白花蛇舌草中多糖的提取工藝研究

李思月 曹丹 王多 付夢露 陳文英 王青

摘?要：本實驗采用超聲波提取法對白花蛇舌草中的多糖進行提取，以多糖得率為評價指標(biāo)，采用單因素試驗對料液比、提取時間、提取溫度、超聲功率進行研究，并進行驗證，優(yōu)選最佳提取工藝。結(jié)果表明，提取多糖的最佳工藝為料液比1：6，超聲功率110w，提度60℃，提取60min，在最佳條件下連續(xù)進行3次提取，多糖得率可達3.42%。

關(guān)鍵詞：白花蛇舌草;多糖提取;超聲波法

1儀器與試藥

儀器：Branson2200超聲波清洗儀（上海方正電子電器有限公司）;BT-125D電子分析天平（普林巴克科學(xué)儀器有限公司）;TU-1810紫外可見分光光度計（北京普新通用儀器有限責(zé)任公司）;旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上海亞榮生化儀器廠）。

試藥：白花蛇舌草，購于陜西康譽藥業(yè)有限公司，經(jīng)鑒定為茜草科草本植物;葡萄糖對照品（批號2019015，北京壇墨質(zhì)檢科技有限公司）;山東旭晨化工科技有限公司）;無水碳酸氫鈉（天津天力化學(xué)試劑有限公司）;乙醇、正丁醇、無水乙醇等為分析純。

2 研究方法

2.1對照品溶液的配制

取燥至不含結(jié)晶水的糖對照品約10mg，精定，于10ml的容瓶中，加入，溶解，定容至刻度，即得0.1mg/ml的葡萄糖對照品溶液。

2.2苯酚溶液的制備

取100g苯酚，加0.1g鋁片和0.05g氫氧化鈉，加熱蒸餾，收集182℃的餾分，取此餾分5ml加水溶解并稀釋至100ml，搖勻，即得5%的苯酚溶液，置棕色瓶內(nèi)備用。

2.3最大吸收波長的確定

精密吸取1ml葡萄糖對照品溶液置于10ml容量瓶中，立即加入濃硫酸5.0ml，6%苯酚溶液1.0ml，靜置20min，搖勻，放至室溫，進行測定，空白試驗為蒸餾水，在200～600nm波長范圍內(nèi)掃描，測得在488nm處出現(xiàn)最大吸收。

2.4標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制

分別精密吸取0ml，0.1ml，0.2ml，0.4ml，0.6ml，0.8ml，1.0ml的葡萄糖對照品溶液，置于10ml的瓶中，加水定容至刻度，搖勻，濾過，分別取續(xù)濾液1.0ml至試管中，再加入濃硫酸5.0ml，苯酚溶液1ml，放置室溫，以0ml容量瓶為空白對照，在488nm處測吸光度，以對照品濃度為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線為y=10.971x+0.0042，在0.01～0.10mg/ml范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，R2=0.9996

2.5多糖的提取方法

稱取白花蛇舌草適量烘干，加一定量水，采用提取2次，濾過，濾液濃縮至原體積一半，加2倍量乙醇，置至沉淀析出，抽濾，沉淀加15ml的水使溶全，加-正混合溶液，充分振搖，除去含有的蛋白，離心，用2mg/ml的氫氧化鈉調(diào)節(jié)上清液的PH等于7，離心后，加入乙醇，此時乙醇為原來的2倍量，析出沉淀，將沉淀物用等真燥至重，即得白舌草干多糖。

2.6多糖得率計算

按2.5下工藝流程制備干多糖，將干多糖置于100mL容量瓶中溶解后定容，得到多糖溶液。并采用硫酸-苯酚顯色法進行顯色。在490nm出測定吸光度值，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算濃度。

Y=（C×V×D）×10-6/m×100%

其中，Y為多糖得率;C為多糖濃度;D為稀釋倍數(shù);m為半枝蓮質(zhì)量;V為配置溶液的體積。

3提取工藝研究

3.1料液比對多糖得率的影響

在確定110w，提取60min，提度60℃三者保持不變時，取白花蛇舌草，分別考察料液比為1：4，1：5，1：6，1：7，1：8對多糖得率的影響。按照上述實驗方法結(jié)果得，多糖得率隨著料液比先增加后逐漸減少。故選擇料液比為1：4，1：6。

3.2提取時間對多糖得率的影響

在比為1：6，60℃，超率110w三者不變時，取白花蛇舌草，考察超聲提取時間為50，60，70，80，90min時，按照上述的實驗方法計算多糖得率，結(jié)果在提取時間為60min時，多糖得率最大，隨著時間延長，依次降低故提取時間為60min。

3.3提取溫度對多糖得率的影響

在確定1：6，110w，為60min三者不變時，取白花蛇舌草，考察提取溫度為50，60，70，80，90℃時，多糖得率的情況，按照上述的實驗方法計算多糖得率，結(jié)果可見：隨的升高，多糖先升高，再逐漸下降，故提取溫度為60℃。

3.4超聲功率對多糖得率的影響

在確定1：6，60min，提度60℃三者不變時，取白花蛇舌草，考察超聲功率為70，80，90，100，110w時，多糖得率的情況，按照上述的實驗方法計算多糖得率，結(jié)果可見：隨超聲功率增加而增大，所以，超聲功率越大，多糖的得率越高，故超聲功率水平為110w。

3.5最佳提取工藝驗證

精密稱取白花蛇舌草藥材10g，根據(jù)單因素試驗確定最佳水平進行提取，平行進行3次，按照“2.6”項下方法計算多糖得率，結(jié)果在最佳條件下，白花蛇舌草多糖得率平均為3.42%。

4結(jié)論

本實驗在提取過程中為了減少干擾，首先采用乙醇去除所含的單糖，低聚糖及苷類等干擾性成分，采用了單因素試驗考察影響白花蛇舌草多糖得率的因素并得到各因素的最高水平并進行驗證，最后得在提取60℃、提60min、料比1：6、超率110W，率最高為3.42%，實驗過程中采用的超聲波法在實驗室中簡單易行，操作方法簡單，為白花蛇舌草多糖的提取工藝提供了一定的理論基礎(chǔ)，為其在藥理作用和臨床應(yīng)用研究也提供了幫助。

參考文獻

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基金項目：本文系2019年大學(xué)生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)訓(xùn)練計劃項目省級立項項目，項目名稱為白花蛇舌草中多酚類成分提取的工藝優(yōu)化及抗氧化活性研究，項目編號為S201913123040;

作者簡介：李思月，陜西國際商貿(mào)學(xué)院醫(yī)藥學(xué)院藥學(xué)2016級

通訊作者：王青，講師，主要從事中藥化學(xué)與質(zhì)量控制的教學(xué)與科研工作