大鯢活性肽牡蠣多糖復合粉體外ACE 抑制作用的研究

紀錢萍，李 偉，佟長青

（大連海洋大學 食品科學與工程學院，遼寧大連 116023）

研究表明，全世界的高血壓患者已占世界總人口的1/3，并且患病比例逐年增加[1]。其中，腎素-血管緊張素-醛固酮系統在高血壓的發生、發展中起著重要作用，血管緊張素-II 能夠導致血壓的暫時升高[2]。血管緊張素轉化酶（ACE） （EC 3.4.15.1）催化血管緊張素I 轉變成具有活性的血管緊張素II。抑制ACE 活性的物質往往具有潛在的抑制高血壓發生的活性，因此常常利用抑制ACE 活性試驗來篩選這類物質。

肽類和多糖類物質的抗高血壓作用有很多研究報道[3-5]。前期研究證明了牡蠣多糖對高血壓模型Wistar 大鼠的降血壓活性[6]。結合企業的生產實際，將大鯢肽與牡蠣多糖進行組合，制備成具有協同抗高血壓活性的復合粉，為其在保健食品中的應用提供基礎數據。

1 材料與方法

1.1 材料

大鯢活性肽，張家界（中國） 金馳大鯢生物科技有限公司提供；馬尿酰- 組氨酰- 亮氨酸（N-hippuryl-His-Leu hydrate，HHL）、血管緊張素轉化酶（Angiotensin converting enzyme，ACE），美國Sigma 公司提供；其他試劑均為國產分析純。

牡蠣多糖按照石璇等人[6]的方法制備。

1.2 儀器與設備

高效液相色譜儀，大連依利特分析儀器有限公司產品；Hypersil BDS C18色譜柱。

1.3 ACE 活性測定

將牡蠣多糖配制成質量濃度為8 mg/mL 的溶液，大鯢活性肽配制成質量濃度為2 mg/mL 的溶液，然后分別按照5∶1，3∶1，1∶1，1∶3，1∶5 體積比進行混合，制備成大鯢活性肽牡蠣多糖復合粉溶液。5∶1 復合粉溶液的牡蠣多糖質量濃度為6.67 mg/mL，大鯢肽質量濃度為0.33 mg/mL；3∶1 復合粉溶液的牡 蠣多糖質量濃度為6 mg/mL，大鯢肽質量濃度為0.5 mg/mL；1∶1 復合粉溶液的牡蠣多糖質量濃度為4 mg/mL，大鯢肽質量濃度為1 mg/mL；1∶3 復合粉溶液的牡蠣多糖質量濃度為2 mg/mL，大鯢肽質量濃度為1.5 mg/mL；1∶5 復合粉溶液的牡蠣多糖質量濃度為1.33 mg/mL，大鯢肽質量濃度為1.67 mg/mL。

使用大連依利特Hypersil BDS C18色譜柱，檢測波長設定為228 nm，進樣量20 μL，流速1 mL /min；流動相為30 %甲醇（0.1%三氟乙酸TFA 和0.05%冰醋酸，pH 值3.0～3.3）；柱溫為25 ℃。

在離心管中加入5 μL 樣品溶液和15 μL ACE（60 mU/mL） 混勻后于37 ℃條件下水浴5 min，之后加入25 μL HHL（7.6 mmol/L） 于37 ℃條件下水浴反應25 min，隨后加入10%三氟乙酸溶液10 μL用來終止反應，最后加入150 μL 超純水混勻。用1 mL 的注射器將反應液過0.22 μm 的過濾膜，于波長228 nm 處使用高效液相色譜紫外檢測器對濾液進行檢測，記錄出峰時間和面積，空白試驗用等體積的超純水代替樣品溶液。樣品溶液對ACE 活性的抑制率計算公式是：

式中：M——空白組馬尿酸的峰面積；

N——樣品中馬尿酸的峰面積。

2 結果與分析

2.1 大鯢活性肽ACE 抑制活性

通過大鯢活性肽ACE 抑制活性測定試驗，發現大鯢活性肽具有很好的抑制ACE 活性。

大鯢活性肽ACE 抑制活性見圖1。

由圖1 可知，在大鯢活性肽質量濃度5 mg/mL時，對ACE 抑制率達到75.78%，ACE 抑制率隨著大鯢活性肽質量濃度的增加而增加，具有質量濃度依賴性。大鯢活性肽是通過大鯢肉酶解制備的分子量小于2 000 Da 的肽，具有較好的抗氧化活性[7]。張江濤等人[8]研究林蛙低聚肽的抗氧化活性與ACE 抑制作用，發現林蛙低聚肽具有較好的抗氧化活性和ACE 抑制作用。

2.2 牡蠣多糖ACE 抑制活性

通過牡蠣多糖的ACE 抑制活性測定試驗，發現牡蠣多糖具有一定的抑制ACE 活性。

牡蠣多糖ACE 抑制活性見圖2。

由圖2 可知，在牡蠣多糖質量濃度9 mg/mL 時，對ACE 抑制率為33.40%，ACE 抑制率隨著牡蠣多糖質量濃度的增加而增加，具有質量濃度依賴性。石璇等人[6]的研究表明，牡蠣多糖對高血壓模型Wistar大鼠具有較好的降血壓活性。但是，在試驗質量濃度范圍內，牡蠣多糖抑制ACE 的活性并不強，這表明降血壓模型的不同會導致結果產生差異。另一方面，也說明牡蠣多糖與ACE 的活性部位的結合不是很緊密或者沒有結合于ACE 的活性部位。

3 大鯢活性肽牡蠣多糖復合粉的ACE 抑制活性

通過大鯢活性肽牡蠣多糖復合粉的ACE 抑制活性測定試驗，發現大鯢活性肽牡蠣多糖復合粉具有一定的抑制ACE 活性。

大鯢活性肽牡蠣多糖復合粉ACE 抑制活性見圖3。

由圖3 可知，在牡蠣多糖與大鯢活性肽溶液按體積比1∶1 混合時，即其中的牡蠣多糖質量濃度為4 mg/mL，大鯢活性肽的質量濃度為1mg/mL 時，對ACE 的抑制率達到61.27%，對照圖1 與圖2 的結果，可以看出牡蠣多糖與大鯢活性肽復合粉在抑制ACE 活性時產生了協同作用，一定質量濃度的牡蠣多糖與大鯢活性肽復合粉ACE 抑制率高于相應質量濃度的牡蠣多糖與大鯢活性肽的ACE 抑制率之和。

傳統降血壓藥卡托普利（Captopril） 是一種具有類多肽結構的ACE 抑制劑[9]。由此可見，多肽結構是ACE 抑制劑的潛在侯選對象。大鯢活性肽溶液與牡蠣多糖溶液混合，導致大鯢活性肽的空間結構發生變化，產生了更好的ACE 抑制活性。

4 結論

通過體外ACE 抑制作用試驗發現，大鯢活性肽具有較好的抑制ACE 作用，牡蠣多糖具有一定的抑制ACE 作用。大鯢活性肽牡蠣多糖復合粉在抑制ACE 活性時產生了協同作用，一定質量濃度的大鯢活性肽牡蠣多糖復合粉對ACE 抑制率高于相應質量濃度的大鯢活性肽與牡蠣多糖對ACE 抑制率之和。研究結果為下一階段對大鯢肽牡蠣多糖復合粉在協同抑制ACE 作用的機理研究提供了良好的基礎，也為具有降血壓作用的大鯢肽牡蠣多糖復合粉保健食品的開發提供了基礎數據。