恒溫無酶核酸擴增用于microRNA分析的研究進展

龔珂珂，李豐哲，王 紅，王富安

(武漢大學化學與分子科學學院，湖北武漢 430072)

1 引言

癌癥是一種危害人類健康的重要疾病。雖然相關診療方法已經取得了一定的進展，但是癌癥仍然是導致我國人口死亡的主要原因之一。MicroRNA(miRNA)長約18～25個堿基，具有高度保守性，是一類在真核細胞中發現的內源性單鏈非編碼RNA[1]。miRNA在多種生理過程中發揮著重要作用，包括細胞增殖、侵襲、轉移以及凋亡等。最近，越來越多的臨床數據表明，miRNA表達水平的失調與人類某些疾病(如癌癥)密切相關，因而它們可用作潛在的癌癥標志物[2]。miRNA的高靈敏度和高特異性檢測，不僅在生物學研究領域引起廣泛的關注，而且在多種疾病的分類、診斷以及預后方面也具有重要研究價值[3-5]。由于miRNA具有序列短、同源性高以及豐度低等特性，對其檢測存在一定的難度[6]。

傳統的miRNA檢測方法主要有逆轉錄聚合酶鏈反應(RT-PCR)[3,7]、Northern印記[8,9]、微陣列技術[10,11]等。然而這些方法存在操作繁瑣、檢測靈敏度低等缺點。核酸擴增作為一種現代miRNA檢測方法，尤其是恒溫核酸擴增，因為操作簡單、反應條件溫和且擴增效率高，所以備受研究者們的關注。目前已經發展了許多基于恒溫核酸擴增的miRNA分析方法，這些方法根據反應過程中是否有蛋白酶參與，可以分為酶介導的恒溫核酸擴增和恒溫無酶核酸擴增。由于恒溫無酶核酸擴增無需價格昂貴且穩定性差的蛋白酶參與，在miRNA分析方面具有良好的應用前景。本文簡要介紹了一些用于miRNA檢測的恒溫無酶核酸擴增方法，為研究者們探索高靈敏度和高特異性的miRNA分析方法提供參考。……