日糧中添加黃芪復方顆粒對肉雞免疫器官組織結構及腸道結構的影響

梁 銳，王佳敏，崔小珍，王延東，王穎莉

（1.山西中醫藥大學，山西晉中030619； 2.山西省農業科學院飼料獸藥研究所，山西太原030032；3.華南農業大學農學院，廣東廣州510642）

禽流感的預防和治療是國家防治的重點，為確保不發生區域性高致病性禽流感等重大動物疫情，中華人民共和國農村農業部于2020年2月29日發布了《高致病性禽流感疫情應急實施方案（2020年版）》，協同打贏新型冠狀病毒感染的肺炎疫情防控阻擊戰［1］。H5和H7亞型禽流感病毒成為感染的重點，提高機體免疫功能成為防治的重點，機體免疫力的強弱取決于免疫器官狀況。研究表明，大多數中草藥具有增強免疫力的作用，如黃芪、甘草、黨參等。其中黃芪多糖促進淋巴細胞增殖與分化，增加胞漿細胞分泌，調節淋巴細胞亞群平衡，從而調節細胞免疫［2］。甘草葡聚糖刺激脾臟淋巴細胞增殖，甘草酸可增強巨噬細胞吞噬功能和細胞免疫功能［3］。黨參能顯著提高血清抗體效價，從而增強體液免疫［4］。黃芪復方主要由黃芪、甘草、黨參等組成，制備成顆粒便于與日糧復配。本實驗旨在研究日糧中添加黃芪復方顆粒對肉雞生長性能、免疫及抗氧化功能的影響，為其在畜禽生產中的應用提供理論依據。

1 材料與方法

1.1 實驗材料

1.1.1 藥物與試劑 黃芪復方顆粒（自制，由黃芪、甘草等水回流提取濃縮成膏狀制粒）；蘇木素染液色（湖北安立信醫療實驗有限公司）、伊紅染液色（湖北安立信醫療實驗有限公司）、二甲苯、乙醇、中性樹膠、染色缸、載玻片、蓋玻片（江蘇飛舟玻塑有限公司）。

1.1.2 儀器 LEICAIP 1020全自動組織脫水機（德國萊卡）、LECIA RM2265全自動輪轉式切片機（德國萊卡）、LECIA DM2500 LED研究級熒光顯微圖像系統（德國萊卡）、YD-6L生物組織冷凍臺（德國萊卡）、YD-6L生物組織包埋機（德國萊卡）。

1.2 實驗方法

1.2.1 實驗設計 選用100羽1日齡公母混合羅斯308肉雞適應性飼喂7 d后，稱重并隨機分成4組，每組5個重復，每個重復5羽，每組25羽羅斯肉雞。對照組飼喂基礎日糧，參照美國羅斯308肉雞營養需要，實驗1～21 d采用肉小雞顆粒料，21～42 d采用肉中雞配合料，飼料購于文水縣大象禽業象豐飼料有限公司。基礎日糧配方及營養成分見表1。實驗組于第21天開始在日糧中添加黃芪復方顆粒，分別于飼料中添加0.87%、1.74%、3.48%黃芪復方顆粒，實驗周期42 d。

表1 基礎日糧配方

1.2.2 飼養管理 采用三層籠養，紅外燈保溫，各組分別隔離飼養，自由采食和飲水，于第20天接種新支二聯多價疫苗。

1.2.3 樣品采集與處理 肉雞飼喂至42 d，立即剖檢法氏囊、脾臟和十二指腸等組織樣品，經生理鹽水洗凈后置于4%的多聚甲醛固定液中，乙醇脫水、二甲苯透明，石蠟包埋、切片（5～7 μm）、HE染色和中性樹膠封片，在LED研究級熒光顯微圖像系統下觀察、拍照。

1.3 統計分析

每個組分別測量3個差異個體的3～5個數據，各指標取平均數做方差分析作為測定數據。用SPSS 13.0統計軟件對各項數據進行方差分析，結果表示為平均值±標準誤（或標準差），以P＜0.05作為顯著差異判斷標準，P＜0.01作為極顯著差異判斷標準。

2 結果

2.1 黃芪復方顆粒對肉雞法氏囊組織結構的影響

與對照組比較，各實驗組法氏囊淋巴濾泡的面積增加，差異具有統計學意義（P＜0.01）。結果見圖 1、表 2。

表2 黃芪復方顆粒對肉雞法氏囊組織結構的影響(±s)

表2 黃芪復方顆粒對肉雞法氏囊組織結構的影響(±s)

注：與對照組比較，1）P＜0.01

組別 淋巴濾泡面積（μm2）對照組 10 120.01±2 606.44 0.87%組 12 234.78±2 978.961）1.74%組 14 128.24±3 724.571）3.48%組 18 693.23±4 078.701）

圖1 肉雞法氏囊組織淋巴濾泡

2.2 黃芪復方顆粒對肉雞脾臟組織結構的影響

實驗組較對照組中央動脈周圍淋巴鞘明顯增厚，鞘內淋巴細胞密集；淋巴小結不斷分裂，出現生發中心。與對照組比較，各實驗組雞的脾小結面積增加，動脈周圍淋巴鞘直徑增加，差異具有統計學意義（P＜0.05，P＜0.01）。結果見圖 2、表 3。

表3 黃芪復方顆粒對肉雞脾臟組織結構的影響(±s)

表3 黃芪復方顆粒對肉雞脾臟組織結構的影響(±s)

注：與對照組比較，1）P＜0.05，2）P＜0.01

組別 脾小結面積（μm2） 動脈周圍淋巴鞘直徑（μm）對照組 783.80±165.52 9.44±1.35 0.87%組 1 138.07±390.112） 11.66±2.901）1.74%組 1 379.95±469.202） 13.01±2.732）3.48%組 1988.04±409.982） 18.02±2.782）

2.3 黃芪復方顆粒對肉雞十二指腸結構的影響

實驗組與對照組十二指腸組織均完整清晰，囊內淋巴小結形態完整清晰，皮質與髓質易分辨。與對照組比較，實驗組絨毛高度較大，排列較為緊密，腸腔體較小。尤其中劑量組腸壁完整、絨毛較長。結果見圖 3～圖 4。

圖2 肉雞脾臟組織結構

圖3 十二指腸組織結構

圖4 十二指腸顯微結構

與對照組比較，各實驗組雞的十二指腸的腸壁厚度及絨毛高度增加，差異具有統計學意義（P＜0.05，P＜0.01）；與對照組比較，各實驗組隱窩深度均降低，0.87%組與對照組比較，隱窩深度差異具有統計學意義（P＜0.01）。結果見表4。

3 討論

3.1 黃芪復方顆粒對肉雞法氏囊組織結構的影響

法氏囊的發育與外周免疫器官的發育密切相關，法氏囊淋巴濾泡數量越多，面積越大，髓質面積所占比例增加［5］。法氏囊淋巴濾泡由外圍的髓質和中央皮質以及介于二者之間的層皮-髓邊界細胞組成，淋巴濾泡內含有豐富的淋巴細胞和巨噬細胞，隨著淋巴濾泡面積的增加，淋巴細胞和巨噬細胞的數量也在增加［6］。

表4 黃芪復方顆粒對肉雞十二指腸結構的影響(±s)

表4 黃芪復方顆粒對肉雞十二指腸結構的影響(±s)

注：與對照組比較，1）P＜0.05，2）P＜0.01

組別 腸壁厚度（μm） 絨毛高度（μm） 隱窩深度（μm）對照組 52.11±4.65 180.87±17.38 45.89±1.68 0.87%組 50.13±4.701） 231.24±30.632） 38.87±5.642）1.74%組 59.55±4.271） 291.14±40.972） 44.64±17.75 3.48%組 62.67±6.951） 214.18±16.192） 39.27±13.37

3.2 黃芪復方顆粒對肉雞脾臟組織結構的影響

脾臟為家禽中最大的淋巴器官，由紅髓和白髓組成。白髓由脾小結和動脈周圍淋巴鞘組成，脾小結位于動脈周圍淋巴鞘附近。當發生細胞免疫反應時，動脈周圍淋巴鞘內的T細胞大量增殖，動脈周圍淋巴鞘將會增厚；而發生體液免疫時，脾小結將增大，生發中心明顯，脾索內漿細胞和巨噬細胞大量增加［7］。此外，脾臟作為外周免疫器官，通過動脈周圍淋巴鞘和橢球體間相互作用來對T依賴性抗原產生體液免疫應答［5］。動脈周圍淋巴鞘主要由密集的T淋巴細胞、散在的巨噬細胞和交錯突細胞等環繞動脈而成，動脈周圍淋巴鞘屬胸腺依賴區，當發生細胞免疫應答時，此區明顯增厚［8］。

3.3 黃芪復方顆粒對肉雞十二指腸結構的影響

小腸是營養物質吸收的重要場所，其中絨毛高度和隱窩深度是決定消化吸收的重要結構基礎，是評價腸道形態的關鍵參數［9］。腸絨毛是腸黏膜表層上皮和固有層向腔內的突起，隨著小腸絨毛高度增加，腸吸收表面積增加，腸上皮細胞數量增多，消化酶分泌增多，營養物質的吸收率提高；絨毛長度變短時，成熟細胞少，營養物質吸收能力低。隱窩深度決定了腸絨毛通過有絲分裂產生上皮細胞的速度，主要功能是分泌消化液，隱窩深度變淺，表明腸上皮細胞成熟率上升，分泌功能增強。絨毛高度/隱窩深度則綜合反映腸黏膜形態結構，反映腸黏膜的吸收能力，當比值下降表明消化、吸收能力下降，比值上升表明消化、吸收能力增強［10-12］。