RMPP患兒肺泡灌洗液中巨噬細胞的表達及與IL-2、IL-8、IL-10的相關性

劉彩麗 廖翠樂 熊長虹

【摘要】 目的：觀察小兒難治性支原體肺炎（refractory mycoplasma pneumoniae pneumonia， RMPP）患兒支氣管肺泡灌洗液（BALF）中巨噬細胞及IL-2、IL-8、IL-10水平的表達。方法：選取2014年10月-2018年10月在本院兒科住院治療的94例RMPP患兒為RMPP組，選取同期輕型肺炎支原體肺炎（mycoplasma pneumoniae pneumonia， MPP）60例為MPP組及60例行支氣管異物取出術兒童為對照組。ELISA檢測BALF中IL-2、IL-8、IL-10水平，蘇木精-伊紅染色下計數巨噬細胞百分比。比較各組肺泡灌洗液中IL-2、IL-8、IL-10水平及巨噬細胞計數，分析RMPP患兒肺泡灌洗液中巨噬細胞計數與IL-2、IL-8、IL-10水平的相關性。結果：三組患兒BALF中IL-2、IL-8、IL-10含量比較，差異均有統計學意義（P<0.05）。RMPP組患兒BALF中IL-2、IL-8含量均高于對照組及MPP組，IL-10含量低于對照組及MPP組，差異均有統計學意義（P<0.05）;MPP組患兒BALF中IL-2、IL-8含量均高于對照組，IL-10含量低于對照組，差異均有統計學意義（P<0.05）。MPP組患兒肺泡灌洗液中巨噬細胞數為（32.2±6.3）%，高于RMPP組的（27.6±5.7）%，低于對照組的（66.1±7.9）%，差異均有統計學意義（P<0.05）;RMPP組患兒肺泡灌洗液中巨噬細胞數低于對照組，差異有統計學意義（P<0.05）。三組患兒肺泡灌洗液中巨噬細胞數比較，差異有統計學意義（P<0.05）。RMPP患兒肺泡灌洗液中巨噬細胞計數與IL-10水平呈正相關（P<0.05），與IL-2、IL-8水平均呈負相關（P<0.05）。結論：RMPP患兒BALF中的IL-2、IL-8含量升高，IL-10含量降低，與巨噬細胞百分比關系密切。

【關鍵詞】 小兒難治性支原體肺炎 肺泡灌洗液 巨噬細胞 IL-2 IL-8 IL-10

[Abstract] Objective： To observe the expression of macrophages and IL-2， IL-8 and IL-10 in bronchoalveolar lavage fluid （BALF） of children with refractory mycoplasma pneumoniae pneumonia （RMPP）. Method： A total of 94 patients with RMPP hospitalized in our hospital from October 2014 to October 2018 were selected as the RMPP group. Sixty cases of mycoplasma pneumoniae pneumonia （MPP） in the same period were selected as MPP group and 60 children undergoing bronchial foreign body removal were selected as the control group. The levels of IL-2， IL-8 and IL-10 in BALF were detected by ELISA. The percentage of macrophages was counted by hematoxylin eosin staining. The levels of IL-2， IL-8， IL-10 and macrophage count in BALF of each group were compared， and the correlation between macrophage count and IL-2， IL-8 and IL-10 levels were analyzed. Result： There were significant differences in the contents of IL-2， IL-8 and IL-10 in BALF among the three groups （P<0.05）. The contents of IL-2 and IL-8 in BALF of RMPP group were higher than those of control group and MPP group， and the content of IL-10 was lower than those of control group and MPP group， the differences were statistically significant （P<0.05）. The contents of IL-2 and IL-8 in BALF of MPP group were higher than those of control group， and the content of IL-10 was lower than that of control group， the differences were statistically significant （P<0.05）. The number of macrophages in BALF of MPP group was （32.2±6.3）%， which was higher than that of RMPP group （27.6±5.7）% and lower than that of control group （66.1±7.9）%， the differences were statistically significant （P<0.05）. The number of macrophages in BALF of RMPP group was lower than that of control group， the difference was statistically significant （P<0.05）. There were significant differences in the number of macrophages in BALF among the three groups （P<0.05）. The number of macrophages in BALF was positively correlated with IL-10 （P<0.05）， and negatively correlated with IL-2 and IL-8 （P<0.05）. Conclusion： The content of IL-2 and IL-8 in BALF of RMPP children increased， while the content of IL-10 decreased， which was closely related to the percentage of macrophages.

[Key words] Refractory mycoplasma pneumoniae pneumonia in children Alveolar lavage fluid Macrophages IL-2 IL-8 IL-10

First-authors address： Maternity and Child Care Hospital of Qingyuan， Qingyuan 511500， China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2020.27.011

小兒難治性支原體肺炎（Refractory mycoplasma pneumoniae pneumonia， RMPP）是兒童常見重癥肺炎，進展迅速，出現多器官功能衰竭，病死率高[1-2]。支氣管肺泡灌洗液（Bronchoalveolar lavage fluid， BALF）細胞學檢查可以直接獲取肺泡炎癥細胞，是研究肺炎病理生理最為有效的方法。研究表明，支原體肺炎患者BALF中性粒細胞升高、巨噬細胞降低[3]。IL-2、IL-8、IL-10作為臨床常用的炎性因子，研究證實，重癥肺炎患者外周血中存在各種炎性因子水平的升高[4]。但RMPP患兒BALF中巨噬細胞、炎性因子水平兩者的關系尚不清楚。鑒于此，筆者觀察了RMPP患兒BALF中巨噬細胞百分比、炎性因子IL-2、IL-8、IL-10的水平，并與正常兒童、輕型肺炎支原體肺炎（mycoplasma pneumoniae pneumonia， MPP）對比，希望為RMPP的診治提供思路，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2014年10月-2018年10月在本院兒科住院治療的94例RMPP患者為RMPP組。（1）納入標準：年齡2～14歲;RMPP符合《兒童社區獲得性肺炎管理指南》的診斷標準[5];依從性好，可以配合臨床治療。（2）排除標準：合并有肺結核、支氣管哮喘、醫院獲得性肺炎及嚴重營養不良、免疫功能低下。選取同期輕型MPP 60例為MPP組及60例行支氣管異物取出術兒童為對照組。患兒家屬均對本研究知情同意，本研究經醫院倫理委員會批準。

1.2 方法

1.2.1 樣本采集 所有患兒術前完善各項檢查，禁飲食，予以經纖維支氣管鏡檢查或支氣管肺泡灌洗術，根據術前胸部CT檢查明確病變部位，2%利多卡因局部麻醉，探查各支氣管段無病變后，將支氣管鏡放置于病變肺段入口處，溫生理鹽水反復灌洗3次以上，總量<2 mL/kg。負壓回收大于30%灌洗液，退鏡。回收的灌洗液無菌紗布過濾，標本分為2份，第一份標本4 ℃下500 r/min離心5 min，沉淀送細胞學檢查;第二份標本4 ℃下500 r/min離心5 min，取上清液放于離心管中進行炎性因子檢查。

1.2.2 灌洗液巨噬細胞檢測 取灌洗液標本，4 ℃下500 r/min離心5 min，留取沉淀，涂片，烘干甲醇固定，干燥后Wright-Giemsa染色10 min，37 ℃恒溫箱烘干，普通光學顯微鏡選擇500個細胞，計數巨噬細胞百分比。

1.2.3 灌洗液IL-2、IL-8、IL-10的檢測 取灌洗液標本，4 ℃下500 r/min離心5 min，取上清液，應用酶聯免疫吸附法（ELISA）測定IL-2、IL-8及IL-10水平。試劑盒由美國DSL公司提供，嚴格按說明書步驟進行。

1.3 觀察指標 （1）比較各組肺泡灌洗液中IL-2、IL-8、IL-10水平;（2）比較各組肺泡灌洗液中巨噬細胞計數;（3）分析RMPP患兒肺泡灌洗液中巨噬細胞計數與IL-2、IL-8、IL-10水平的相關性。

1.4 統計學處理 采用SPSS 17.0軟件對所得數據進行統計分析，計量資料用（x±s）表示，比較采用t檢驗，多組間比較采用方差分析，方差齊者采用LSD-t檢驗，方差不齊采用Dunnetts T3檢驗;計數資料以率（%）表示，比較采用字2檢驗。Spearman分析巨噬細胞百分率與IL-2、IL-8、IL-10水平的相關性。以P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 三組一般資料比較 三組患者的性別、年齡、身高及體重比較，差異均無統計學意義（P>0.05），具有可比性，見表1。

2.2 三組肺泡灌洗液中IL-2、IL-8、IL-10水平比較 三組患兒BALF中IL-2、IL-8、IL-10含量比較，差異均有統計學意義（F=11.59、23.12、19.46，P=0.00、0.00、0.00）。RMPP組患兒BALF中IL-2、IL-8含量均高于對照組及MPP組，IL-10含量低于對照組及MPP組，差異均有統計學意義（P<0.05）;MPP組患兒BALF中IL-2、IL-8含量均高于對照組，IL-10含量低于對照組，差異均有統計學意義（P<0.05）。見表2。

2.3 各組肺泡灌洗液中巨噬細胞計數比較 MPP組患兒肺泡灌洗液中巨噬細胞數為（32.2±6.3）%，高于RMPP組的（27.6±5.7）%，低于對照組的（66.1±7.9）%，差異均有統計學意義（P<0.05）;RMPP組患兒肺泡灌洗液中巨噬細胞數低于對照組，差異有統計學意義（P<0.05）。三組患兒肺泡灌洗液中巨噬細胞數比較，差異有統計學意義（F=9.42，P=0.02）。

2.4 RMPP患兒肺泡灌洗液中巨噬細胞計數與IL-2、IL-8、IL-10水平相關性分析 RMPP患兒肺泡灌洗液中巨噬細胞計數與IL-10水平呈正相關（rs=0.793，P=0.003），與IL-2、IL-8水平均呈負相關（rs=-0.823、-0.917，P=0.001、0.001），見表3。

3 討論

近年來RMPP發病率逐年升高，引起了臨床醫師的重視。RMPP病程遷延，發展迅速，導致呼吸衰竭以及其他系統受損，死亡率高，為目前臨床中常見的急危重癥之一[6]。因此早期預測RMPP并予以積極治療，成為保障患兒生命安全的關鍵。但此方面內容并未引起臨床醫師足夠重視，關于RMPP預測的報道較少，該研究領域尚存在一定的不足。細胞因子是由淋巴細胞、巨噬細胞等分泌的一種物質，可以與細胞膜特定受體結合，傳遞特定信號，從而調控T、B淋巴細胞，在體液、細胞免疫中發揮重要的作用。CD4+T細胞可分為Th1、Th2兩種亞群。Th1細胞主要在細胞免疫中發揮作用，輔助細胞毒性T細胞分化，參與遲發型超敏反應，分泌IL-1、IL-2、IL-8、IFN-γ等;Th2細胞在體液免疫中發揮作用，可分泌IL-4、IL-6、IL-10等[7-9]。

目前普遍認為，遲發型超敏反應在MPP中起到至關重要的作用。有研究表明，IL-2可以引起淋巴細胞向周圍組織浸潤，巨噬細胞的富集[10]。IL-8是由巨噬細胞和內皮細胞分泌，可引起中性粒細胞的聚集[11]。研究證實，肺炎支原體感染患者血清IL-8水平升高，IL-8在肺炎支原體病理改變中發揮著至關重要的作用[12]。另外研究發現，RMPP患者血清IL-4、IL-10水平均高于正常人群，提示Th2細胞在肺炎支原體感染中發揮重要的作用[13]。IL-10可以抑制細胞分泌功能，抗炎能力強，減輕炎癥因子對人體的損傷。但隨著IL-10含量的增加，IL-10抑制免疫系統，導致病情惡化。有學者認為，IL-10作為一種抗炎細胞因子，能調節T細胞比例，控制炎癥反應強度，含量增加提示支氣管肉芽組織增生或黏膜出血壞死得到抑制[14]。另有研究表明，IL-10可以抑制Th1細胞及單核細胞，抑制IL-6、TNF-α、IL-8促炎因子的釋放[15-16]。本次研究筆者觀察了RMPP患者BALF中IL-2、IL-8及IL-10含量，結果表明RMPP組患兒BALF中IL-2、IL-8含量均高于對照組及MPP組，IL-10含量低于對照組及MPP組，差異均有統計學意義（P<0.05）;MPP組患兒BALF中IL-2、IL-8含量均高于對照組，IL-10含量低于對照組，差異均有統計學意義（P<0.05）。這提示BALF中細胞因子可用于初步評價病情嚴重程度，進而簡化臨床預后預測工作，為治療途徑探索提供指導依據。

正常人肺泡灌洗液中細胞分類依次為單核/巨噬細胞、淋巴細胞、中性粒細胞、嗜酸性粒細胞，肺泡灌洗液中各細胞數量的改變與肺部疾病有關。細菌進入肺部后，首先肺泡巨噬細胞聚集、浸潤，識別并吞噬病菌，呈遞抗原給淋巴細胞，激活人體免疫功能，巨噬細胞呈遞抗原，吞噬壞死細胞，產生多種炎性因子，既是啟動細胞又是細胞因子的靶點，在病情進展中發揮重要作用[17-18]。本研究結果表明，MPP組患兒肺泡灌洗液中巨噬細胞數高于RMPP組，低于對照組，差異均有統計學意義（P<0.05）;RMPP組患兒肺泡灌洗液中巨噬細胞數低于對照組，差異有統計學意義（P<0.05）。這與其他人的研究結果基本一致[19-20]。

但此次入選樣本量較小，隨訪時間不長，故有待于增加樣本量，進一步研究其中的關系予以證實其對于改善RMPP的預后及確切機制，為指導臨床治療提供參考。綜上所述，RMPP患者BALF中IL-2、IL-8及IL-10含量與MPP患兒存在差別，在臨床診斷方面上具有一定的應用價值。

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（收稿日期：2020-03-12） （本文編輯：姬思雨）