深圳某三甲醫(yī)院擬輸血住院患者血型不規(guī)則抗體分布特點(diǎn)及臨床意義探討

林曉斌 郭華 林麗云 白露

血型不規(guī)則抗體是指ABO血型系統(tǒng)以外其他血型系統(tǒng)（如Rh、MNS及Lewis血型系統(tǒng)）的抗體，多為IgG型抗體，易導(dǎo)致急性或遲發(fā)性輸血反應(yīng)，是導(dǎo)致溶血性輸血反應(yīng)、新生兒溶血癥、紅細(xì)胞輸注無效及輸血科疑難交叉配型的主要原因之一[1-3]。隨著輸血技術(shù)的不斷發(fā)展和完善，輸血前血型較準(zhǔn)確地鑒定能有效地減少甚至杜絕了ABO血型不合所導(dǎo)致的輸血不良反應(yīng)，但由不規(guī)則抗體所引起的溶血性輸血反應(yīng)等多種輸血不良反應(yīng)時有發(fā)生，嚴(yán)重危害患者生命安全，已成為目前引起輸血不良反應(yīng)的關(guān)鍵因素，但不同地區(qū)和人群不規(guī)則抗體類型分布存在很大差異[4-7]。因此，不同地區(qū)加強(qiáng)輸血前不規(guī)則抗體及特異性分布檢查是臨床輸血安全和優(yōu)化用血管理的保證，對提高臨床輸血安全性具有重要意義。為此，本研究對深圳市人民醫(yī)院19 270例擬輸血住院患者的不規(guī)則抗體及特異性進(jìn)行了調(diào)查分析，旨在了解本地區(qū)住院患者不規(guī)則抗體篩查陽性率及特異性分布特點(diǎn)，并探討其臨床意義，現(xiàn)報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集2018年2月-2019年12月在深圳市人民醫(yī)院住院擬輸血患者19 270例，納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）符合臨床輸血適應(yīng)證；（2）有輸血指征；（3）住院患者；（4）有完整的臨床資料信息（如有無輸血和/或妊娠史）。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）嚴(yán)重肝、腎功能不全；（2）近1個月內(nèi)應(yīng)用免疫抑制劑及糖皮質(zhì)激素類藥物；（3）不能確定是否有輸血者；（4）目前正在輸血者。本研究已經(jīng)醫(yī)院倫理委員會同意批準(zhǔn)，所有患者或家屬均對本研究知情并簽訂知情同意書。其中男7 950 例，女11 320例；年齡2～78歲，平均（41.02±18.65）歲；有輸血或妊娠史10 681例，無輸血及妊娠史6 506例，有輸血及妊娠史2 083例。

1.2 方法

儀器與試劑：不規(guī)則抗體檢測試劑盒、抗體鑒定譜細(xì)胞及微柱凝膠檢測卡均由長春博德生物技術(shù)有限公司提供；Diana全自動血型鑒定儀、孵育器及離心機(jī)均由西班牙Grifol公司提供。

采用一次性真空采血管采集擬輸血住院患者靜脈血2～3 ml于EDTA-K2抗凝管內(nèi)，顛倒充分混勻后及時送檢。

收到標(biāo)本后于室溫下離心5 min（離心半徑18 cm，3 000 r/min），分離血漿。采用微柱凝膠技術(shù)檢測血漿中不規(guī)則抗體，分別取50 μl抗體篩選細(xì)胞和25 μl患者血漿于凝膠各孔中，37 ℃孵育15 min，然后離心9 min，判定結(jié)果。對不規(guī)則抗體篩查陽性結(jié)果標(biāo)本，采用抗體鑒定譜細(xì)胞進(jìn)行特異性分析，取抗人球蛋白微柱凝膠11孔，于每孔中加入50 μl對應(yīng)譜細(xì)胞和25 μl患者血漿，37 ℃孵育15 min，然后離心9 min，判定結(jié)果，根據(jù)譜細(xì)胞反應(yīng)判定抗體特異性。所有操作均嚴(yán)格按照微柱凝膠卡片法操作說明書進(jìn)行。

結(jié)果判定：（1）不規(guī)則抗體篩查結(jié)果判定。紅細(xì)胞與相應(yīng)的抗體結(jié)合并于凝膠柱的中上層出現(xiàn)凝聚者為陽性；紅細(xì)胞未與相應(yīng)的抗體結(jié)合并于凝膠柱的底層發(fā)生聚集現(xiàn)象者為陰性。（2）不規(guī)則抗體特異性結(jié)果判定。患者血漿與自身細(xì)胞無凝聚，而與部分抗體鑒定譜細(xì)胞出現(xiàn)凝聚者為特異性抗體；患者血漿與抗體鑒定譜細(xì)胞和自身細(xì)胞均出現(xiàn)凝聚者為非特異性抗體，并以反應(yīng)格局與相應(yīng)抗原反應(yīng)的陰、陽性來判斷其具體類型。

1.3 統(tǒng)計學(xué)處理

本研究數(shù)據(jù)采用SPSS 22.0統(tǒng)計學(xué)軟件進(jìn)行分析和處理，計量資料以（±s）表示，采用t檢驗，計數(shù)資料以率（%）表示，采用χ2檢驗，P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 不規(guī)則抗體篩查結(jié)果

19 270例擬輸血住院患者中共檢出不規(guī)則抗體陽性103例，陽性率為0.53%（103/19 270）；其中男性為0.21%（17/7 950），女性為0.76%（86/11 320），女性不規(guī)則抗體陽性率明顯高于男性，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）；有輸血及妊娠史患者不規(guī)則抗體陽性率高于有輸血或妊娠史患者、無輸血及妊娠史患者，且有輸血或妊娠史患者高于無輸血及妊娠史患者，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），見表1、表2。

表1 不規(guī)則抗體篩查結(jié)果

2.2 不同臨床科室不規(guī)則抗體陽性率比較

103例不規(guī)則抗體陽性患者中，風(fēng)濕免疫科檢出率最高，占1.03%（29/2 815），其次為腫瘤科、消化內(nèi)科及血液科，分別占0.72%（20/2 778）、0.57%（18/3 168）及0.51%（8/1 572），不同臨床科室患者不規(guī)則抗體陽性率比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=15.905 4，P<0.01），見表 2。

表2 不同臨床科室不規(guī)則抗體陽性率比較

2.3 103例不規(guī)則抗體陽性患者抗體特異性分布

103 例不規(guī)則抗體陽性患者中鑒定出89例特異性抗體，占86.41%（89/103），主要為Rh血型系統(tǒng)，占65.05%（67/103），以抗-E檢出率最高為37.86%；其次為MNS血型系統(tǒng)，占11.65%（12/103），以抗-M檢出率最高為6.80%；非特異性抗體14例，占13.59%（14/103），以自身抗體+同種抗體檢出率最高為5.83%，見表3。

3 討論

血型不規(guī)則抗體是指抗-A和抗-B以外的其他血型系統(tǒng)抗體，大多數(shù)是機(jī)體在妊娠或/和同種異體輸血等因素刺激作用下產(chǎn)生的，可引起血型鑒定和交叉配血困難，也可引起紅細(xì)胞輸注無效、新生兒溶血病、免疫溶血性輸血反應(yīng)及自身免疫性溶血性疾病等多種輸血不良反應(yīng)，對患者的臨床輸血安全造成很大影響[8]。因此，根據(jù)《臨床輸血技術(shù)規(guī)范》明確規(guī)定，對交叉配血不合、有輸血史、妊娠史及短期內(nèi)接受多次輸血者，應(yīng)做不規(guī)則抗體篩查及特異性鑒定，并給予輸注相合的血液或成分血，避免輸注含有相應(yīng)抗原的紅細(xì)胞而導(dǎo)致無效輸血，甚至危及患者生命[9]。

有研究表明，每輸1 U紅細(xì)胞、血漿，被動免疫的風(fēng)險增加1%～2%，多次反復(fù)輸血后機(jī)體產(chǎn)生同種抗體概率上升至15%～20%，且女性由于妊娠等原因產(chǎn)生不規(guī)則抗體的機(jī)會進(jìn)一步升高[10]。同時不同地區(qū)因疾病種類、妊娠及輸血情況等諸多因素的不同，不規(guī)則抗體篩查陽性率之間存在一定差異。本研究結(jié)果顯示，深圳市人民醫(yī)院19 270例擬輸血住院患者共檢測出不規(guī)則抗體陽性103例，陽性率為0.53%，明顯低于牛懷瑛等[11]報道陜西延安地區(qū)的2.53%，與鄭興平[12]報道貴州地區(qū)的0.45%基本一致，而明顯高于Song等[13]報道陜西西安地區(qū)的0.30%、葉柳筠[2]報道廣西柳州地區(qū)的0.1%，這除了與以上不同因素有關(guān)外，還可能與各地機(jī)構(gòu)在不時間內(nèi)所收集的患者不同有關(guān)。本次結(jié)果還顯示，女性不規(guī)則抗體陽性率明顯高于男性，且同時有輸血及妊娠史患者不規(guī)則抗體陽性率明顯高于有輸血史或妊娠史患者，而有輸血史或妊娠史患者高于無輸血史或妊娠史患者，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），說明輸血和妊娠是導(dǎo)致患者產(chǎn)生不規(guī)則抗體的兩大因素，而女性同時存在著輸血和妊娠雙重被動免疫機(jī)會，使得女性不規(guī)則抗體陽性率明顯高于男性[14-15]。

表3 103例不規(guī)則抗體陽性患者抗體特異性分布

不同臨床科室因所收治的患者不同，所以不同科室患者的不規(guī)則抗體陽性率存在很大差異。本研究結(jié)果顯示，不規(guī)則抗體陽性率最高的科室是風(fēng)濕免疫科，這可能與風(fēng)濕免疫科的多數(shù)患者存在自身免疫功能紊亂、循環(huán)免疫復(fù)合物增多及反復(fù)輸注血制品等因素有關(guān)；其次為腫瘤科、消化內(nèi)科和血液科，這可能與這些科室的患者一般需要長期反復(fù)輸血有關(guān)，反復(fù)輸注血液制品是產(chǎn)生不規(guī)則抗體的主要原因之一[16]。

有研究表明，Rh血型系統(tǒng)抗體多為IgG抗體，可與輸入體內(nèi)有相應(yīng)抗原的紅細(xì)胞結(jié)合產(chǎn)生抗原抗體反應(yīng)，破壞輸入體內(nèi)的紅細(xì)胞，引起溶血性輸血反應(yīng)[6]。另外，IgG類抗體可通過胎盤進(jìn)入胎兒血液，若母嬰Rh血型不合，就會導(dǎo)致母親產(chǎn)生Rh不規(guī)則抗體進(jìn)入胎兒血液，從而引起嚴(yán)重的新生兒溶血病，是引起免疫性溶血反應(yīng)最常見的不規(guī)則抗體[17-18]。本研究結(jié)果顯示，103例不規(guī)則抗體中檢出Rh血型系統(tǒng)抗體67例，占65.05%，其中以抗-E為主占37.86%（39例），這可能除了與我國漢族人群E抗原的分布頻率較高約為47%，而輸血時未檢測獻(xiàn)血者及受血者的E抗原，隨機(jī)輸血從而使抗-E產(chǎn)生的機(jī)會明顯增多有關(guān)外，還可能與近年來我國普遍進(jìn)行RhD定型試驗，并實(shí)行RhD同型輸注，避免抗-D產(chǎn)生，從而導(dǎo)致抗-E成為常見不規(guī)則抗體等有關(guān)，已有不少文獻(xiàn)報道抗-E能引起的遲發(fā)型溶血和新生兒溶血反應(yīng)[10]，因此，建議將RhE定型試驗作為輸血前常規(guī)檢查，并實(shí)行RhE同型輸注，這樣有利于降低抗-E的產(chǎn)生，也可避免輸血不良反應(yīng)的發(fā)生。MNS血型系統(tǒng)抗體占11.65%（12例），以抗-M最為常見占6.80%（7例），其多為IgM抗體，在手術(shù)低溫麻醉狀態(tài)下易被激活抗體效應(yīng)，可引起溶血反應(yīng)[19]。Lewis血型系統(tǒng)抗體占6.80%（7例），以抗-Lea最為常見，僅有少數(shù)能引發(fā)免疫反應(yīng)，但一般不引起嚴(yán)重溶血反應(yīng)[20]。同時本研究還檢出3例Rh血型系統(tǒng)和其他稀有血型系統(tǒng)聯(lián)合抗體，另外非特異性抗體占13.59%（14例），主要見于自身抗體合并同種抗體，對此可通過除去自身抗體后再進(jìn)行血型、同種抗體鑒定及交叉配血；其次冷抗體，其通過與紅細(xì)胞發(fā)生凝集并結(jié)合補(bǔ)體而引起溶血[21-23]，對高效價冷抗體輸血患者，應(yīng)采用加溫儀將血液加溫至37 ℃后方可輸注。

綜上所述，血型不規(guī)則抗體是目前引起輸血不良反應(yīng)的主要原因，因此，加強(qiáng)輸血前不規(guī)則抗體篩查是減少輸血不良反應(yīng)發(fā)生的必要途徑，特別對有反復(fù)輸血史、妊娠史及自身免疫功能紊亂的患者更加引起重視。對檢出能引起輸血不良反應(yīng)的不規(guī)則抗體，應(yīng)及時選擇抗體對應(yīng)抗原陰性的同型血進(jìn)行輸注，而對于非特異性抗體應(yīng)采取相應(yīng)的措施進(jìn)行處理后再進(jìn)行輸注，以減少輸血不良反應(yīng)，確保臨床輸血安全。