牛肝菌多糖對(duì)力竭運(yùn)動(dòng)大鼠骨骼肌炎癥反應(yīng)的影響*

龐俊娣

（昆明醫(yī)科大學(xué)，云南 昆明 650500）

炎癥是機(jī)體對(duì)外界刺激的防御反應(yīng)，炎癥的發(fā)生與體內(nèi)的炎癥介質(zhì)、促炎因子的激活密切相關(guān)，如一氧化氮合酶（iNOS）、白細(xì)胞介素-1（IL-1）、白細(xì)胞介素-6（IL-6）等在體內(nèi)的過量表達(dá)，均能導(dǎo)致機(jī)體炎癥的發(fā)生[1-2]。研究證明，反復(fù)力竭運(yùn)動(dòng)可導(dǎo)致機(jī)體炎癥，進(jìn)一步加重組織、器官的損傷，如何預(yù)防、控制運(yùn)動(dòng)導(dǎo)致的炎癥，具有重要的意義[3-4]。

牛肝菌（Boletus.spp.）中富含多糖，在目前的研究中，牛肝菌多糖具有豐富的生物活性，如保肝[5]、抗氧化[6]、抗腫瘤等[7]。在運(yùn)動(dòng)領(lǐng)域的研究中，牛肝菌多糖的應(yīng)用效果研究相對(duì)較少，本研究擬建立反復(fù)力竭運(yùn)動(dòng)模型，觀察服用牛肝菌多糖對(duì)大鼠力竭運(yùn)動(dòng)后骨骼肌一氧化氮（NO）、iNOS、IL-1、IL-6含量的影響，為牛肝菌多糖的抗炎作用提供相關(guān)試驗(yàn)數(shù)據(jù)支撐。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物及分組

昆明雄性大鼠50只，8周齡，清潔級(jí)，健康。平均體重（190.33±9.27）g，大鼠分籠飼養(yǎng)，每籠6只。大鼠采用國(guó)家嚙齒類飼料喂養(yǎng)，正常進(jìn)食、飲水。動(dòng)物飼養(yǎng)房溫度25℃，濕度45%～55%，自然晝夜照明。

大鼠適應(yīng)喂養(yǎng)3 d后，隨機(jī)分為安靜對(duì)照組、運(yùn)動(dòng)組、低劑量運(yùn)動(dòng)給藥組、中劑量運(yùn)動(dòng)給藥組、高劑量運(yùn)動(dòng)給藥組，每組10只。試驗(yàn)前對(duì)3組大鼠的體質(zhì)量、力竭游泳時(shí)間進(jìn)行測(cè)定（力竭判定標(biāo)準(zhǔn)：大鼠頭沉入水約8 s。撈出后鼠背放桌面，無法完成翻正反射）。結(jié)果顯示5組大鼠的體質(zhì)量、力竭游泳時(shí)間均無顯著性差異，符合實(shí)驗(yàn)的要求。

1.2 主要試劑與儀器

牛肝菌多糖，購自陜西慈緣科技有限公司（純度為90%，粉末狀，溶于水）；NO試劑盒、iNOS試劑盒、IL-1試劑盒、IL-6試劑盒，購自南京建成生物工程研究所；大鼠用泳池（自制，100 cm×60 cm×80 cm，池內(nèi)有自動(dòng)加溫系統(tǒng)、小型水泵）；FSH-2高速電動(dòng)勻漿機(jī)、DL-46RC轉(zhuǎn)速冷凍機(jī)均購自中科生物醫(yī)學(xué)公司。

1.3 動(dòng)物訓(xùn)練方案與給藥方案

安靜對(duì)照組：常規(guī)飲食，進(jìn)水，不參加運(yùn)動(dòng)。

運(yùn)動(dòng)組：隔天進(jìn)行1次力竭游泳，共20 d，每天上午9:00～11:00灌服等同運(yùn)動(dòng)給藥組同體積的生理鹽水。

低劑量運(yùn)動(dòng)給藥組、中劑量運(yùn)動(dòng)給藥組、高劑量運(yùn)動(dòng)給藥組：3組隔天進(jìn)行1次力竭游泳，共20 d，每天上午9:00～11:00灌服牛肝菌多糖，低劑量運(yùn)動(dòng)給藥組、中劑量運(yùn)動(dòng)給藥組、高劑量運(yùn)動(dòng)給藥組的給藥劑量分別為 15 mg·kg-1d-1、30 mg·kg-1d-1、45 mg·kg-1d-1。

1.4 動(dòng)物取材和指標(biāo)的測(cè)定

骨骼肌組織采集與勻漿：大鼠最后1次力竭運(yùn)動(dòng)后，斷頭處死，迅速去除股四頭肌，生理鹽水沖洗、濾紙吸干水分，4℃冰箱保存待測(cè)。稱重5 g骨骼肌組織，勻漿（按1∶9加入生理鹽水，4℃、6 000 r·min-1離心、20 min），提取上清液[8]，待測(cè)。

指標(biāo)測(cè)定：采用硝酸還原酶法測(cè)定NO[9]，采用雙抗體夾心ELISA法檢測(cè)iNOS[10]，采用雙抗體夾心ELISA法檢測(cè)IL-6、IL-10[11]。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2 試驗(yàn)結(jié)果分析

2.1 NO、iNOS含量測(cè)定

各組大鼠NO、iNOS含量比較結(jié)果，見表1。

表1 各組大鼠體NO、iNOS含量的比較（±s）Tab.1 Comparison of NO and iNOS content of rats in each group（±s）

表1 各組大鼠體NO、iNOS含量的比較（±s）Tab.1 Comparison of NO and iNOS content of rats in each group（±s）

注：*表示與安靜組相比，P＜0.05；#表示與運(yùn)動(dòng)組相比P＜0.05，@表示與高劑量給藥組相比，P＜0.05。Note:*Compared with the quiet group,P＜0.05,#Compared with the exercise group,P＜0.05;@Compared with the high dose group,P＜0.05.

含量NO/（μmol·L-1）iNOS/（U·mL-1）安靜對(duì)照組 10 0.19±0.01 0.174±0.03組別 數(shù)量/只運(yùn)動(dòng)組 100.43±0.05* 0.57±0.05*低劑量運(yùn)動(dòng)給藥組 10中劑量運(yùn)動(dòng)給藥組 10 0.24±0.01*#@ 0.37±0.01*#@高劑量運(yùn)動(dòng)給藥組 10 0.20±0.02*# 0.31±0.02*#0.26±0.07*#@ 0.39±0.03*#@

由表1可知，運(yùn)動(dòng)組、低劑量給藥組、中劑量給藥組、高劑量給藥組NO、iNOS含量均大幅度高于安靜對(duì)照組，差異顯著（P＜0.05）；低劑量給藥組、中劑量給藥組、高劑量給藥組NO、iNOS均小于運(yùn)動(dòng)組，差異顯著（P＜0.05）；低劑量給藥組、中劑量給藥組NO、iNOS含量均高于高劑量給藥組，差異顯著（P＜0.05）。結(jié)果顯示，低劑量給藥組、中劑量給藥組、高劑量給藥組能抑制力竭運(yùn)動(dòng)造成的NO、iNOS含量增加，以高劑量給藥組效果最佳。

2.2 IL-1、IL-6含量測(cè)定

各組大鼠IL-1、IL-6的比較結(jié)果，見表2。

表2 各組大鼠IL-1、IL-6含量比較（±s）Tab.2 Comparison of IL-1 and IL-6 content in each group of rats（±s）

表2 各組大鼠IL-1、IL-6含量比較（±s）Tab.2 Comparison of IL-1 and IL-6 content in each group of rats（±s）

注：*表示與安靜組相比，P＜0.05；#表示與運(yùn)動(dòng)組相比P＜0.05；@表示與高劑量給藥組相比，P＜0.05。Note:*Compared with the quiet group,P＜0.05,#Compared with the exercise group,P＜0.05,@Compared with the high dose group,P＜0.05.

含量IL-1β/（pg·mL-1）IL-6/（pg·mL-1）安靜對(duì)照組 10 28.62±4.86 49.88±5.91組別 數(shù)量/只運(yùn)動(dòng)組 1046.32±5.09* 97.76±9.02*低劑量運(yùn)動(dòng)給藥組 10中劑量運(yùn)動(dòng)給藥組 10 36.33±3.31*#@86.31±6.04*#@高劑量運(yùn)動(dòng)給藥組 10 33.21±4.21*# 81.26±6.07*#37.21±3.22*#@86.26±7.11*#@

由表2可知，運(yùn)動(dòng)組、低劑量給藥組、中劑量給藥組、高劑量給藥組IL-1、IL-6均大幅度高于安靜對(duì)照組，差異顯著（P＜0.05）；低劑量給藥組、中劑量給藥組、高劑量給藥組IL-1、IL-6均小于運(yùn)動(dòng)組，差異顯著（P＜0.05）；低劑量給藥組、中劑量給藥組IL-1、IL-6均大于運(yùn)動(dòng)組，差異顯著（P＜0.05）。結(jié)果顯示，低劑量給藥組、中劑量給藥組、高劑量給藥組均能降低力竭運(yùn)動(dòng)引起的炎性因子升高，以高劑量組效果最佳。

3 討論

炎癥的產(chǎn)生受炎癥介質(zhì)調(diào)控，NO、iNOS是較典型的炎癥介質(zhì)。NO是強(qiáng)大的血管擴(kuò)張物質(zhì)，同時(shí)具備較強(qiáng)的毒性。NO是以L-精氨酸為底物，在一氧化氮合酶（NOS）催化下生成。葉邵凡等[12]的研究表明，大鼠在大強(qiáng)度運(yùn)動(dòng)、反復(fù)力竭運(yùn)動(dòng)時(shí)，肝組織中iNOS活性大量增加，導(dǎo)致NO生成過多。葉素英等[13]研究表明，小鼠在過度訓(xùn)練中，腦組織iNOS含量增加，NO的毒性代謝產(chǎn)物也相應(yīng)增加。本研究中，大鼠在反復(fù)力竭運(yùn)動(dòng)后，牛肝菌多糖能抑制骨骼肌組織中iNOS、NO增加，表明牛肝菌多糖能正向調(diào)控炎癥介質(zhì)的產(chǎn)生，對(duì)力竭運(yùn)動(dòng)導(dǎo)致的骨骼肌炎癥有較好的調(diào)理作用。

IL-1、IL-6是典型的細(xì)胞因子，在炎癥反應(yīng)中發(fā)揮介導(dǎo)免疫細(xì)胞增值、活化的作用。IL-1、IL-6是較典型的促炎因子，在正常的生理情況下，細(xì)胞促炎因子與抗炎因子處于動(dòng)態(tài)平衡狀態(tài)。張富婷等[14]研究證實(shí)，大強(qiáng)度或者力竭運(yùn)動(dòng)時(shí)，機(jī)體炎癥動(dòng)態(tài)平衡被打破，促炎因子活性增加，從而引起炎癥反應(yīng)。本研究中，大鼠力竭運(yùn)動(dòng)中IL-1、IL-6大幅度增加，而牛肝菌多糖能抑制上述現(xiàn)象。結(jié)果表明，牛肝菌多糖能正向調(diào)整機(jī)體的炎癥狀態(tài)，抑制機(jī)體促炎因子活性的增加。可能是牛肝菌多糖能抑制iNOS的活性，減少NO毒性物質(zhì)的產(chǎn)生，從而抑制促炎因子的活性，抑制炎癥的產(chǎn)生。

4 結(jié)論

反復(fù)力竭運(yùn)動(dòng)導(dǎo)致機(jī)體骨骼肌iNOS、NO含量的增加，從而導(dǎo)致機(jī)體促炎因子IL-1、IL-6活性增加，引發(fā)骨骼肌炎癥反應(yīng)。牛肝菌多糖能抑制上述狀況的發(fā)生，效果以高劑量給藥組為佳，與牛肝菌多糖正向調(diào)控炎癥介質(zhì)，從而導(dǎo)致促炎因子活性降低有關(guān)。