西藏班戈縣牦牛病毒性腹瀉病抗體血清學檢測及分析

甘富斌，羅潤波，扎西次仁，白瑪桑珠，扎西旺杰，索朗斯珠*

（1.林芝市農(nóng)業(yè)農(nóng)村局畜牧獸醫(yī)站動物疫病預(yù)防控制中心，西藏 林芝 860000；2.西藏農(nóng)牧學院，西藏 林芝 860000；3.西藏那曲市班戈縣農(nóng)牧科學技術(shù)服務(wù)站，西藏 班戈 852501）

牛病毒性腹瀉病（Bovine Viral Diarrhea，BVD），是由牛病毒性腹瀉病毒(Bovine Viral Diarrhea Virus，BVDV，BVDV)感染牛，引起的以發(fā)熱、黏膜糜爛潰瘍、白細胞減少、腹瀉、咳嗽及懷孕母牛流產(chǎn)或產(chǎn)出畸形胎兒為主要特征的一種傳染病[1]。各年齡階段的牛都易感，其次為牦牛、水牛、山羊、綿羊、豬及駱駝和鹿等多種野生反芻動物[2]。從1980年有報道至今該病在我國迅速蔓延，流行廣泛[3-5]。我國將其列為三類動物疫病[6]。為調(diào)查西藏班戈縣牦牛群中病毒性腹瀉病的流行情況，2019年采用隨機抽樣的方法對班戈縣10個鄉(xiāng)鎮(zhèn)進行了牦牛血清的采集。利用酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）對血清中抗體進行了檢測。

1 材料和方法

1.1 血清

2019年4月至6月從西藏班戈縣10個鄉(xiāng)鎮(zhèn)共采集牦牛血清455頭份。

1.2 實驗儀器

酶標儀（雷杜公司，型號：RT-2100C）、恒溫培養(yǎng)箱（上海博迅實業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠，型號：BSC-250）、離心機（金壇市盛藍儀器制造有限公司，型號：TGL-12B）、移液器（eppendorf，100μL、10μL、300μL排槍）、純水儀（杭州東邦科技有限公司，型號：DB-S）。

1.3 實驗材料

牛病毒性腹瀉抗體酶聯(lián)免疫分析試劑盒（上海瀘鼎生物科技有限公司提供，產(chǎn)品批號：19-0827-D15）

1.4 試驗方法

雙抗原夾心法，具體操作依照試劑盒說明。

試驗有效性：陽性對照孔平均值≥1.00；陰性對照平均值≤0.10。

臨界值（CUT OFF）計算：臨界值=陰性對照孔平均值+0.15。

陰性判定：樣品OD值＜臨界值（CUT OFF）者為牛病毒性腹瀉抗體（BVDVAb）陰性；陽性判定：樣品 OD 值≥ 臨界值（CUT OFF）者為牛病毒性腹瀉抗體（BVDV Ab）陽性。

2 結(jié)果

本次試驗結(jié)果顯示，陰陽性對照孔成立，試驗有效。具體試驗結(jié)果見表1。

實驗結(jié)果顯示，本次共檢測牦牛血清455頭份，陽性血清36頭份，總體陽性率7.91%。各鄉(xiāng)鎮(zhèn)抗體陽性差異較大，其中新吉鄉(xiāng)、保吉鄉(xiāng)陽性率最高，分別是20%和19.57%。普保鎮(zhèn)和佳瓊鎮(zhèn)未檢出陽性血清，陽性率為0。

3 討論

班戈縣455頭份牦牛血清抗體檢測結(jié)果顯示總體陽性率7.91%。結(jié)合流行病學調(diào)查顯示，當?shù)鼐催M行牛病毒性腹瀉病的疫苗免疫工作，表明班戈縣牦牛群中有病毒性腹瀉病的流行，為保障當?shù)仃笈ｐB(yǎng)殖業(yè)的健康發(fā)展，需采取相應(yīng)的防治措施。有條件的養(yǎng)殖戶、養(yǎng)殖場應(yīng)該進行病毒性腹瀉病的篩查工作，淘汰陽性牛，同時對健康牛進行疫苗接種。發(fā)病牛采取隔離治療，治療原則以抗病毒、調(diào)節(jié)胃腸功能和酸堿平衡、清熱、解毒、強心、補液、消炎、止血等對癥治療和綜合療法為主[7-8]。

實驗結(jié)果顯示不同鄉(xiāng)鎮(zhèn)之間牦牛病毒性腹瀉病血清抗體陽性情況差異較大，陽性率在0～20%。產(chǎn)生這種現(xiàn)象的原因可能是各鄉(xiāng)鎮(zhèn)采樣具有隨機性，樣本量不夠大或者不具有代表性，導致檢測結(jié)果差異較大。也可能是因為班戈縣各鄉(xiāng)鎮(zhèn)轄區(qū)面積較大，相互之間牦牛交易較少，各鄉(xiāng)鎮(zhèn)之間疾病的流行情況存在一定的差異。

劉夢媛[9]等人在2011年采集了西藏的287頭份牦牛血清進行了牛病毒性腹瀉抗體檢測，結(jié)果檢出陽性血清樣品145頭份,陽性率為53.65%；程少龍[10]等人2014-2016年期間先后從西藏不同地區(qū)采集牦牛血清920份,采用ELISA法進行血清抗體檢測。結(jié)果顯示西藏牦牛病毒性腹瀉血清平均抗體陽性率48.70%。羅潤波[11]等人2017年對西藏184頭份牦牛血清進行了抗體檢測，結(jié)果顯示陽性血清數(shù)11頭份，陽性率5.98%。以上文獻數(shù)據(jù)顯示，西藏牦牛病毒性腹瀉病各地血清抗體陽性率差異較大。這可能與各地牦牛感染情況、檢測時間、動物身體狀況及所使用的檢測試劑盒有關(guān)。但結(jié)果均顯示 西藏牦牛群中有該病的流行。

表1 班戈縣牦牛病毒性腹瀉病抗體檢測結(jié)果