糞便鈣衛(wèi)蛋白檢測在早產(chǎn)兒壞死性小腸結腸炎的應用

方凌毓 童小梅 傅春燕 許景林 陳冬梅

壞死性小腸結腸炎是多發(fā)于新生兒時期的嚴重消化道疾病，也是導致早產(chǎn)兒、低體質量兒死亡的重要原因。疾病初期無其他特異性癥狀，常規(guī)實驗室檢查在診斷壞死性小腸結腸炎中缺乏特異性，導致行腹部X線確診時病情已處于危重狀態(tài)[1-2]。鈣衛(wèi)蛋白是反映急性炎癥反應的標志物，而糞便中的鈣衛(wèi)蛋白（fecal calprotectin，F(xiàn)C）是中性粒細胞的標志性蛋白，與腸道炎癥間存在密切聯(lián)系，其水平的高低可反映腸道炎癥的嚴重程度，因其具有較高的敏感性及特異性，可將其用于評估腸道疾病嚴重程度的重要指標[3-4]。基于此，本研究分析FC在早產(chǎn)兒壞死性小腸結腸炎中的應用效果，現(xiàn)報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2018年3月-2019年9月筆者所在醫(yī)院新生兒科收治的早產(chǎn)兒壞死性小腸結腸炎（NEC）患兒25例作為觀察組。NEC診斷標準：按照文獻[5]《實用新生兒學》（第4版）修正Bell分期標準進行診斷和分期，選擇Ⅱ期及以上的病例作為確診病例。納入標準：符合上述診斷標準，伴有體溫不穩(wěn)定、呼吸暫停、血小板降低、代謝性酸中毒；胃內殘奶量增加，糞便中帶血，腸鳴音消失，大便潛血陽性，腹部壓痛明顯；腹部X線平片顯示腸充氣或功能性梗阻，或腸壁囊樣積氣，或門靜脈積氣。排除標準：存在其他消化系統(tǒng)疾??；合并其他系統(tǒng)感染性疾病者。其中男14例，女11例；出生胎齡29～35周，平均（31.86±1.06）周；出生體重（1 473.29±68.44）g；疾病嚴重程度：Ⅱ級16例，Ⅲ級9例。另選取同期住院的無胃腸道疾病早產(chǎn)兒按出生胎齡、出生體重和入院時間進行1∶1配對，共25例作為對照組，男12例，女13例；出生胎齡29～35周，平均（31.72±1.13）周；出生體重（1 556.42±59.38）g。兩組一般資料比較，差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。本研究對象家屬均簽署知情同意書

1.2 方法

觀察組患兒于禁食24h、72 h及重新開奶時留取糞便樣本，對照組僅留取觀察組患兒禁食24 h和開奶同日的糞便樣本，糞便量0.5～1.0 g，所有收集的糞便樣本均放入無菌塑料管中，隨后將糞便樣本放置于-70 ℃冰箱（美國Thermo Scientific公司）內無菌密封冷凍，從-70 ℃低溫冰箱內將糞便樣本取出，于室溫下解凍，將裝有3 ml稀釋液的15 ml離心管連同采樣勺一起稱重，刮取50 mg糞便樣本，放入裝有稀釋液的離心管中，隨后將樣本放置于型號為QL-901渦旋混合儀上，待樣本無明顯塊狀時放置于德國Heraeus公司生產(chǎn)的離心機內行離心處理，設置離心機轉速為5 000 r/min，離心處理5 min后留取上層清液。取50 μl上層清液放置于700 μl稀釋液中，于1.5 ml EP試管中，充分混勻。另取90 μl至FC檢測卡，計時15 min后進行檢測，檢測所得結果×4.5即為實際FC濃度，若檢測值<15 μg/g（低濃度樣本），建議稀釋5倍，結果×5×15/50（1.5）即為FC濃度；若檢測值>2 100 μg/g（高濃度樣本），建議稀釋60倍，結果×60×15/50（18）即為FC濃度。

1.3 觀察指標

檢測觀察組在禁食24、72 h及重新開奶時的FC水平，分別表示為FC1、FC2、FC3，于觀察組患兒禁食24 h和開奶同日檢測對照組FC濃度，分別表示為FC1、FC3；對比禁食時觀察組及對照組FC水平，比較觀察組不同疾病分期患兒在禁奶24、72 h及重新開奶時FC水平；采用ROC曲線分析FC在早產(chǎn)兒壞死性結腸炎中的診斷價值。

1.4 統(tǒng)計學處理

采用SPSS 22.0軟件進行數(shù)據(jù)處理，計量資料以（±s）表示，采用t檢驗；計數(shù)資料以率（%）表示，采用χ2檢驗，P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 兩組FC水平比較

觀察組FC1水平高于對照組，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05），兩組FC3水平比較差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05），見表1。

表1 兩組FC水平比較 [μg/g，（±s）]

表1 兩組FC水平比較 [μg/g，（±s）]

組別 FC1 FC3觀察組（n=25） 2 547.34±784.39 130.76±43.28對照組（n=25） 180.50±25.37 134.36±56.73 t值 15.079 -0.252 P值 <0.001 0.802

2.2 觀察組不同分期FC水平比較

觀察組Ⅲ期FC1、FC2水平均高于Ⅱ期，差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.05），不同分期FC3水平比較差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05），見表 2。

表2 觀察組不同分期FC水平比較 [μg/g，（±s）]

表2 觀察組不同分期FC水平比較 [μg/g，（±s）]

分期 FC1 FC2 FC3Ⅱ期NEC（n=16） 2 504.48±639.22 735.21±106.37 129.86±38.54Ⅲ期NEC（n=9） 4 382.29±803.16 1 972.38±92.48 138.30±45.39 t值 -6.433 -29.180 -0.439 P值 <0.001 <0.001 0.626

2.3 診斷價值

繪制FC濃度診斷早產(chǎn)兒壞死性小腸結腸炎的ROC曲線，截斷值為1 174.95 μg/g，靈敏度為92%，特異度為92%，約登指數(shù)為84%，曲線下面積為0.941，見圖1。

圖1 FC的ROC曲線

3 討論

目前，對于早產(chǎn)兒壞死性小腸結腸炎發(fā)病機制暫無明確定義，認為壞死性小腸結腸炎的發(fā)生與未發(fā)育成熟的腸道上皮細胞及對各種損傷因素間產(chǎn)生的不可控性級聯(lián)炎癥反應存在密切聯(lián)系[6]。由于早產(chǎn)兒壞死性小腸結腸炎早期病情無典型癥狀，傳統(tǒng)實驗室檢查在診斷壞死性小腸結腸炎中缺乏特異性及敏感性，而行常規(guī)腹部X線檢查在確診時病情已發(fā)展為危重期[7-8]。故早期診斷及治療干預對改善患兒預后具有重要作用。

醫(yī)學研究顯示，炎癥反應與壞死性小腸結腸炎的發(fā)生存在密切聯(lián)系[9]。正常生理條件下，維持人體腸道內環(huán)境的穩(wěn)定需保持抗炎及促炎間處于平衡狀態(tài)。一旦發(fā)病，抗炎及促炎間的平衡將被打破，在促炎因子等作用下，炎癥細胞將在腸道黏膜中逐漸聚集、趨化，最終引發(fā)腸道損傷。鈣衛(wèi)蛋白是從中性粒細胞中分離出來的一種具有抗微生物作用的蛋白，與鈣離子結合后具有較好的抗蛋白酶活性。故鈣衛(wèi)蛋白結構不會被細菌或各種酶所破壞，可在外界環(huán)境及腸腔內得到長時間保存，同時保持其狀態(tài)穩(wěn)定[10]。此外，鈣衛(wèi)蛋白在人體內分布較為廣泛，于血清、糞便、腦脊液等組織中均檢測到，在臨床上多用于診斷炎癥性腸病。壞死性結腸炎是與腸道炎癥反應密切相關的疾病，當腸道炎癥反應發(fā)生時，中性粒細胞等炎癥細胞極易滲出腸腔，使得炎癥細胞因子水平明顯上升，加之新生兒自身腸道屏障發(fā)育不成熟，腸道通透性較高，大大增加腸腔中中性粒細胞數(shù)量[11-12]。本研究結果顯示，觀察組FC水平高于對照組，表明患兒在發(fā)生腸道炎癥時，中性粒細胞向腸腔排出量明顯增多，釋放出大量的鈣衛(wèi)蛋白，使得FC水平較高。FC水平在疾病早期出現(xiàn)明顯上升現(xiàn)象，在懷疑患兒為壞死性小腸結腸炎時，可通過對FC水平的測定明確病情。觀察組Ⅲ期FC1、FC2水平均高于Ⅱ期，且不同分期FC3水平比較差異無統(tǒng)計學意義，提示FC水平隨著病情嚴重程度的增加而增加，禁食后隨著胃腸道的恢復，F(xiàn)C水平明顯下降，故可將FC水平的測定作為腸道損傷嚴重程度及恢復的指標，可有效避免因長時間禁食導致的生長發(fā)育遲緩等，同時還可避免過早腸內喂養(yǎng)所引發(fā)的腸道損傷加重病情。FC值為1 174.95 μg/g時，在早產(chǎn)兒壞死性結腸炎診斷中敏感度和特異度均92%，曲線下面積為0.941。由此可見，對FC水平實施動態(tài)監(jiān)測有助于及時發(fā)現(xiàn)疾病，同時還可用于評判疾病的治療效果。

綜上所述，對早產(chǎn)兒實施動態(tài)FC監(jiān)測，有助于盡早發(fā)現(xiàn)壞死性小腸結腸炎，同時可給予輔助評判疾病的治療效果，從而預測重新腸內喂養(yǎng)時機，具有較高的推廣價值。