賀氏菌，而且偶聯(lián)后材料抑菌效果更好。對(duì)抑菌機(jī)理做以下猜想：偶聯(lián)后材料所帶有的正電荷數(shù)增多，與帶有負(fù)電荷的細(xì)胞膜相結(jié)合的靜電相互作用增強(qiáng)，改變了膜的通透性，殺死細(xì)菌；偶聯(lián)后結(jié)構(gòu)易與病原菌表面的蛋白結(jié)合，干擾其正常生理活動(dòng)，抑制生長(zhǎng)，直至死亡。