無菌制劑無菌水平的影響因素

王佳鑫

摘? 要：無菌保證水平，即SAL，Sterility Assurance Level，又稱微生物存活概率。而對于無菌制劑來說，控制微生物污染是極其重要的。由于終端滅菌的制劑在生產過程中存在某種程度的微生物污染是不可避免的，為此對無菌保證進行數學性評估而提出了"無菌保證水平"。本文對無菌制劑無菌水平的影響因素進行綜述。

關鍵詞：無菌水平;影響;因素

無菌制劑是指法定藥品標準中列有無菌檢查項目的制劑，包括大小容量注射劑。無菌物品是指物品中不含任何活的微生物，實際上無法證明產品中沒有活的微生物存在，因為對于任何一批滅菌物品而言，絕對無菌既無法保證也無法用實驗來證實無菌保證水平，即SAL，Sterility Assurance Level，又稱微生物存活概率。而對于無菌制劑來說，控制微生物污染是極其重要的。由于終端滅菌的制劑在生產過程中存在某種程度的微生物污染是不可避免的，為此對無菌保證進行數學性評估而提出了“無菌保證水平”。本文對無菌制劑無菌水平的影響因素進行綜述。

1 無菌檢查法的局限性

有報道顯示，無菌檢查時應用的培養液只適用于臨床檢驗細菌與真菌，并非是多種真菌與細菌生長的最佳條件。無菌檢查在《中華人民共和國藥典》規定中屬于抽樣檢查，無法100%檢驗整批產品，具有顯著局限性。驗證無菌檢驗方法是保障無菌檢查結果可靠性及準確性，但產品絕對無菌這一結論則無法得出。

2 無菌制劑無菌水平的影響因素

無菌生產工藝就是必須在無菌控制條件下生產無菌制劑的方法，并定期對無菌生產工藝進行驗證，驗證內容包括環境空氣過濾系統有效性、工藝用水系統、設備和人員清潔及培養液模擬灌裝實驗等。微生物的來源主要有以下3種。

2.1 人員

人是潔凈區環境的最大污染源，在無菌室由操作人員引起的污染將達到總污染原因的百分之九十五。人員幾乎涉及到所有的生產步驟，接觸和操作引起的污染仍是生產企業面臨的主要問題。

2.2 工藝用水

注射用水與注射劑在生產過程中污染可能性最高的發熱性物質就是細菌內毒素。細菌內毒素由革蘭陰性菌產生，而水源性微生物絕大多數為革蘭陰性菌。細菌內毒素為外源性致熱原，它可激活中性粒細胞等，會使人致病甚至死亡，對藥品質量產生不良的影響。細菌內毒素具有耐熱性，需用干熱滅菌（250℃，30min以上）才能去除。

2.3 環境

革蘭陽性菌、革蘭陰性菌是根據對細菌進行革蘭氏染色的結果來區分的，如果將細菌作革蘭氏染色，凡染后菌體呈紫色的，稱“革蘭氏陽性菌”，菌體呈伊紅色，稱“革蘭氏陰性菌”。空氣中的微生物基本為革蘭陽性菌，人體攜帶的常見葡萄球菌和唾液鏈球菌，而沃氏葡萄球菌、藤黃微球菌和芽孢桿菌均為常見環境菌。產生芽孢的細菌都是革蘭陽性菌，芽孢對熱、干燥、輻射、化學、消毒劑等理化因素均有強大的抵抗力。文獻報道，對制藥企業生產環境中分離的92株葡萄球菌菌種鑒定，結果表明92株葡萄球菌均為凝固酶陰性菌，可分為8個葡萄球菌菌種，其中表皮葡萄球菌污染率最高（27.2%）[1]。企業可以建立潔凈區微生物數據庫。建立潔凈區微生物數據庫是追溯產品微生物污染來源的有效方法，能夠為無菌藥品GMP生產過程制定有效的控制措施提供依據，并使其更有針對性[2]。

3 無菌安全水平提升的措施

3.1 人員培訓

空氣凈化和物理隔離可以有效阻斷大部分微生物的傳播，但接觸和操作引起的污染仍是生產企業面臨的主要問題，加強對無菌操作人員的培訓和管理是解決這一問題的關鍵[3]。無菌操作技術是加強無菌制劑生產過程中無菌控制、保障無菌制劑質量的有效方法[4]。目前已無菌制劑生產企業均建立了完善的質量管理體系，能否全面、細致、周到地執行和實施GMP有效執行是關鍵。GMP培訓是提高藥品生產企業人員素質、保障員工掌握本崗位的基本理論知識、操作規程和實際操作技能的有效手段。應對員工開展各類培訓，對不同員工所在崗位需要掌握的知識和技能進行針對性培訓，確保企業人員能明確掌握崗位的實際操作技能、操作規范及基本理論知識，從而能使藥品質量的基礎得到保證。同時反思現行的無菌培訓，要經常對員工進行藥害事件的宣傳教育工作，增強責任心，使其在工作中自覺地按照標準操作規程操作。

3.2 工藝用水

企業內部應設立警戒水平及糾偏限度，以便及時發現不良趨勢，確保水系統的細菌內毒素水平和微生物污染水平得到有效的控制。

3.3 環境管理

環境管理的主要思想是防止空氣、設備、設施以及操作人員的污染和交叉污染。環境監測包括懸浮粒子、空氣浮游菌、沉降菌、設備和設施表面的微生物以及操作人員的衛生狀況監測等。沉降菌、浮游菌及表面微生物這3種監測的原理是不同的，針對不同的微生物，不能完全相互替代。沉降菌是用標準提及的方法收集到的活微生物粒子，通過專用的培養基，在適宜的生長條件下繁殖到可見的菌落數。浮游菌（英文名：airborne microbe）就是指懸浮在空氣中的活微生物粒子。表面微生物：是指在正常的環境下，物體體表及或與外界相通的腔道中，都存在著不同種類和數量的微生物，可以是自身產生的，或者通過接觸、空氣氣流而傳播。通過對潔凈室/區空氣、設備、設施表面以及操作人員表面微生物的采集、鑒別可了解潔凈室的清潔、消毒步驟的有效性或缺陷性。

3.4 注重無菌生產工藝驗證

要定期進行培養液模擬灌裝驗證，使用培養液作為藥品的替代品進行無菌模擬生產，證明經過完整的生產過程，對無菌工藝進行驗證。無菌分裝粉針劑的質量保證主要依賴于無菌生產線的基本條件和對生產工藝各環節嚴格的質量控制。培養基模擬灌裝驗證試驗最少在線灌裝3批，每瓶產品均應進行無菌檢查。除菌過濾系統適應性驗證試驗包括過濾系統相容性測試、過濾前后濾膜完整性測試、濾膜的微生物截留量QOS商滅測試。

3.5 現場監督

現場監督是質量保證（quality assurance，QA）的一部分。QA人員的主要職責就是對生產全過程進行控制，為了滿足品質的要求而進行的全面有效的質量管理活動。QA人員工作的性質就是要找別人的缺點與不足，糾正生產過程中出現的差錯及不規范行為，做到防患于未然。QA人員不僅是對不規范行為進行扣罰還要能和操作人員共同分析問題，從根本上幫助操作人員解決問題，得到操作人員的理解和尊重。

參考文獻

[1]李瓊瓊，宋明輝，秦峰，劉浩，楊美成.制藥企業生產環境中污染葡萄球菌菌種鑒定方法的比較評價及毒素基因調查分析[J].中國醫藥工業雜志，2019（04）.

[2]戶美玲，陳佩，嚴東珍，孟麗.建立潔凈區微生物數據庫與無菌藥品GMP生產過程控制的探討[J].微生物學免疫學進展，2013（03）.

[3]范一靈，馮震，鐘瑋，楊燕，蔣波，房蕊，鮑英，徐偉東.無菌藥品生產企業核心區微生物污染調查與分析[J].中國藥事，2014（06）.

[4]崔菊霞.無菌操作技術在無菌制劑生產中的應用[J].中國藥事，2013（02）.