miR-21、動脈波速指標及動脈壓差力容積指標評估冠狀動脈粥樣硬化的有效性研究

余朝萍，劉天虎，李 剛，藍亞平，黃 瑛，王曉梅，張 波

四川省成都市郫都區(qū)人民醫(yī)院心血管內科，四川成都 611730

動脈粥樣硬化(AS)是造成心腦血管疾病的主要誘因之一，而冠狀動脈(簡稱冠脈)粥樣硬化(CAS)是AS全身性疾病所表現(xiàn)的局部疾病狀態(tài)。CAS不僅是冠心病(CAD)的病理基礎，還可引起急性冠脈綜合征、心力衰竭、心源性猝死等疾病，嚴重影響人們生命健康。CAS早期病理特征之一是冠脈鈣化，臨床癥狀主要表現(xiàn)為心慌氣短、胸痛、胸悶等[1]。國外研究發(fā)現(xiàn)，動脈波速指標(AVI)及動脈壓差力容積指標(API)的測量方法無創(chuàng)、簡單、快捷，可適用于動脈硬化程度的測定及彈性狀況的評估[2]，且與傳統(tǒng)測量指標肱踝脈搏波傳導速度(baPWV)的檢測結果一致，但國內相關研究鮮有報道。近年來，研究發(fā)現(xiàn)微小RNA(miRNA)與心血管疾病及多種炎癥的發(fā)生、發(fā)展密切相關，且可作為疾病診斷的循環(huán)標志物。有研究認為miR-21在心血管疾病的進程中發(fā)揮著重要的作用，與AS密切相關[3]。本研究擬選取CAD患者為研究對象，通過探討miR-21、AVI、API水平與患者一般資料的相關性，研究miR-21、AVI、API聯(lián)合評估CAS的有效性，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2017年9月至2018年5月在本院就診的經心臟冠脈造影確診為CAD患者(CAD組)110例，其中男58例、女52例，平均年齡(54.8±9.8)歲；選取同期本院健康體檢者(對照組)90例，其中男47例、女43例，平均年齡(53.6±10.2)歲。排除標準：甲狀腺功能亢進癥、肝腎功能異常或肝腎衰竭、腦梗死、瓣膜性心臟病、惡性腫瘤、擴張型心肌病、糖尿病、血栓栓塞及其他炎性疾病等患者。

1.2方法

1.2.1標本采集 抽取空腹狀態(tài)下CAD組和對照組外周靜脈血2.5 mL于抗凝管中，以3 000 r/min離心15min，分離血漿，保存至-80 ℃冰箱備用。

1.2.2實驗室指標檢測 除身高、年齡、體質量外，需常規(guī)檢測CAD組和對照組生化指標丙氨酸氨基轉移酶(ALT)、天門冬氨酸氨基轉移酶(AST)、肌酐(Cr)、空腹血糖(FPG)、三酰甘油(TG)、總膽固醇(CHOL)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)、同型半胱氨酸(Hcy)、超敏C反應蛋白(hs-CRP)等生化指標水平，以及測量指標心率、舒張壓、收縮壓、脈壓差水平，另外采集CAD組冠脈鈣化積分(CACS)。

1.2.3實時熒光定量聚合酶鏈反應(qRT-PCR) 采用莖環(huán)法設計并合成引物(廣州華大基因)。miR-21(miRBas NO:MIMAT0000076)的上游引物：5′-CGGGGAGCTTATCAGACTG-3′；通用下游引物：5′-CAGTGCGTGTCGTGGAGT-3′；U6內參基因上游引物：5′-CTCGCTTCGGCAGCACA-3′；下游引物：5′-AACGCTTCACGAATTTGCGT-3′。根據(jù)使用說明書，采用Trizol試劑(Invitrogen，15596026)從血漿標本中提取總RNA，測定RNA純度及水平后，使用反轉錄試劑盒(Takara，RR047a)將RNA反轉錄為cDNA，使用SYBR Green qPCR Mix(Monad，MQ10301)進行qRT-PCR分析，儀器為Ariamx Real-Time PCR(Agilent Technologies)。反應條件：95 ℃ 30 s；95 ℃ 5 s，60 ℃ 30 s，72 ℃ 30 s，40個循環(huán)。試驗步驟重復3次，結果取平均值，按照2-ΔΔCt法分析miR-21的相對表達水平。

1.2.4AVI和API測定 使用動脈脈搏波速檢測儀(信泰光學，AVE-1500型)對CAD組和對照組進行AVI和API測量。受檢者平靜狀態(tài)下，坐立位，袖帶系于左上臂，氣囊標志處需對準肱動脈，袖帶下緣距肘窩橫紋2～3 cm。兩次測量間隔3 min，結果取平均值。

2 結 果

2.1CAD患者及健康體檢者的一般資料比較 兩組的年齡、體質量、身高、ALT、AST、Cr、FPG、心率比較，差異均無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，CAD患者的TG、CHOL、LDL-C、Hcy、hs-CRP、舒張壓、收縮壓、脈壓差均顯著高于健康體檢者(P<0.05)。見表1。

2.2CAD患者和健康體檢者AVI、API與各臨床指標的相關性分析 CAD患者的AVI和API顯著高于健康體檢者，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。采用Pearson相關分析健康體檢者和CAD患者AVI、API與各臨床指標的相關性，結果表明，健康體檢者的AVI、API與ALT、AST、Cr、FPG、TG、CHOL、LDL-C、Hcy、hs-CRP、舒張壓、收縮壓、脈壓差均無相關性(P>0.05)，與年齡呈正相關(P<0.05)；CAD患者的AVI、API與ALT、AST、Cr、FPG、舒張壓均無相關性(P>0.05)，與年齡、TG、CHOL、LDL-C、Hcy、hs-CRP、收縮壓、脈壓差、CACS均呈正相關(P<0.05)。見表2～3。

表1 兩組一般資料比較

表2 兩組的AVI、API測量結果

表3 對照組和CAD組的AVI、API與各指標的相關性分析結果

續(xù)表3 對照組和CAD組的AVI、API與各指標的相關性分析結果

2.3CAD患者和健康體檢者血漿miR-21水平與AVI、API的相關性分析 利用qRT-PCR法檢測CAD患者和健康體檢者血漿miR-21的相對表達水平，結果表明，CAD患者的血漿miR-21水平(1.65±0.37)顯著高于健康體檢者(0.95±0.06),差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。采用Pearson相關分析健康體檢者和CAD患者血漿miR-21水平與AVI、API的相關性，結果表明，健康體檢者血漿miR-21水平與AVI、API無顯著相關性(r=0.108、0.097，P>0.05)，CAD患者血漿miR-21水平與AVI、API呈顯著正相關(r=0.792、0.789，P<0.05)。

3 討 論

臨床實踐中，AS的常規(guī)物理檢測方法包括動脈造影和多普勒超聲檢查等，但以上方法專業(yè)性高，費用較昂貴，且需在特定環(huán)境下進行檢測，不適用于人群普查及早期檢測。主動脈脈搏波傳導速度(APWV)是目前測量AS的指標，因其檢測部位位于腹股溝區(qū)域，具有一定的局限性。baPWV與APWV測定結果一致，檢測部位為上臂和下肢，操作更為簡便，故baPWV是目前臨床應用較多且有效的動脈功能評估指標。

使用便攜式動脈脈搏波速檢測儀檢測AVI和API，可分別反映受檢者中心動脈整體僵硬度以及肱動脈局部僵硬度。OKAMOTO等[4]研究發(fā)現(xiàn)，AVI和API與年齡、收縮壓、舒張壓、FPG獨立相關。羅小蔓等[5]應用AVI和API評估高血壓患者動脈硬化的有效性，但僅證明AVI和API與baPWV評估結果相似，且與年齡呈顯著正相關，且未進行更深入的分析。

除年齡外，血壓、血脂異常也已被證明是CAS發(fā)生、發(fā)展的獨立危險因素，且隨著年齡的增加，動脈彈性逐漸降低，也可在一定程度上影響人體的血壓、血脂水平。血脂代謝異常可引起血漿游離脂肪水平上升，進而使LDL-C合成和釋放增加，富含TG的脂蛋白顆粒侵入冠脈血管壁，造成冠脈內膜脂質堆積，易引發(fā)慢性炎性反應。Hcy和hs-CRP水平升高可引起血管內皮功能損傷、氧化應激反應等，加速斑塊的形成，導致CAS的發(fā)生。血壓水平的升高可增加冠脈中層內膜的壓力，易導致內皮細胞的功能受損，進而加快CAS進程。JAMEE等[6]的研究證實，CAD的相關危險因素主要包括肥胖、高血壓、吸煙、高膽固醇水平和高TG水平等。朱旭等[7]對102例CAD患者進行生化指標檢測發(fā)現(xiàn)，CAD患者的血清hs-CRP、TG、CHOL及LDL-C水平均顯著高于健康對照者。

本研究結果發(fā)現(xiàn)，CAD患者和健康體檢者的AVI和API均與年齡呈正相關，且AVI與年齡的相關性系數(shù)r高于API，符合動脈硬化程度隨年齡增長而升高的趨勢，反映了AVI和API檢測結果的可靠性。同時，本研究發(fā)現(xiàn)CAD患者的AVI和API顯著高于健康體檢者，與TG、CHOL、LDL-C、Hcy、hs-CRP、收縮壓、脈壓差均呈顯著正相關，這與疾病的發(fā)生、發(fā)展規(guī)律相一致，表明AVI和API對CAD的監(jiān)測具有一定的臨床價值。此外，本研究還發(fā)現(xiàn)AVI、API與CACS呈顯著正相關，而CACS是反映冠脈硬化、斑塊負荷、冠脈狹窄程度的常見臨床指標，表明AVI和API也可反映CAS的病變程度，是一種科學、有效的動脈硬化評估指標。

外周血多種miRNAs測定可用于CAD的診斷和預后評估。CHEN等[8]研究證實，miR-17-5p可作為冠脈疾病中CAS嚴重程度的循環(huán)生物標志物。RAITOHARJU等[9]發(fā)現(xiàn)，miR-21、miR-210、miR-34a和miR-146a/b在AS患者體內均顯著上調，參與了AS的發(fā)生、發(fā)展進程。目前研究發(fā)現(xiàn)，miR-21廣泛存在于多種心血管細胞中，可調控轉化生長因子-β及其受體[10]，也可促進血管平滑肌細胞中蛋白聚糖的分泌，促進血管內膜中脂蛋白的積聚，加快AS進程。本研究發(fā)現(xiàn)，CAD患者的血漿miR-21水平顯著高于健康體檢者，與既往結果一致[11]，證實了miR-21與CAD的發(fā)生、發(fā)展密切相關。本研究發(fā)現(xiàn)，CAD患者血漿miR-21水平與AVI、API呈顯著正相關，表明miR-21與CAS病變程度密切相關，提示miR-21可作為CAD冠脈硬化程度的循環(huán)生物標志物。

綜上所述，本研究通過檢測CAD患者血漿miR-21水平以及AVI和API，并與年齡、血壓、血脂等臨床資料進行相關性分析，發(fā)現(xiàn)CAD患者AVI、API與年齡、TG、CHOL、LDL-C、Hcy、hs-CRP、收縮壓、脈壓差均有顯著相關性，miR-21水平與AVI、API呈正相關。這提示miR-21、AVI和API均與CAS的發(fā)生、發(fā)展密切相關，可作為評估冠脈硬化程度的有效指標，具有一定的臨床應用價值。