番茄紅素聯合地塞米松治療雙硫侖樣反應的研究＊

陳星宇 胡薇 朱法蓉 邢琪 汪莉萍

雙硫侖樣反應是臨床最常見的藥物副反應之一，臨床常利用其副反應幫助嗜酒患者戒酒，故又稱戒酒硫樣反應[1]。雙硫侖樣反應臨床癥狀多樣，病情嚴重程度與藥物、酒精攝入量、患者體質等因素密切相關，個體差異大，病情輕重不一，嚴重影響患者工作與生活質量，更有甚者會有生命危險[2-3]。藥物與酒精的中間產物抑制乙醛脫氫酶活性導致乙醛代謝受阻并大量蓄積是目前雙硫侖樣反應機制的主流學說[4]。近年來隨著醫療衛生知識的普及，患病率得到了有效的控制，但是患者服用頭孢類藥物期間或停藥后攝入酒水的案例仍時有發生。當前，關于雙硫侖樣反應的研究幾乎以臨床案例分析為主，基于動物實驗的研究卻較少，本實驗參考劉非凡等[5-6]建立動物模型的方法及其研究成果，對番茄紅素和地塞米松緩解雙硫侖反應綜合征的作用機制進行進一步研究。

1 材料與方法

1.1 實驗動物

SPF級別的昆明種小鼠56只，25～35 g，雌雄各半，由濟南朋悅實驗動物繁育有限公司提供。實驗前3 d使小鼠自由攝食、飲水，適應實驗室環境。

1.2 藥品及試劑

番茄紅素（貨號：B20378，規格：20 mg粉劑，上海源葉生物科技有限公司）；地塞米松磷酸鈉（貨號：MB1536，規格：1 g粉劑，大連美侖生物科技有限公司）；頭孢哌酮鈉（貨號：CN00021511，規格：2 g粉針劑，麗珠集團麗珠制藥廠）；總超氧化物歧化酶活性測試盒（貨號：A001-3-2，規格：96 T，南京建成生物工程研究所）；丙二醛測試盒（貨號：A003-1，規格：100 T/96樣，南京建成生物工程研究所）；谷丙轉氨酶試劑盒（貨號：C009-2，規格：96 T，南京建成生物工程研究所）；乙醛脫氫酶活性測試盒（貨號：A075-1-1，規格：50管/48樣，南京建成生物工程研究所）；BCA蛋白濃度測定試劑盒（貨號：P0010S，規格：200 T，Beyotime）；乙酸（貨號：10000218，規格：500 ml，上海國藥集團化學試劑有限公司）；無水乙醇（國藥集團化學試劑有限公司）；食用油（嘉里糧油有限公司）。

1.3 方法

1.3.1 動物分組與處理 56只小鼠隨機分為7組（n=8）：正常組（N組）、模型組（O組）、地塞米松組（P組）、番茄紅素低、中、高劑量組（L組、M組、H組）、中劑量番茄紅素聯合地塞米松組（U組）。N組：生理鹽水灌胃（0.2 ml/10 g）、生理鹽水腹腔注射（0.2 ml/10 g）；O組：前3 d用濃度50%酒精灌胃（0.2 ml/10 g），后3 d于灌胃前1 h腹腔注射頭孢哌酮鈉（0.5 mg/g），其他各組動物模型均按照O組相同方法建立；P組：注射頭孢哌酮鈉1 h后給予腹腔注射0.002 mg/g地塞米松磷酸鈉液；L組、M組和H組：注射頭孢哌酮鈉1 h后給予食用油稀釋成低、中、高濃度（5、10、20 mg/kg）番茄紅素灌胃；U組：注射頭孢哌酮鈉1 h后給予腹腔注射0.002 mg/g地塞米松磷酸鈉液聯合10 mg/kg番茄紅素灌胃。

1.3.2 檢測指標及方法 各組動物最后1次腹腔注射60 min后處死小鼠，用生理鹽水灌注動物肝臟至發白，取肝臟凍存于-80 ℃，各組取肝臟及保存方法同上。取組織塊研磨制成10%組織勻漿，12 000 r/min，4 ℃，離心20 min，取上清液即10%勻漿上清液待測。樣本蛋白濃度、SOD、MDA、ALT、ALDH均按照相應試劑盒說明書步驟測試。

1.4 觀察指標

小鼠肝臟超氧化物歧化酶（SOD）活性、丙氨酸氨基轉移酶（ALT）活性、乙醛脫氫酶（ALDH）活性、丙二醛（MDA）含量。

1.5 統計學處理

采用SPSS 16.0統計軟件對數據進行分析，計量資料以（±s）表示，采用t檢驗及單因素方差分析，組間兩兩比較采用SNK-q檢驗，P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 各組小鼠肝臟SOD活性、MDA含量比較

L組及N組SOD活性高于O組，MDA含量與O組接近，但差異均無統計學意義（P>0.05）；M組和H組SOD活性均高于L組，MDA含量均低于L組，差異均有統計學意義（P<0.05），但M組及H組SOD活性、MDA含量比較差異無統計學意義（P>0.05）；P組及U組SOD活性均高于其余組，MDA含量均低于其余組，差異均有統計學意義（P<0.05），但P組及U組SOD活性、MDA含量比較差異無統計學意義（P>0.05），見表1。

2.2 各組小鼠肝臟ALT活性比較

O組ALT活性低于N組，但差異無統計學意義（P>0.05）；L組、M組和H組ALT活性均高于O組，但差異無統計學意義（P>0.05），L組、M組和H組ALT活性比較差異無統計學意義（P>0.05）；P組及U組ALT活性均高于其余組，差異均有統計學意義（P<0.05），但P組及U組ALT活性比較差異無統計學意義（P>0.05），見表1。

2.3 各組小鼠肝臟ALDH活性比較

O組ALDH活性低于N組，差異有統計學意義（P<0.05）；L組、M組和H組ALDH活性均高于O組，但差異無統計學意義（P>0.05），L組、M組和H組ALDH活性比較差異無統計學意義（P>0.05）；P組和U組ALDH活性均高于其余組，差異均有統計學意義（P<0.05），但P組及U組ALDH活性比較差異無統計學意義（P>0.05），見表1。

表1 各組小鼠肝臟中SOD、MDA、ALT、ALDH比較 （±s）

表1 各組小鼠肝臟中SOD、MDA、ALT、ALDH比較 （±s）

*與O組比較，P<0.05；其余統計分析結果以文字描述為準。

組別 SOD[U/（mg·prot）] MDA[nmol/（mg·prot）] ALT[U/（g·prot）] ALDH[U/（mg·prot）]N 組（n=8） 244.33±17.50 8.80±2.07 21.12±3.09 95.63±30.52*O 組（n=8） 168.42±21.89 9.97±3.10 14.98±2.09 60.52±6.88 P 組（n=8） 411.17±33.29* 4.40±1.48* 34.77±12.13* 142.76±17.17*L 組（n=8） 177.08±28.87 10.73±2.22 16.61±2.64 61.21±9.52 M 組（n=8） 260.21±31.14* 5.97±1.43* 24.45±6.75 64.50±14.78 H 組（n=8） 279.65±84.36* 6.13±2.30* 25.04±6.46 77.43±21.57 U 組（n=8） 472.47±98.37* 4.20±1.22* 36.52±5.98* 128.37±21.08*F值 35.78 13.16 13.28 25.44 P值 <0.05 <0.05 <0.05 <0.05

3 討論

雙硫侖樣反應是由于乙醛脫氫酶和多巴胺β-羥化酶功能的障礙中斷乙醇的正常代謝過程，進而乙醛、多巴胺代謝障礙、滯留、蓄積，隨后機體產生一系列的人體生理、病理的應激變化，最終形成一組典型的雙硫侖樣反應臨床綜合征[7]。正常代謝過程中，乙醇經細胞色素CYP2E1代謝后產生大量羥自由基、過氧化氫和超氧陰離子并促進體內氧自由基生成和脂質過氧化，誘發器官損傷，尤其是肝臟和神經系統[8-10]。同時，乙醛和氧自由基都極易與細胞內的蛋白質和其他復雜分子相互作用，形成稱為加合物的混合化合物，與蛋白形成的加合物與多種疾病相關（免疫相關疾病或心血管疾病）[11-14]。大量蓄積的乙醛與谷胱甘肽和半胱氨酸結合，使其失去清除自由基作用而產生大量羥基和自由基[15]，通過氧化應激和Ca2+失衡介導的內質網應激乙醛亦可在體外誘導神經毒性，乙醛還與肝損傷及致癌作用密切相關[16-17]。可見病理過程中產生的大量自由基對機體可產生潛在損傷，氧化應激可能造成的損傷不可忽視。

番茄紅素是目前自然界的植物中被發現的清除自由基的能力最強的抗氧化劑之一，其抗氧化能力其他胡蘿卜素遠不能及[18]。最近研究表明，番茄紅素可通過清除超氧陰離子、羥基自由基減輕血管內皮及平滑肌的氧化損傷，降低組織氧化應激反應改善脂質過氧化，拮抗肝臟線粒體膜脂質過氧化，具有抗氧化、抗血脂異常和器官保護的作用[19]。因此，番茄紅素緩解雙硫侖樣反應癥狀可能與清除自由基拮抗氧化應激反應和臟器保護有關。

本研究發現，地塞米松可通過提高乙醛脫氫酶活性對于降低病死率緩解臨床癥狀具有顯著作用，再一次證實乙醛脫氫酶活性受抑制是雙硫侖反應的重要機制。番茄紅素對于緩解雙硫侖樣反應癥狀具有一定療效，高濃度治療效果更佳，H組SOD活性增高（P<0.05），MDA含量降低（P<0.05），ALT和ALDH活性無顯著變化，可見，高劑量番茄紅素對緩解臨床癥狀和降低病死率與氧自由基含量密切相關，與乙醛脫氫酶活性相關性較低。P組和U組ALT活性均顯著增加，藥物治療造成的肝臟損傷可能與乙醛蛋白加合物和激素副作用有關。P組ALDH活性稍高于U組，其原因可能與聯合用藥稀釋了地塞米松磷酸鈉的濃度有關。U組SOD和ALDH活性均顯著增加MDA含量顯著降低，小鼠治療后恢復較快并且更精神活潑，可見在提高乙醛脫氫酶活性的基礎上增加機體抗氧化能力有益于雙硫侖樣反應小鼠快速康復。綜上所述，除乙醛脫氫酶活性受抑制外，自由基在雙硫侖樣反應過程中具有重要意義。另有文獻表明，地塞米松作為肝藥酶P450誘導劑增高乙醛脫氫酶活性，還可通過調節機體的NO水平進而提高機體抗氧化能力[22]。本實驗為雙硫侖樣反應臨床治療提供有力的理論依據，同時番茄紅素應用于雙硫侖樣反應的劑量、療效和肝臟保護作用仍需要進一步實驗探究。