進餐及血樣溶血和靜置時間對變應原檢測的影響

陳艷蕾，蘭天飛，石海云，王學艷

(首都醫科大學附屬北京世紀壇醫院變態反應科，北京 100038)

過敏性疾病患病率約占世界總人口的22%，已成為全球重要的公共衛生問題之一[1]。變應原檢查至關重要，是過敏性疾病診斷和特異性免疫治療的重要依據之一[2]。變應原的檢測方法主要有體內檢測和體外檢測[3]。其中體外檢測指血清學檢驗，常用于檢測血清特異性免疫球蛋白E(specific immunoglobulin E，sIgE)抗體，其特點為特異性高、安全、可靠、基本不會給患者帶來痛苦，不受用藥影響、儀器自動判讀結果，可重復性好[4]。目前普遍認為體外檢測無需空腹。但有研究發現，血脂和過敏之間存在一定的關聯，且血脂異常和特應性傾向具有相同的免疫通路[5-6]；同時IgE是糖尿病前期的個體危險因素[7]。進餐后人體血糖和血脂是變化的，血脂、血糖和過敏之間存在著一定的關聯，因此進餐前后血糖血脂的變化可能影響血中變應原sIgE的檢測水平，成為變應原檢測的干擾因素。此外，血樣在采集、轉運、保存以及檢測過程中，操作不規范、患者自身或外界因素等影響，也可能會干擾變應原檢測結果。本研究旨在分析空腹血糖血脂正常者和升高者進餐、血樣溶血及采血后血樣靜置時間對血清變應原sIgE檢測水平的影響，從而指導臨床實驗室變應原檢測并為變應原檢測操作規范的制訂提供支持。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2019年3月在首都醫科大學附屬北京世紀壇醫院變態反應科門診就診的患者(年齡20～65歲)作為研究對象，分別篩選出空腹血糖血脂正常者26例和空腹血糖血脂(兩者任一)升高者12例。其中，空腹血糖血脂正常者男12例、女14例，年齡20～64歲，平均(42±13)歲；空腹血糖血脂升高者男5例、女7例，年齡35～65歲，平均(53±8)歲。所有入組人員均在進餐前后分別采靜脈血，分別將空腹血糖血脂正常者和升高者血樣分為空腹及餐后2組，其中空腹血糖血脂正常者：空腹血樣為A組，餐后血樣為B組，各26例；空腹血糖血脂升高者：空腹血樣為C組，餐后血樣為D組，各12例。所有入組人員(38例)中，隨機抽取26例血樣進行人工溶血(溶血組)，將與之對應的26例未溶血血樣予以常規處理(常規處理血清組)；隨機抽取12例血樣靜置5 min即離心備檢。

1.2研究方法 分別采集所有入組人員空腹及餐后2 h靜脈血各8 mL置于2個采血管。其中，常規處理血清組予以常規處理，利用負壓緩慢在試管內注入血液標本，溶血組則將試管帽去除后，將血液標本迅速轉移至試管內，同時來回快速抽吸10次導致標本溶血。隨后在室溫下靜置30 min，所有血液標本采用SiGMA 3-18K型離心機(北京博勱行儀器有限公司生產)，離心半徑為15.5 cm，3 000 r/min離心3.5 min備檢。

所有血樣均采用全自動酶免分析儀(深圳市愛康生物科技有限公司生產，型號：URANUS AE85型)檢測血清sIgE抗體，包括屋塵螨、粉塵螨、艾蒿、普通豚草、蟑螂、貓上皮、犬上皮、屋塵、交鏈孢霉、柳樹，試劑盒購自江蘇浩歐博生物醫藥股份有限公司(批號：20190101)。采用全自動生化分析儀(美國貝克曼庫爾特有限公司生產，型號：AU5832型)分別檢測空腹血樣血糖、三酰甘油和總膽固醇(均在首都醫科大學附屬北京世紀壇醫院檢驗科進行檢測)，其中葡萄糖和總膽固醇測定試劑盒購自美國貝克曼庫爾特有限公司(批號：5504和5336)，三酰甘油測定試劑盒購自柏定生物工程(北京)有限公司(批號：0822)。

1.3統計學方法 采用SPSS 22.0(SPSS Inc.,Chicago,IL,USA)統計軟件進行數據處理，不服從正態分布的計量資料數用中位數(四分位間距)[M(P25，P75)]表示，采用配對樣本的Wilcoxon秩和檢驗。P<0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1空腹與餐后血糖血脂對變應原檢測結果的影響

2.1.1空腹血糖血脂正常者空腹及餐后的變應原血清sIgE水平比較 A組和B組的各變應原血清sIgE水平比較差異無統計學意義(P>0.05)。見表1。

表1 空腹血糖血脂正常者空腹及餐后的變應原血清sIgE水平比較 [kUA/L，M(P25，P75)]

2.1.2空腹血糖血脂升高者空腹及餐后的變應原血清sIgE水平比較 C組和D組的各變應原血清sIgE水平比較差異無統計學意義(P>0.05)。見表2。

表2 空腹血糖血脂升高者空腹及餐后的變應原血清sIgE水平比較 [kUA/L，M(P25，P75)]

2.2溶血對變應原檢測結果的影響 常規處理血清組和溶血組的屋塵螨、粉塵螨、艾蒿、普通豚草、蟑螂、犬上皮、屋塵的血清sIgE水平比較差異無統計學意義(P>0.05)；溶血組貓上皮血清sIgE水平高于常規處理血清組，交鏈孢霉和柳樹血清sIgE水平低于常規處理血清組(P<0.05)。見表3。

表3 溶血前后變應原血清sIgE水平的比較 [kUA/L，M(P25，P75)]

2.3血樣靜置時間對變應原檢測的影響 12例血樣靜置5 min即離心，其中1例血樣出現溶血，9例血樣血清中不同程度出現凝膠塊或凝膠絲，僅2例分離出正常血清。本研究所有靜置30 min后離心的血樣(人工溶血除外)均未出現溶血或凝膠塊(絲)。

3 討 論

過敏性疾病患者的血清總IgE水平往往升高，但不能明確其過敏反應的誘發因素[8]。而對變應原sIgE進行檢測，可以初步判斷患者在接觸某變應原時可能會出現過敏現象[9]。變應原sIgE抗體的檢測對于過敏性疾病的臨床治療及預防均有積極意義，已被納入多項臨床疾病的診療指南[4]。sIgE水平與部分過敏性疾病的嚴重程度具有相關性，可協助疾病分型及精準治療[4]。研究證實，血清sIgE/總IgE比值>16.2%可以很好地預測變應原特異性免疫治療的臨床療效[10-11]。這些均對變應原sIgE和總IgE定量檢測的精準性提出了更高的要求。

目前一系列研究發現，血糖、血脂和過敏之間可能存在一定的關聯。如7歲兒童的血脂水平與哮喘、氣道阻塞、支氣管反應性和空氣變應原致敏有關[6]。總膽固醇可能增加變應原sIgE的產生，進而加重過敏癥狀[12]。母親孕期糖尿病增加了嬰兒過敏性疾病的患病風險；與正常孕婦相比，孕期糖尿病患者存在更為明顯的輔助性T細胞(helper T cell，Th)1下調和Th2上調，即Th1/Th2比值下降[13]。進餐會影響機體血糖、血脂水平的變化，因此其有可能影響血液中sIgE的定量檢測結果。本研究中，無論是空腹血糖血脂正常者還是空腹血糖血脂升高者，其空腹和餐后各變應原血清sIgE水平比較差異均無統計學意義(P>0.05)，提示雖然血脂異常和特應性傾向具有相同的免疫通路，但血糖血脂的變化在短時間內不易引起體內免疫系統發生變化，Th1和Th2細胞的失衡在血糖血脂的長期異常后出現，繼而使血液sIgE水平發生改變。另有研究發現，美國人群血清總膽固醇與特應性之間存在明顯的種族差異[14]。而本研究所采血樣sIgE空腹和餐后檢測值比較差異無統計學意義可能與研究人群有關。

標本溶血是指標本因各方面因素的影響而導致紅細胞發生破裂[15]，主要分為體外溶血及體內溶血[16]。檢測對象長期服用易導致溶血的藥物，或患有惡性疾病，則易引發體內溶血；血液標本在采集、分離、運送以及保存過程中，若操作不當，易導致體外溶血[15]。體外溶血是血液檢驗中血樣最常出現的一種不良現象。諸多研究認為發生溶血后，血樣中的血小板、紅細胞以及白細胞會釋放諸多對結果造成影響的物質，進而影響血常規和血生化檢測結果，如K+、乳酸脫氫酶等顯著升高[17-19]。研究發現，血清內乳酸脫氫酶、天冬氨酸轉氨酶、肌酸激酶、肌酸激酶同工酶、CD4+等水平均與支氣管哮喘患兒的病情嚴重程度呈正相關[20]；血清總IgE、變應原sIgE、乳酸脫氫酶等血清生物標志物與特應性皮炎病情嚴重程度、病情活動度相關[21]，提示乳酸脫氫酶、肌酸激酶、肌酸激酶同工酶等可能與機體免疫系統存在交互作用，從而影響sIgE水平。本研究結果顯示，正常處理血清組和溶血組部分變應原血清sIgE水平比較差異無統計學意義(P>0.05)，但貓上皮、交鏈孢霉及柳樹變應原血清sIgE水平比較差異有統計學意義(P<0.05)，考慮可能為溶血后細胞內成分釋放入血或使血清嚴重稀釋，引發變應原檢測結果的異常，具體機制尚需進一步探討。因此，建議血液標本在采集、分離、運送以及保存過程中一定嚴格按照操作規程操作，防止溶血現象的發生，以保證變應原檢測結果的準確性。

本研究中，隨機抽取12例血樣靜置5 min即離心，其中1例血樣出現溶血，9例血樣血清中不同程度出現凝膠塊或凝膠絲，僅2例分離出正常血清。考慮是由于靜置時間過短，不能保證血樣徹底凝固，對凝固不全的血樣進行離心時，極易出現纖維蛋白形成，一方面增加了血清和紅細胞的粘連，使血清不易和紅細胞分離從而導致溶血；另一方面則易在血清中形成凝膠塊或凝膠絲，這種血樣在檢測過程中由于血清量較少，不能滿足變應原檢測所需血清量，無法完成變應原檢測，同時其凝膠塊或凝膠絲會造成儀器檢測取樣時堵塞探針，影響檢測進程及結果。而靜置30 min后離心的血樣均未出現溶血或凝膠塊(絲)，故建議采集血樣靜置30 min后再行離心檢測，以保證變應原檢測的順利進行和檢測結果的準確性。

綜上可知，變應原檢測無論空腹血糖血脂正常與否均不受空腹和進餐的影響，但血樣溶血及靜置時間過短則是變應原檢測的常見干擾因素，這就要求醫護及檢驗人員在血液標本采集、分離、運送、保存以及檢測過程中一定要嚴格按照操作規程操作，從而使檢驗結果更準確可靠。但本研究樣本量有限，需加大樣本量進一步研究證實。