原發性腎病綜合征患兒T淋巴細胞免疫及細胞因子的臨床意義

曾海江 黃郁波 易玲

[摘要]目的 探討原發性腎病綜合征（PNS）患兒T淋巴細胞免疫及細胞因子變化的臨床意義。方法 選取2015年6月～2019年3月贛州市人民醫院收治的30例PNS患兒，根據疾病進展情況分為活動期組（13例）和緩解期組（17例），選擇同期30例健康兒童作為對照組。分析三組CD3+、細胞毒性T細胞（Tc）、輔助性T細胞（Th）、Th/Tc及白細胞介素-6（IL-6）水平。結果 三組的CD3+水平比較，差異無統計學意義（P>0.05）。活動期組及緩解期組的Th、Th/Tc水平均低于對照組，差異有統計學意義（P<0.05）;活動期組及緩解期組的Tc及IL-6水平均高于對照組，差異有統計學意義（P<0.05）。活動期組的Th、Th/Tc水平均低于緩解期組，差異有統計學意義（P<0.05）;活動期組的Tc及IL-6水平高于緩解期組，差異有統計學意義（P<0.05）。IL-6與Tc成正相關（r=0.91，P<0.01），與Th成負相關（r=-0.92，P<0.05），與Th/Tc成負相關（r=-0.90，P<0.05）。結論 PNS患兒的T淋巴細胞亞群及細胞因子水平較正常兒童均有所變化，兩者可能在PNS發病中起到一定作用。

[關鍵詞]原發性腎病綜合征;T淋巴細胞亞群;細胞因子;兒童

[中圖分類號] R726.9 ? ? ? ? ?[文獻標識碼] A ? ? ? ? ?[文章編號] 1674-4721（2020）9（c）-0079-04

[Abstract] Objective To investigate the clinical significance of the changes of T lymphocyte immunity and cytokines in children with primary nephrotic syndrome （PNS）. Methods A total of 30 children with PNS admitted to our hospital from June 2015 to March 2019 were selected as the research objects and divided into active group （13 cases） and remission group （17 cases） according to disease progression. Meanwhile， 30 healthy children were selected as the control group. The levels of CD3+， cytotoxic T cell （Tc）， helper T cell （Th）， Th/Tc and interleukin-6 （IL-6） in the three groups were compared. Results There was no statistically significant difference in CD3+ level among the three groups （P>0.05）. Th and Th/Tc levels in the active group and the remission group were lower than those in the control group， and the differences were statistically significant （P<0.05）. Tc and IL-6 levels in the active group and the remission group were higher than those in the control group， and the differences were statistically significant （P<0.05）. Th and Th/Tc levels in the active group were lower than those in the remission group， and the differences were statistically significant （P<0.05）. Tc and IL-6 levels in the active group were higher than those in the remission group， and the differences were statistically significant （P<0.05）. IL-6 was positively correlated with Tc （r=0.91， P<0.01）， negatively correlated with Th （r=-0.92， P<0.05） and negatively correlated with Th/TC （r=-0.90， P<0.05）. Conclusion There are changes in T lymphocyte subsets and cytokines in children with PNS， which may play a role in the pathogenesis of PNS.

[Key words] Primary nephrotic syndrome; T lymphocyte subsets; Cytokines; Children

原發性腎病綜合征（primary nephrotic syndrome，PNS）是腎小球毛細血管濾過膜對血漿蛋白通透性增加，導致大量血漿蛋白自尿中丟失的一系列病理生理改變的腎臟慢性炎癥性疾病，好發于兒童，現有文獻報道，約有85%的PNS患兒為微小病變型，應用糖皮質激素治療的效果較好，但存在較高的復發率和激素依賴性[1]。目前，PNS的發病機制尚不明確，可能與患兒凝血功能異常、免疫功能紊亂、抗氧化平衡失衡等有關[2-3]。其中，免疫功能紊亂是醫學界認為PNS主要的發病機制。PNS患兒淋巴細胞亞群紊亂，細胞因子分泌異常，細胞免疫和炎性反應破壞腎小球屏障，進而損傷腎小球。T淋巴細胞可分為輔助性T細胞（helper T cell，Th）和細胞毒性T細胞（cytotoxic T cell，Tc）等，正常情況下Th和Tc處于細胞穩態，當細胞亞群數量和比例失調，功能發生紊亂，機體免疫功能減退，Th/Tc比例失衡[4];此外，PNS患兒白細胞介素-6（interleukin 6，IL-6）水平明顯高于健康人群，參與腎臟疾病免疫損傷[5]，PNS患兒的發病與T淋巴細胞亞群及炎癥反應存在密切聯系。目前關于T淋巴細胞亞群及相關細胞因子在PNS的變化依然存在一定爭議，部分結果解釋也互相矛盾。因此，本研究選取贛州市人民醫院收治的30例PNS患兒作為研究對象，探討T淋巴細胞亞群及IL-6在該疾病患兒體內的變化情況，為疾病發病機制及預測提供新的思路，現報道如下。

1資料與方法

1.1一般資料

選取2015年6月～2019年3月贛州市人民醫院收治的30例PNS患兒。納入標準：①患兒符合《兒童常見腎臟疾病診治循證指南（一）》[6]標準;②患兒年齡13周歲以下。排除標準：①紫癜性腎炎、乙型肝炎、狼瘡性腎炎、遺傳性腎病患兒;②應用免疫抑制劑（除激素外）患兒;③肝功能異常、繼發性腎病綜合征、免疫性疾病、感染等患兒。根據疾病進展情況分為活動期組（13例）和緩解期組（17例）。活動期組中，男8例，女5例;年齡2～13歲，平均（6.17±1.25）歲;病程1～18個月，平均（10.13±1.58）個月;疾病類型：膜性腎病2例，腎小球輕微病變9例，局灶節段性腎小球硬化2例。緩解期組中，男11例，女6例;年齡2～13歲，平均（6.09±1.33）歲;病程1～20個月，平均（10.51±1.23）個月;疾病類型：膜性腎病4例，腎小球輕微病變12例，局灶節段性腎小球硬化1例。

選取同期贛州市人民醫院體檢健康兒童30例作為對照組，其中男18例，女12例;年齡2～14歲，平均（6.13±1.19）歲。三組的性別、年齡等一般資料比較，差異無統計學意義（P>0.05）。本研究經贛州市人民醫院倫理委員會審核批準。所有兒童家屬均由贛州市人民醫院醫護人員告知本研究目的、意義，并自愿簽署知情同意書。

1.2方法

所有兒童均于晨起空腹采靜脈血3～5 ml，采用LC-4012低速離心機（安徽中科中佳科學儀器有限公司），按照3000 r/min離心5 min，得血清。采用羅氏Cobas E601全自動電化學發光免疫分析儀（羅氏公司），依據雙抗體夾心酶聯免疫吸附法檢測IL-6水平。另用同一采血方式采血3～5 ml，采用FACSCantoⅡ型流式細胞儀（BD公司）進行分析，運用堿性磷酸酶標記卵白素法檢測CD3+、Tc、Th、Th/Tc水平。所有操作由贛州市人民醫院檢驗科執行，并嚴格按照說明書標準操作。

1.3觀察指標

觀察三組的T淋巴細胞亞群及IL-6水平，其中T淋巴細胞亞群主要包括CD3+、Tc、Th及Th/Tc。

1.4統計學方法

采用SPSS 21.0統計學軟件進行分析，計量資料用均數±標準差（x±s）表示，兩組間比較采用t檢驗，多組間比較采用單因素方差分析;計數資料采用率表示，組間比較采用Fisher精確檢驗;相關性分析采用直線回歸分析，以P<0.05表示差異有統計學意義。

2結果

2.1三組T淋巴細胞亞群水平的比較

三組的CD3+水平比較，差異無統計學意義（P>0.05）。三組的Th、Tc、Th/Tc水平比較，差異有統計學意義（P<0.05）。活動期組及緩解期組的Th、Th/Tc水平均低于對照組，差異有統計學意義（P<0.05）;活動期組及緩解期組的Tc水平均高于對照組，差異有統計學意義（P<0.05）。活動期組的Th、Th/Tc水平均低于緩解期組，差異有統計學意義（P<0.05）;活動期組的Tc水平高于緩解期組，差異有統計學意義（P<0.05）（表1）。

2.2三組IL-6水平的比較

活動期組的IL-6水平為（12.53±2.96）pg/ml，緩解期組的IL-6水平為（9.71±2.33）pg/ml，對照組的IL-6水平為（5.83±1.06）pg/ml，三組的IL-6水平比較，差異有統計學意義（F=56.98，P<0.01）。活動期組和緩解期組的IL-6水平均高于對照組，差異有統計學意義（t活動期組與對照組比較=5.11，P活動期組與對照組比較<0.05;t緩解期組與對照組比較=3.24，P緩解期組與對照組比較<0.05）;活動期組的IL-6水平高于緩解期組，差異有統計學意義（t=3.59，P<0.05）。

2.3活動期組IL-6水平與T淋巴細胞亞群的相關性分析

直線回歸分析結果顯示，IL-6（y）與Th（x1）、Tc（x2）、Th/Tc（x3）的回歸方程分別為y=-0.39x1+6.05，R2=0.84;y=3.02x2+3.11，R2=0.82;y=-0.47x3+6.53，R2=0.81。顯示IL-6與Tc成正相關（r=0.91，P<0.01），與Th成負相關（r=-0.92，P<0.05），與Th/Tc成負相關（r=-0.90，P<0.05）。

3討論

PNS是臨床常見的腎小球疾病，好發于兒童，兒童年發病率為1/100 000～4/100 000，約占同期泌尿系統疾病患兒的21%～31%[7]，是兒童腎衰竭的首要原因。目前，PNS的病因和發病機制尚未完全清楚。現有研究主要支持PNS與細胞免疫功能紊亂有關，且某些細胞因子，如IL-6、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）等，在PNS的發生、發展中也起重要作用。

現有研究認為，CD3+是細胞免疫的主要組成部分，CD4+在細胞免疫中主要起調節作用[8]。CD8+是一種細胞毒性T細胞，具有抑制CD4+及誘導靶細胞死亡的作用[9-10]。正常情況下，各免疫細胞是相互協調及拮抗的，數目較為穩定，一旦出現總數目或Th/Tc變化，則可認為是免疫調節功能紊亂[11]。本研究結果顯示，活動期組及緩解期組的Th、Th/Tc水平均低于對照組，差異有統計學意義（P<0.05）;活動期組及緩解期組的Tc水平均高于對照組，差異有統計學意義（P<0.05）;活動期組的Th、Th/Tc水平均低于緩解期組，差異有統計學意義（P<0.05）;活動期組的Tc水平高于緩解期組，差異有統計學意義（P<0.05）。提示PNS患兒細胞免疫功能紊亂，其主要致病作用可能是T淋巴細胞亞群廣泛浸潤腎間質，進一步損傷腎組織，但仍需進一步研究。因此，筆者有理由相信T淋巴細胞亞群參與了PNS的發生和發展，其數目的變化對該疾病的病情及機制具有一定的臨床意義。

T淋巴細胞分為Th1型和Th2型[12-13]。Th1細胞因子可以與特異性受體結合，促進Th2細胞因子的合成及分泌，進一步損傷腎組織[14]。IL-6屬于Th2細胞因子，可促進和激活T淋巴細胞亞群，增強TNF-α、IL-2等細胞因子的效應，引起腎臟免疫損傷，其與腎小球硬化密切相關[15-16]。本研究結果顯示，三組的IL-6水平比較，差異有統計學意義（P<0.01）;活動期組和緩解期組的IL-6水平均高于對照組，差異有統計學意義（P<0.05）;活動期組的IL-6水平高于緩解期組，差異有統計學意義（P<0.05）。同時，IL-6與Tc成正相關（r=0.91，P<0.01），與Th成負相關（r=-0.92，P<0.05），與Th/Tc成負相關（r=-0.90，P<0.05）。提示IL-6、Tc、Th及Th/Tc可能共同參與了PNS的發生與發展，參與腎病綜合征免疫損傷過程，削弱腎小球濾過功能，可能與IL-6抑制了T淋巴細胞分泌相關細胞因子有關，但具體機制需進一步研究。

目前，隨著國內外對PNS研究的不斷深入，在Th1型和Th2型細胞因子和T淋巴細胞亞群等方面均有長足進展，但研究結果也存著互相矛盾之處[17-18]。這說明PNS患兒機體內的免疫功能變化較為復雜，并存在一定的網絡現象。為此，筆者建議今后研究人員要改善設計和檢測方法，采用更精確、更靈敏、更穩定的檢測方法獲得更加準確、可靠的研究結果，更好的闡明PNS患兒機體內T淋巴細胞免疫及細胞因子變化。

綜上所述，PNS患兒T淋巴細胞亞群及細胞因子水平均有所變化，兩者可能在PNS發病中起到一定作用。

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（收稿日期：2020-01-03）