HKαα和anti-HKαα基因型珠蛋白生成障礙性貧血的基因檢測分析

劉沃滿,唐玉芬,李祝坤,譚滿勝,聶俊瑋

廣東省茂名市婦幼保健院遺傳優生優育中心，廣東茂名 525000

珠蛋白生成障礙性貧血又稱地中海貧血(以下簡稱地貧)，是由于珠蛋白基因發生缺陷，致使珠蛋白鏈合成減少或缺失，使形成血紅蛋白的α-鏈/非α-鏈比例失衡，而導致的一組遺傳性溶血性疾病，輕者可無臨床表現，重者以進行性溶血性貧血為主要特征。在臨床上地貧主要分為α-地貧和β-地貧。α-地貧主要分為缺失型和非缺失型。缺失型主要由東南亞缺失(--SEA)、右缺失(-α3.7)和左缺失(-α4.2)引起[1]。HKαα和anti-HKαα基因型是罕見的α-地貧基因型。HKαα是α球蛋白基因通過非平衡交換，形成同時包含-α3.7和anti4.2片段的重組基因[2]，而anti-HKαα是HKαα的衍生產物，是包含了-α4.2和anti3.7片段的重組基因。由于目前我國常規的α-地貧基因檢測只能檢測--SEA、-α3.7和-α4.2缺失，而不能檢測anti4.2和anti3.7片段，從而可能導致HKαα和anti-HKαα基因型被誤診為-α3.7和-α4.2基因型。本文對36 031例樣本中檢測到的HKαα和anti-HKαα基因型進行了總結和分析，現報道如下。

1 資料與方法

1．1一般資料 收集2015年6月至2018年12月于本院進行常規地貧基因檢測的樣本36 031例，應用巢式PCR技術對跨越斷裂點PCR(gap-PCR)電泳同時出現正常條帶α2、右缺失(-α3.7)或左缺失(-α4.2)和東南亞缺失(--SEA)，-α3.7條帶比α2條帶細弱和-α4.2條帶比α2條帶細弱的樣本進行HKαα和anti-HKαα基因型檢測。患者或監護人均簽署知情同意書，本研究經本院倫理委員會批準。

1.2方法

1.2.1DNA提取 采用廈門致善Lab-Aid 820核酸提取Mini試劑進行外周血或臍血的DNA提取；羊水或絨毛樣本DNA采用深圳亞能生物技術有限公司生產的提取試劑盒，按試劑盒說明書提取步驟進行DNA的提取。

1.2.2缺失型α-地貧基因檢測 采用gap-PCR進行3種常見缺失型α-地貧基因(--SEA/αα、-α3.7/αα、-α4.2/αα)的檢測，嚴格按照試劑盒說明書進行。采用深圳亞能生物技術有限公司生產的基因診斷試劑盒進行檢測。

1.2.3非缺失型α-地貧點突變和β-地貧點突變基因檢測 采用反向斑點雜交法(RDB)檢測3種α-地貧基因點突變(αCSα、αWSα和αQSα)和17種β-地貧基因點突變(-28、-29、-30、-32、CD14-15、CD17、βE、CD27-28、CD31、CD41-42、CD43、CD71-72、IVS-Ⅰ-1、IVS-Ⅰ-5、IVS-Ⅱ-654、CAP+1、initiation eondon)，嚴格按照試劑盒說明書進行。采用深圳亞能生物技術有限公司生產的基因診斷試劑盒進行檢測。

1.2.4HKαα和anti-HKαα基因型分析 將同時出現正常條帶α2、右缺失(-α3.7)或左缺失(-α4.2)和東南亞缺失(--SEA)的樣本，-α3.7條帶比α2條帶細弱的樣本和-α4.2條帶比α2條帶細弱的樣本送往深圳亞能生物技術有限公司，采用巢式PCR法進行HKαα或anti-HKαα基因型檢測，檢測結果結合常見α-地貧基因檢測結果及家系診斷結果綜合分析、判斷樣本的基因型。

2 結 果

2.1缺失型α-地貧基因診斷結果 在36 031例樣本中出現22例陽性結果，其中17例gap-PCR電泳同時出現正常條帶α2、右缺失(-α3.7)或左缺失(-α4.2)和東南亞缺失(--SEA)，4例-α3.7條帶比α2條帶細弱，1例-α4.2條帶比α2條帶細弱。

2.2巢式PCR基因檢測結果 共檢測到20例HKαα和2例anti-HKαα病例，其中HKαα/αα 4例(含1例復合IVS-Ⅱ-654雜合子)，HKαα/-α4.23例，HKαα/--SEA13例(含1例復合CD41-42雜合子)，anti-HKαα/αα 1例，anti-HKαα/--SEA1例。HKαα與anti-HKαα檢出率分別為0.056%和0.005%。

2.3HKαα基因型中非缺失型α-地貧及β-地貧點突變基因診斷結果 20例HKαα病例中，檢出1例HKαα/αα同時復合IVS-Ⅱ-654雜合子，1例HKαα/--SEA同時復合IVS-Ⅱ-654雜合子，1例HKαα/--SEA同時復合CD41-42雜合子，見表1。

表1 22例HKαα和anti-HKαα基因型地貧基因檢測結果及血液學指標分析

表2 2個家系成員地貧基因檢測結果及血液學指標分析

2.4家系結果 本研究對2個家系進行了分析，其中家系2進行了產前診斷。家系2中母親的地貧基因型為-α3.7/αα，父親的地貧基因型為--SEA/αα，胎兒缺失型α-地貧檢測發現gap-PCR電泳同時出現正常條帶α2、右缺失(-α3.7)和東南亞缺失(--SEA)3個條帶，懷疑為HKαα/--SEA，遂將母親及胎兒的樣本送往深圳亞能生物技術有限公司，采用巢式PCR法進行HKαα基因檢測，經檢測分析，母親基因型糾正為HKαα/αα，胎兒基因型為HKαα/--SEA。經過遺傳咨詢，夫婦選擇繼續妊娠。見表2。

3 討 論

α-地貧是我國南方各省地貧基因攜帶率最高、影響最大的遺傳病，廣東省育齡人群α-地貧基因的攜帶率達13%[3]。-α3.7/和-α4.2/主要是由于α珠蛋白基因簇同源序列不等交換的結果，一條16號染色體缺失了3.7 kb(-α3.7/)或4.2 kb(-α4.2/)，另一條染色體則形成α三聯體(αααanti3.7/)或α三聯體(αααanti4.2/)[4]。HKαα和anti-HKαα基因型是罕見的α-地貧基因型。HKαα是同時含有-α3.7缺失和αααanti4.2重復的交叉連接片段，anti-HKαα則是同時含有-α4.2缺失和αααanti3.7重復的交叉連接片段。WANG等[2]于2005年在中國香港鑒定并以“香港”(HK)命名了HKαα基因型。SHANG等[5]報道了廣西地區HKαα和anti-HKαα基因型攜帶率分別為0.07%和0.02%。在本研究中，從茂名地區36 031例可疑地貧病例篩查中，共檢測到20例HKαα和2例anti-HKαα病例，攜帶率分別為0.056%和0.005%，該結果與廣西地區報道相近。

我國目前以gap-PCR技術檢測常見缺失型α-地貧(--SEA、-α3.7和-α4.2)[6]，但該技術不能檢測αααanti4.2和αααanti3.7片段，導致HKαα和anti-HKαα被誤診為-α3.7和-α4.2，造成漏診、誤診[7]。在本研究中，4例gap-PCR電泳結果顯示-α3.7條帶比α2條帶細弱，經巢式PCR確定為HKαα，1例gap-PCR電泳結果顯示為-α4.2條帶比α2條帶細弱，經巢式PCR確定為anti-HKαα。因此，對gap-PCR電泳結果顯示為-α3.7或-α4.2條帶細弱而α2條帶濃粗的病例，要考慮為罕見的α-地貧基因型的可能，進一步采用巢式PCR法進行檢測，這樣可以減少不必要的有創性產前診斷。

目前的研究發現，HKαα和 anti-HKαα基因型都可表達兩個正常的α-珠蛋白基因功能，具有正常的臨床及血液學表現[8]。當夫婦雙方之一攜帶HKαα或anti-HKαα基因型，而另一方攜帶α0-地貧基因時，他們就有1/4的機會生育HKαα/--SEA或anti-HKαα/--SEA的孩子。當HKαα/--SEA或anti-HKαα/--SEA被誤診為Hb H病(-α3.7/--SEA或-α4.2/--SEA)時[9]，會導致醫生在產前診斷、遺傳咨詢中給出錯誤的建議，給夫婦雙方造成較大的精神壓力。在本研究家系2中，因母親的地貧基因型為-α3.7/αα，父親的地貧基因型為--SEA/αα而進行產前診斷，胎兒缺失型α-地貧檢測發現gap-PCR電泳同時出現2.0 kb、1.7 kb和1.2 kb的3個條帶。胎兒檢測的基因型結果與遺傳規律可能不一致，無法做出準確的判斷。進一步檢測，母親基因型為HKαα/αα，胎兒基因型為HKαα/--SEA，經過遺傳咨詢，夫妻選擇繼續妊娠，胎兒出生后表現為標準型α-地貧。因此，當gap-PCR電泳同時出現α2、-α3.7/-α4.2和--SEA3個條帶時，要高度懷疑為HKαα/--SEA或anti-HKαα/--SEA，進一步使用巢式PCR法確認,避免將HKαα/--SEA或anti-HKαα/--SEA誤診為Hb H病。

綜上所述，巢式PCR法是確診HKαα或anti-HKαα基因型的重要方法[10]。HKαα或anti-HKαα基因型地貧的準確診斷對罕見α-地貧基因的篩查和產前遺傳咨詢具有非常重要的意義，避免了不必要的創傷性產前診斷。