腸肝菌科細菌碳青霉烯酶基因檢測及流行病學分析

廣東省佛山市順德區廣州中醫藥大學順德醫院附屬均安醫院（528329）梁曉靜

1 資料與方法

1.1 一般資料 ①選擇2017年～2018年收集的1164株腸桿菌科菌株開展研究，選擇對于碳青霉烯類不敏感的腸桿菌科細菌共計152株（樣本來源1）。②選擇2017年～2018年我院臨床分離的腸桿菌科菌株506株，擇選亞胺培南≥2mg/L細菌菌株216株（樣本來源2）。③選擇2017～2018年臨床分離腸桿菌科細菌318株，選擇對于亞胺培南/美羅培南腸桿菌科細菌34株（樣本來源3）。

1.2 方法 ①碳青霉烯基因酶篩選以及確定：本實驗使用Hodge實驗開展基因酶篩選。加入苯硼酸以及苯唑西林改良后的實驗和EDTA協同實驗針對碳青霉烯藥物敏感性下降的402株腸桿菌科細菌開展酶表型篩查。并使用PCR擴增法針對相關基因開展了擴增以及測序。所使用的引物參照文獻報道進行，針對陽性產物實施測序以及確認；②藥物敏感性檢測；③實施脈沖腸凝膠電泳；④多位點序列分型；⑤接合實驗。

1.3 統計學方法 本實驗利用描述性方式，完成統計學分析工作。

2 結果

2.1 耐藥基因測定 本實驗內，在碳青霉烯藥物敏感度下降的細菌內，酶基因攜帶率為26.4%。表型篩查以及基因檢測符合率達到了100.00%。在此同時，針對生產酶菌株用PCR擴增法檢測喹諾酮、ESBLs等諸多耐藥基因以及整合子，106株產碳青霉烯腸桿菌科細菌也攜帶多類耐藥基因，其整合子的攜帶率達到了5.7%。其為I類整合子。

2.2 藥物敏感實驗結果 針對106株腸桿菌科細菌使用瓊脂稀釋法開展厄他培南、亞胺培南、美羅培南以及其余臨床常見MIC測定，見附表。

附表 產碳青霉烯酶腸桿菌細菌針對抗菌藥物MIC分布詳情（株）

2.3 產碳青霉烯酶腸桿菌水平傳播和分子流行病學分析情況 ①PFGE分型情況 將66株產碳青霉烯克雷伯菌砸分為三型2個亞型。18株產碳青霉烯弗勞地砸枸緣酸桿菌分為四個亞型，10株產碳青霉烯酶陰溝腸桿菌分成4個型。12株產碳青霉烯情酶大腸埃希菌為相同型。②接合實驗 把106株產碳青霉烯酶類的腸桿菌細菌和大腸埃希菌EC600完成接合。取得56株帶有碳青霉烯耐藥基因接合子。其接合成功率達到了52.8%。③MLST 66株產碳青霉烯酶克雷伯菌使用MLST，對內部存在的7個管家基因片段經PCR擴增以及測序，得出引物。且經比對證實。在58株產KPC-2型碳青霉烯克雷伯菌均是ST11。攜帶IMP-4內，6株為ST876（來自相同醫院）。2株為ST147（來自于同一地）。

3 討論

目前，諸多體外藥敏監測結果表示，替加環素以及多黏菌素針對碳青霉烯酶非敏感腸桿菌科細菌依舊保持高度活性。因為多黏菌素，有著高毒性的特征。因此其在使用上受到了一定限制。針對臨床多重耐藥中包含碳青霉烯酶耐藥腸桿菌科細菌依舊保留了較為良好的體外抗菌活性，因此其可以被視為臨床治療多重耐藥菌感染的新的選擇方向[1][2]。本實驗利用結合實驗針對106株產碳青霉烯酶腸桿菌科細菌分別和大腸埃希菌EC600完成結合，有效研究碳青霉烯酶耐藥基因于不同腸桿菌科細菌間水平傳遞狀況。結果證實：碳青霉烯酶基因結合成功率為52.8%，證實碳青霉烯酶基因很容易與不同腸桿菌科細菌之間呈現出水平轉移現象。這必須引起醫院的高度重視，以有效防止院內感染暴發流行。